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2006中国科协年会

作者：郭设平刘思国王春来邵美丽宫强张秀华郭洋中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室

牛结核病是一种严重危害奶牛业和人类健康的人兽共患传染病,控制和消灭牛结核病是消灭人结核病的前提和基础,而快速有效的诊断是控制牛结核病的关键。PPD皮试诊断方法作为OIE法定的方法具有无可比拟的优越性。但该方法不能有效区分其他... 详细信息

牛结核病是一种严重危害奶牛业和人类健康的人兽共患传染病,控制和消灭牛结核病是消灭人结核病的前提和基础,而快速有效的诊断是控制牛结核病的关键。PPD皮试诊断方法作为OIE法定的方法具有无可比拟的优越性。但该方法不能有效区分其他分枝杆菌致敏、卡介苗(BCG)免疫和牛分枝杆菌感染;在机体因结核病情严重或混合感染免疫抑制疾病时,PPD皮试则容易出现假阳性的结果;另外,它还必须在活体上试验,不便于大规模的流行病学调查,也不能应用于回顾性的流行病学分析。因此,它需要一种高特异性和高敏感性的血清学诊断方法来弥补这些不足。ELISA方法因其快速、简

关键词：牛结核病融合蛋白间接ELISA

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鸵鸟新城疫病毒分子流行病学研究

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中国预防兽医学报 2006年第6期28卷 705-711页

作者：尹燕博龚振华司微蒋金书崔尚金高齐瑜山东省莱阳农学院动物科技学院山东青岛266109 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院北京100094

应用RT-PCR、基因序列测定和分析以及鸡胚平均死亡时间(MDT)等方法,对1997～2000年间从中国北方分离的10株鸵鸟源新城疫病毒进行了F-糖蛋白基因序列测定、系统进化分析、基因分型和毒力测定。结果显示：10株鸵鸟源新城疫病毒分属Ⅱ、Ⅲ... 详细信息

应用RT-PCR、基因序列测定和分析以及鸡胚平均死亡时间(MDT)等方法,对1997～2000年间从中国北方分离的10株鸵鸟源新城疫病毒进行了F-糖蛋白基因序列测定、系统进化分析、基因分型和毒力测定。结果显示：10株鸵鸟源新城疫病毒分属Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ四个基因型。除1株为中发型毒株,其他均为速发型毒株；分析表明,引起鸵鸟发病的新城疫毒株有多种不同的来源。

关键词：鸵鸟 NDV 毒力测定基因序列基因型

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细菌ghost疫苗的研究进展

细菌ghost疫苗的研究进展

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：常月红郭设平刘思国王春来王勇刘建东宫强邵美丽迟磊赵昆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

噬菌体PhiX714的E基因在细菌内的表达能导致细菌裂解.它能使革兰氏阴性菌的胞膜产生跨膜通道从而形成无胞质成分的有完整胞膜结构的细菌菌影(Bacterial Ghost).通过E蛋白介导的细菌裂解已经成功地制备了大量的革兰氏阴性菌ghost,如大肠... 详细信息

噬菌体PhiX714的E基因在细菌内的表达能导致细菌裂解.它能使革兰氏阴性菌的胞膜产生跨膜通道从而形成无胞质成分的有完整胞膜结构的细菌菌影(Bacterial Ghost).通过E蛋白介导的细菌裂解已经成功地制备了大量的革兰氏阴性菌ghost,如大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、霍乱弧菌、肺炎克雷伯氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌.这些来源于侵害人或动物病原体的ghost曾被提议作为灭活疫苗的替代品,使其成为加热灭活或化学灭活细菌的替代物.在"重组ghost"中,外源蛋白(如病毒蛋白)在裂解前通过特异性N-,C-或N-和C-末端锚定序列插入到内膜.重组ghost作为抗原,其优点包括:(1)作为疫苗或抗原载体的ghost来说,其制作过程不涉及灭活所导致的抗原变性;(2)重组蛋白被整合在一个具有高度免疫原性的环境中;(3)不限制外源蛋白的大小,可同时提呈多价抗原决定簇;(4)Bacterial Ghost制备成本低,可大规模生产;(5)重组ghost稳定性好,无需冷链贮藏系统.

