检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：何来王云峰石星明崔红玉韩文雄兰德松王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室河北北方学院动物科技学院动物医学系

根据GenBank中已发表的传染性喉气管炎病毒全基因组序列（NC006233）设计引物,以传染性喉气管炎病毒WG株基因组为模板,PCR扩增糖蛋白gJ基因并对其序列分析。用DNAStar软件分析gJ蛋白的抗原性,选择抗原性强的140aa83aa片段,克隆并连接到... 详细信息

根据GenBank中已发表的传染性喉气管炎病毒全基因组序列（NC006233）设计引物,以传染性喉气管炎病毒WG株基因组为模板,PCR扩增糖蛋白gJ基因并对其序列分析。用DNAStar软件分析gJ蛋白的抗原性,选择抗原性强的140aa83aa片段,克隆并连接到原核表达载体pET-32a（+）中,转化BL2（1DE3）菌株。经IPTG诱导后,获得大小为65.2kD的重组蛋白,命名为r-gJ,表达量占菌体蛋白总量的60.8%;Western blot分析表明r-gJ具有较强的抗原性。

关键词：传染性喉气管炎病毒糖蛋白J(gJ) 序列分析表达抗原性

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表达尼帕病毒G囊膜糖蛋白重组牛痘病毒的研究

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微生物学报 2006年第4期46卷 644-648,I0005页

作者：王喜军王清华葛金英胡森步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 农业部青岛动物检疫所国家外来病诊断中心青岛266032

采用牛痘病毒WR株,构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV G蛋白基因的重组病毒rWR-NiV-G。Westernblot证实大小为66kDa的重组G蛋白在rWR-NiV-G感染的Hela细胞中获得表达;采用兔抗NiV高免血清间接免疫荧光检测重组痘病毒表达G蛋白显示出良... 详细信息

采用牛痘病毒WR株,构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV G蛋白基因的重组病毒rWR-NiV-G。Westernblot证实大小为66kDa的重组G蛋白在rWR-NiV-G感染的Hela细胞中获得表达;采用兔抗NiV高免血清间接免疫荧光检测重组痘病毒表达G蛋白显示出良好的特异免疫反应原性。rWR-NiV-G感染NiV敏感的BHK细胞系,并与NiV融合蛋白F共同表达,可形成强烈细胞融合现象。rWR-NiV-G感染免疫BALB/c小鼠,可诱导显著的NiV G蛋白特异体液免疫反应。以原核表达NiV G蛋白片段为包被抗原,间接ELISA检测rWR-NiV-G感染免疫小鼠血清中的G蛋白特异抗体,具有良好的敏感性和特异性。同时,rWR-NiV-G感染免疫小鼠血清中的G蛋白特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性。结果表明,重组牛痘病毒表达的NiV G蛋白有良好的免疫原性和生物学活性功能,为进一步深入研究NiV G蛋白生物学功能、免疫原性及重组活载体疫苗研究奠定了重要基础。

关键词：尼帕病毒 G蛋白重组牛痘病毒

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重组杆状病毒表达尼帕病毒融合蛋白和受体结合蛋白的研究

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生物工程学报 2006年第3期22卷 418-424页

作者：王喜军胡森葛金英王清华秦立廷步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 农业部青岛动物检疫所国家外来病诊断中心青岛266032

构建了表达尼帕病毒（Nipahvirus，NiV）囊膜功能糖蛋白F和G的重组杆状病毒rBac—NF、rBac-NG。Westem-blot证实大小分别为61kD和66kD的重组融合蛋白（rNF）和受体结合蛋白（rNG）分别在rBac—NF、rBac-NG感染的昆虫细胞中获得表达，并... 详细信息

构建了表达尼帕病毒（Nipahvirus，NiV）囊膜功能糖蛋白F和G的重组杆状病毒rBac—NF、rBac-NG。Westem-blot证实大小分别为61kD和66kD的重组融合蛋白（rNF）和受体结合蛋白（rNG）分别在rBac—NF、rBac-NG感染的昆虫细胞中获得表达，并且rNF前体F0可在昆虫细胞内进一步有效裂解为F1（～49kD）和F2；采用兔抗NiV病毒高免血清间接免疫荧光检测重组杆状病毒表达F和G蛋白显示出良好的特异免疫反应原性。以rBac。NF、rBac—NG感染的昆虫细胞裂解液稀释后直接包被ELISA板，间接ELISA检测兔抗灭活NiV全病毒高免血清中的F和G蛋白特异性抗体，同样具有良好的敏感性和特异性；以rBac—NF和rBac—NG感染昆虫细胞培养物直接免疫BALB／c小鼠，可诱导显著的NiVF和G蛋白特异体液免疫反应，产生的特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性。结果表明，杆状病毒表达重组F和G蛋白抗原具有替代NiV全病毒，作为安全、经济、敏感和特异的诊断抗原的潜力，并为重组病毒亚单位疫苗防制尼帕病毒性脑炎的探索研究奠定了基础。

关键词：尼帕病毒,融合蛋白,受体结合蛋白,重组杆状病毒

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猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

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北京林业大学学报 2006年第S2期28卷 101-104页

作者：张立娜刘培欣曹殿军闫丽辉贾竞波危艳武东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN... 详细信息

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性.试验结果表明,转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异,说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用.

