检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2017年第7期47卷 843-849页

作者：赵冉齐甜铭孙军峰刘怀然韩宗玺杨孝朴刘胜旺甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病研究团队黑龙江哈尔滨150069

为构建新型新城疫病毒(NDV)载体疫苗,前期我们将La Sota全长c DNA中的F基因编码区替换为基因Ⅶ型NDV的F基因编码区,并将其裂解位点突变为弱毒株的序列,构建获得了p NDFLSP-m F重组质粒。为探索p NDFLSP-m F是否能够作为载体有效地表达... 详细信息

为构建新型新城疫病毒(NDV)载体疫苗,前期我们将La Sota全长c DNA中的F基因编码区替换为基因Ⅶ型NDV的F基因编码区,并将其裂解位点突变为弱毒株的序列,构建获得了p NDFLSP-m F重组质粒。为探索p NDFLSP-m F是否能够作为载体有效地表达外源蛋白,在p NDFLSP-m F的P基因与M基因之间引入PmeⅠ酶切位点,并将EGFP基因编码区克隆至构建好的p NDFLSP-m F载体中,构建含有EGFP基因的重组质粒p NDFLSP-m F-EGFP。将p NDFLSP-m F-EGFP以及辅助质粒p CI-NP-K、p CI-P-K、p CI-LK共转染表达T7 RNA聚合酶的重组痘病毒预感染的BSR-T7/5细胞,拯救获得了重组病毒La Sota-m FEGFP。通过RT-PCR证明,被拯救的重组病毒中含有插入的外源基因EGFP。荧光观察和Western-blot分析结果表明,EGFP蛋白能在重组病毒中稳定表达。生物学特性测定结果显示,La Sota-m F-EGFP具有低毒力毒株特征,MDT为144 h,能够在鸡胚上有效地复制,EID50为1×108.75/0.1 m L。上述研究结果为研制和开发新型NDV载体疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒基因Ⅶ型绿色荧光蛋白

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HN蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及鉴定

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中国兽医科学 2017年第6期47卷 671-679页

作者：齐甜铭赵文钧陈玉秋孙军峰马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病研究团队黑龙江哈尔滨150069

新城疫病毒(NDV)是在世界范围内引发家禽发病和死亡的主要病因。HN作为重要的囊膜蛋白,在NDV吸附入侵过程中发挥重要作用。本研究利用反向遗传技术,在HN编码区的N端插入由6个氨基酸组成的TC标签(tetracysteine),成功转染细胞拯救获得TC... 详细信息

新城疫病毒(NDV)是在世界范围内引发家禽发病和死亡的主要病因。HN作为重要的囊膜蛋白,在NDV吸附入侵过程中发挥重要作用。本研究利用反向遗传技术,在HN编码区的N端插入由6个氨基酸组成的TC标签(tetracysteine),成功转染细胞拯救获得TC标记的重组病毒La Sota-HN-NTC,经鉴定La Sota-HN-NTC能够在鸡胚中有效复制,生长曲线与亲本病毒La Sota相似。Western-blot结果显示,La Sota-HN-NTC中HN蛋白的表达量与La Sota相比无明显变化。La Sota-HN-NTC的毒力稍低于La Sota,并且TC标签能够在重组病毒中稳定存在。La Sota-HN-NTC感染的细胞中能够观察到明显的绿色荧光,表明TC标记的HN蛋白能够正常表达并被双砷染料特异性染色。NDV吸附试验表明,La Sota-HN-NTC吸附细胞受体的能力没有因为TC标签发生改变。激光共聚焦监测到了La Sota-HN-NTC感染细胞中HN蛋白的动态分布。本研究为监测HN蛋白在NDV感染过程中的动态分布,阐明HN蛋白在NDV感染中的作用机制提供了工具和基础。

关键词：新城疫病毒 TC标签 HN蛋白

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鸡白痢沙门氏菌与其它致病性沙门氏菌的血清型特异性PCR鉴别检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 215-219页

作者：张童利王曼宇曹俊王忠星刘思国于申业东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为建立鸡白痢沙门氏菌与其他常见致病性沙门氏菌的血清型特异性快速PCR检测方法,本研究通过对Gen Bank中鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌全基因组进行生物信息学分析,确定SEEP17495基因为鸡白痢沙门氏菌的检测靶基因,设... 详细信息

为建立鸡白痢沙门氏菌与其他常见致病性沙门氏菌的血清型特异性快速PCR检测方法,本研究通过对Gen Bank中鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌全基因组进行生物信息学分析,确定SEEP17495基因为鸡白痢沙门氏菌的检测靶基因,设计特异性引物,建立了一种能够直接从粪便样品中检测鸡白痢沙门氏菌的PCR检测方法。结果显示:该方法对于两株鸡白痢沙门氏菌均可以特异性地扩增出356 bp的目的片段,但对于7株常见非沙门氏菌致病菌和29株其他常见致病性沙门氏菌血清型的扩增结果均为阴性。该方法无论检测鸡白痢沙门氏菌纯培养菌,还是检测模拟鸡粪样品中的鸡白痢沙门氏菌,检测的灵敏度均为103cfu/m L。本研究建立的PCR检测方法具有良好的特异性和灵敏性,并且能够快速检测出粪便样品中的鸡白痢沙门氏菌,为鸡白痢沙门氏菌的检测提供了一种快速、有效的方法。

关键词：鸡白痢沙门氏菌 PCR 快速检测

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新城疫弱毒活疫苗中FAdV-4的分离鉴定及分子特征

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微生物学通报 2017年第12期44卷 2773-2781页