关键词：细菌ghost疫苗 E蛋白介导免疫反应佐剂

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抗鸡IBDV Gt株单克隆抗体制备及抗原表位初步分析

抗鸡IBDV Gt株单克隆抗体制备及抗原表位初步分析

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2006中国科协年会

作者：程宇王笑梅高玉龙高宏雷付朝阳简子健中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室新疆农业大学动物医学院

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)属于双RNA病毒科(Birnaviridae), 禽双RNA病毒属(Avibirnavirus),其基因组包括A、B两个节段,主要结构功能蛋白为VP2和VP3,VP2是其主要的保护性抗原,VP3含群特异性的线性依赖性抗原表位,只能诱导产生微弱的中和性抗体。IBD是一种危害鸡的急性、高度接触性、高死亡率的传染病,感染IBD后能致使其他鸡病疫苗免疫失败,继发或并发细菌病或病毒病的感染,从而造成养鸡业的严重经济损失。此外,IBDV基因组还在不断变异,使得研究者们对其倍加关注,从而更有效地防控该病。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 单克隆抗体(McAb) 抗原表位

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山羊传染性胸膜肺炎病原体国内分离株的分子特征研究

山羊传染性胸膜肺炎病原体国内分离株的分子特征研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：李媛张建华胡守萍王亮辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室基础条件及技术服务中心哈尔滨150001

[目的]山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(*** ***,Mccp)引起的高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类传染病.我国目前对于CCPP的病原的分类地位的看法与国际标准不符... 详细信息

[目的]山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(*** ***,Mccp)引起的高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为B类传染病.我国目前对于CCPP的病原的分类地位的看法与国际标准不符.本实验计划对4株丝状支原体簇中国分离菌种进行分子生物学鉴定,确定其真正分类.[方法]针对三段不同基因使用三对引物,对扩增产物进行酶切鉴定和测序,将结果与丝状支原体簇的6个成员进行遗传衍化分析.[结果]该4株支原体以M5M6为引物扩增后PstI酶切的产物与Mccp相同,为548、420、128等3条DNA条带,丝状支原体山羊亚种(M mycoides ***,MmC)等其他丝状支原体簇成员只有420、128bp 2条带.在rpsG和fusA基因段与f38同源性为99.5％,与Mcc kid为98.9％,与MmC ZZ株仅为95.4％.在H2和H2prim段,与MmC PG3株同源性为67.4％-67.6％,与两株Mcc 8601-50和California Kid同源性为95.1％-98.4％,与三株Mccp 97097ET、Gabes和F38的同源性为99.6-99.8％.[结论]87001、87002、367、1653等4株中国分离的CCPP病原菌与山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)亲缘关系更近,故建议其归属为Mccp.

关键词：传染性胸膜肺炎丝状支原体山羊支原体山羊肺炎亚种分子特征

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增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠的保护力及其机制研究

增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠的保护力及其机制研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：王勇李广兴刘思国王春来邵美丽刘建东宫强迟磊赵昆郭设平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150030 东北农业大学哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

为了提高猪传染性胸膜肺炎灭活苗的保护力,本研究利用基因重组技术表达的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要致病因子蛋白:rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP.设立试验Ⅰ组(灭活苗),试验Ⅱ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和... 详细信息

为了提高猪传染性胸膜肺炎灭活苗的保护力,本研究利用基因重组技术表达的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要致病因子蛋白:rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP.设立试验Ⅰ组(灭活苗),试验Ⅱ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP),试验Ⅲ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApxⅣ),试验Ⅳ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApfa)和空白对照组(PBS),每组26只BALB/c小鼠,分3次免疫,每次间隔2周,每周检测血清抗体水平,在免疫后第2周、第4周和第5周,MTT法检测脾脏T细胞增殖水平及ELISA法测定IFN-γ分泌水平.在第3次免疫后的第7天,将每组剩余20只小鼠平均分成2组,分别以APP1型菌(5×109 cfu)和APP7型菌(1011cfu)进行攻毒保护试验.结果表明,向灭活苗中添加重组亚单位成分可以提高机体的细胞免疫和体液免疫水平,并能提高灭活苗的交叉保护率;试验Ⅱ组的ApxI和OMP抗体水平以及细胞免疫水平均显著高于其它各组(p＜0.05),对于APP1和APP7型菌的攻毒也提供了明显优于其它各组的保护结果,试验Ⅲ、Ⅳ组的细胞、体液免疫水平及保护率较试验Ⅰ组也有所提高.结果显示出ApxⅠ、OMP抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率之间存在着正相关性,向灭活苗中加入重组蛋白成分可以提高疫苗的交叉保护,试验Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫,对两个血清型APP的攻击提供了很好的保护作用,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考.