关键词：猪γ干扰素真核表达活性测定

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中国高致病性禽流感免疫预防风险评估

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畜牧兽医学报 2006年第6期37卷 621-624页

作者：吴春艳王靖飞赵丽丹李静吉增涛杨彦涛王笑梅童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病诊断与流行病学中心哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

疫苗接种是当前我国预防和控制HPAI疫情的有效手段之一。由于影响HPAI免疫预防效果的因素众多,会给免疫预防带来风险。对这些风险因子进行识别,并系统分析其所引起的风险程度的高低,进而采取针对性的风险管理措施,能有效提高免疫预防的... 详细信息

疫苗接种是当前我国预防和控制HPAI疫情的有效手段之一。由于影响HPAI免疫预防效果的因素众多,会给免疫预防带来风险。对这些风险因子进行识别,并系统分析其所引起的风险程度的高低,进而采取针对性的风险管理措施,能有效提高免疫预防的效果。本研究首次运用层次分析法(Analytic Hierarchy Process,AHP)构建了HPAI免疫预防风险评估模型,通过确定风险因子权重,依权重大小对风险因子进行排序,确定风险等级。分析结果表明:管理不良、接种操作不规范、实验室监测等是我国免疫预防的高风险因素。通过对免疫预防风险进行综合分析,为HPAI免疫预防管理和决策提供了科学依据。

关键词：高致病性禽流感免疫预防层次分析法风险评估

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猪戊型肝炎病毒大庆株DQ1全基因序列分析

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 507-510页

作者：于敏曲娟娟郭巍赵立平相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

本试验采用RT-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株(DQ1HEV株)的全基因进行分片段扩增,并对其两个末端采用末端快速扩增法(RACE)进行扩增、克隆,测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较,与IV型HEV的同源性最高。ORF... 详细信息

本试验采用RT-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株(DQ1HEV株)的全基因进行分片段扩增,并对其两个末端采用末端快速扩增法(RACE)进行扩增、克隆,测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较,与IV型HEV的同源性最高。ORF1区与IV型HEV核苷酸的同源性为82.6%～83.6%,氨基酸同源性为93.5%。ORF2区与IV型HEV核苷酸的同源性为87.0%～88.4%,氨基酸同源性为95.8%～97.4%。ORF3区与IV型HEV核苷酸的同源性为94.4%～96.5%,氨基酸同源性为90.3%～96.5%。其结果表明DQ1HEV株为IV型HEV。

关键词：猪戊型肝炎病毒克隆序列分析

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PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

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中国兽医科学 2006年第11期36卷 880-884页

作者：谭斌刘长明危艳武张超范刘永刚冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比... 详细信息

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒免疫过氧化物酶单层细胞试验

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鹅细小病毒vp基因片段的原核表达及抗血清的制备

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中国病毒学 2006年第6期21卷 581-584页

作者：卲昱昊王静王懂帅韩宗玺刘胜旺冉多良孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 甘肃省商业科技研究院甘肃兰州730020 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

以鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3’端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-... 详细信息

以鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3’端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-30a,阳性重组质粒经确证性序列测定,证明外源片断插入到pET-30a的预期位置。将其转入大肠杆菌BL21,经终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE表明外源基因获得表达,融合蛋白分子量约为34kDa。将诱导后的工程菌用6mol/L盐酸胍裂解,经超声处理后离心,利用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。用纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗该融合蛋白的抗血清。Westernblotting结果表明制备的兔抗血清与该融合蛋白及亲本病毒的结构蛋白都具有反应性。结合前期工作进展对GPVVP蛋白的B细胞线性抗原表位进行定位。

关键词：鹅细小病毒 vp基因片断原核表达抗血清

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牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究

牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究

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中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会

根据GenBank中发表的已知序列设计多对特异性引物,以牛分枝干菌ValleeⅢ菌株基因组DNA为模板扩增Ag85B、esat-6、hsp65、mpb64、mpb70和mpb83基因片断,并通过SOE-PCR技术扩增Ag85B-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6和mpb70-mpb83融... 详细信息

关键词：牛分枝杆菌疫苗免疫重组质粒 DNA

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牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究

牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究

引用

中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议

根据Gen Bank中发表的已知序列设计多对特异性引物,以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ菌株基因组DNA为模板扩增Ag85B、esat-6、hsp65、mpb64、mpb70和mpb83基因片断,并通过SOE-PCR技术扩增Ag85B-esat-6、 hsp65-esat-6、mpb64-esat-6和mpb70-mpb83... 详细信息

关键词：牛分枝杆菌疫苗免疫重组质粒 DNA

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