关键词：猪胸膜肺炎重组亚单位菌苗保护力细胞增殖 IEN-γ 灭活疫苗

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牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东赵昆迟磊孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-esat-6(简称为pCE6)和pCDNA-mpb70-mpb83-esat-6(简称为pC70-83-E6).体外转染SP2/0细胞,间接免疫荧光检测目的基因的表达情况.然后进行动物免疫,实验动物分四组即:pCE6组、pC70-83-E6组、pCDNA3.1(+)组和PBS组,每组10只BALB/c小鼠,pCE6组、pC70-83-E6组和pCDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量(胫前肌)免疫,PBS组每只小鼠胫前肌免疫100μl 1 ×PBS,各组均进行了三次免疫,每次间隔两周.间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况.结果表明,两种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,而pCDNA3.1(+)组和PBS组的血清抗体始终维持在较低水平,且pC70-83-E6组抗体水平高于pCE6.经PPD(5 μg/ml)刺激后,pCE6组和pC70-83-E6组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P＜0.05),而两重组质粒免疫组差异不显著(P＞0.05);PPD刺激后两重组质粒免疫的小鼠脾细胞产生的IFN～γ均显著高于两对照组产生的IFN～γ(P＜0.05),且pC70-83-E6组明显高于其他三组(P＜0.05),pCE6组只分泌很低的IFN～γ,而两对照组则未检测到IFN～γ的产生.本试验成功构建了牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83-esat-6融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制提供了理论依据.

关键词：牛分枝杆菌 esat-6基因 mpb70基因 mpb83基因 DNA疫苗免疫应答

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猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

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2006年全国博士生学术论坛——林业及生态建设领域相关学科

作者：张立娜刘培欣曹殿军闫丽辉贾竞波危艳武东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室传染病研究室

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板，通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点，酶切后与PCI真核表达载体连接在一起，测序后，经比较，所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99.8％。将重组质粒转染PK细胞，检测所转染的p... 详细信息

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板，通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点，酶切后与PCI真核表达载体连接在一起，测序后，经比较，所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99.8％。将重组质粒转染PK细胞，检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性。试验结果表明，转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异，说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用。

关键词：猪γ干扰素基因真核表达重组质粒转染抗病毒活性测定 PCR方法

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牛分枝杆菌Hsp65-ESAT6融合蛋白的表达及纯化

牛分枝杆菌Hsp65-ESAT6融合蛋白的表达及纯化

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：迟磊常月红云孟克赵福广刘思国宫强王春来赵昆王勇刘建东刘慧芳周媛媛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 吉林农业大学生物技术学院长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 吉林农业大学生物技术学院长春130118

以牛分支杆菌vallee株基因组DNA为模板,应用PCR法扩增hsp65和esat6两个基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建原核重组表达质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌感... 详细信息

以牛分支杆菌vallee株基因组DNA为模板,应用PCR法扩增hsp65和esat6两个基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建原核重组表达质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导(终浓度1mmol/L),进行SDS-PAGE电泳分析,结果表明:Hsp65-ESAT6融合蛋白是以包涵体形式表达,融合蛋白pET65-E6裂解为两部分,即58KD和30KD,两个蛋白分子量相加与预测的88KD相符,将表达的融合蛋白经Ni2+亲和层析的方法纯化.

关键词：牛分之杆菌纯化 PCR法 Hsp65基因片段 ESAT6基因片段融合蛋白

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鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的表达

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广西农业生物科学 2006年第B9期25卷 213-214页

作者：木古丽王云峰侯绍华石星明王玫冉多良童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

根据传染性喉气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus，ILTV）SA2株ICP4基因序列设计并合成3对引物，以ILTV中国王岗株（WG）株DNA为模板扩增ICP4基因，并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别... 详细信息

根据传染性喉气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus，ILTV）SA2株ICP4基因序列设计并合成3对引物，以ILTV中国王岗株（WG）株DNA为模板扩增ICP4基因，并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别与ILTVSA-2株、BHV-1、EHV-1、EHV-4、MDV-1、MDV-2、HVT、PRV、VZV、HSV-1和HSV-2的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现，ILTV毒株之间ICP4基因相对保守，核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99．7％和99．19／5，但与其他α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低，低于3．0％。对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示，在人工感染ILTVWG株后第10460d内均能检测到低水平的ICP4特异RNA，而gB、gC、TK则未能检出。鉴于目前国内外对α-疱疹病毒潜伏感染相关基因以及ICP4基因序列和结构功能的研究，ILTVWG株ICP4基因的克隆和序列测定，以及病毒基因在潜伏感染鸡三叉神经节中的差异表达，为进一步研究ICP4基因的功能及确定潜伏感染相关基因奠定了基础。

关键词：传染性喉气管炎病毒 WG株 ICP4基因序列分析潜伏感染

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