作者：刘亮亮王娟李慧昕刘胜旺马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd ... 详细信息

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd V污染,探讨国内鸡群中FAd V感染和流行的可能原因。【方法】应用本实验室建立的FAd V PCR检测方法检测商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗,并进行FAd V分离鉴定。经序列比对和进化分析,鉴定分离毒株所属种、血清型及进化特征。【结果】分离到一株禽腺病毒,命名为L160962。基因分析表明,分离株L160962的52k和hexon基因片段序列与C种内的血清4型毒株相似性最高,其中与中国毒株HN/151025和CH/HNJZ/2015的相似性为99.9%-100%,与奥地利毒株KR5的相似性为99.3%,但与A、B、D和E种FAd V的相似性分别为79.0%-83.3%。系统进化分析表明,L160962与C种内的血清4型禽腺病毒在同一分支,核苷酸相似性在99.9%以上,应划分为血清4型FAd V。基于分离株L160962的hexon基因构建的系统进化树的拓扑结构,分离株L160962与中国毒株亲缘关系最近,提示疫苗源分离株L160962与我国当前流行毒株相近。【结论】我国商品化的新城疫La Sota弱毒活疫苗中存在血清4型FAd V污染,这可能是我国鸡群中FAd V大面积感染和流行的原因之一。

关键词：禽腺病毒 La Sota疫苗分离鉴定

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鸡毒支原体热休克蛋白GrpE粘附特性的鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第1期39卷 28-33页

作者：周长平陈莹李媛高利萍王显兵王莉莉于艳超辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

鸡毒支原体(MG)脂质相关蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主细胞中起重要的作用,本实验室前期利用快速蛋白液相色谱和质谱鉴定MG的grp E基因编码的GrpE蛋白为热休克蛋白。为进一步鉴定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通过原核表达MG株gr... 详细信息

鸡毒支原体(MG)脂质相关蛋白(LAMPs)的粘附特性在感染宿主细胞中起重要的作用,本实验室前期利用快速蛋白液相色谱和质谱鉴定MG的grp E基因编码的GrpE蛋白为热休克蛋白。为进一步鉴定GrpE蛋白是否具有粘附特性,本研究通过原核表达MG株grp E基因,并利用表达纯化的重组蛋白GrpE(rGrpE)免疫BALB/c小鼠。制备抗GrpE的单克隆抗体(MAb)。通过亚细胞定位,结果显示GrpE定位于细胞表面。通过激光共聚焦显微镜观察到rGrpE对DF-1细胞具有明显的粘附作用,而且利用抗GrpE的MAb能够特异抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附。此外,夹心ELISA和流式细胞术试验结果也表明制备的MAb能够显著抑制MG膜蛋白对DF-1细胞的粘附,并呈剂量依赖关系。上述结果表明热休克蛋白GrpE是MG的一种新的具有粘附特性的蛋白。

关键词：鸡毒支原体热休克蛋白Grp E 粘附鉴定

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鸡HspHsp90α可溶性表达及与传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白亲和力的鉴定

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中国家禽 2017年第5期39卷 17-21页

作者：高祥李辉陈玉明刘爱晶吴甜甜王永强高立高玉龙李凯刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

热激蛋白90α(Heat shock protein 90,Hsp90α)在传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)的致病过程中发挥重要作用。蛋白互作及其亲和力均可能导致不同的信号转导和生物效应,鸡源Hsp90α与IBDV衣壳蛋白VP2的互作已经被证... 详细信息

热激蛋白90α(Heat shock protein 90,Hsp90α)在传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)的致病过程中发挥重要作用。蛋白互作及其亲和力均可能导致不同的信号转导和生物效应,鸡源Hsp90α与IBDV衣壳蛋白VP2的互作已经被证明,但两者之间的亲和力尚未被鉴定。研究通过表达和纯化鸡的Hsp90α和IBDV超强毒株的VP2蛋白,运用表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)技术,揭示Hsp90α和IBDV VP2蛋白两者互作的动态过程,并确定其亲和力((KD)为7.105×10^(-8)M),为强相互作用。研究结果对进一步揭示IBDV的致病机制有重要意义。

关键词： Hsp90α 传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白表面等离子共振亲和力

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利用SPF鸡胚分离传染性法氏囊病病毒超强毒的研究

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中国家禽 2017年第17期39卷 19-23页

作者：吴甜甜李辉刘爱晶 ALTAF Hussain 范林进王永强高立高玉龙李凯刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)不适应鸡胚成纤维细胞培养,其分离鉴定通常采用直接接种无特定病原体(SPF)鸡的方法。然而该方法需要特殊设备,成本较高,较繁琐。研究旨在探讨SPF鸡胚作为IBDV分离工具的可行性,将IBDV阳性病料混... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)不适应鸡胚成纤维细胞培养,其分离鉴定通常采用直接接种无特定病原体(SPF)鸡的方法。然而该方法需要特殊设备,成本较高,较繁琐。研究旨在探讨SPF鸡胚作为IBDV分离工具的可行性,将IBDV阳性病料混悬液通过绒毛尿囊膜途径接种9~11日胚龄SPF鸡胚,并盲传三代成功分离获得vvIBDV(IBD16GX01株)。分离毒各代次序列一致,且与SPF鸡分离氨基酸同源性100%。结果表明,SPF鸡胚可用于vvIBDV的分离鉴定,为vvIBDV分子流行病学研究奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒分离鸡胚

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内蒙古部分地区致奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌的分子流行病学及耐药性研究

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中国预防兽医学报 2017年第4期39卷 257-261页

作者：王秋东刘琪董志民杨桂连华欣张万江刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069 内蒙古伊利实业集团股份有限公司内蒙古呼和浩特010080 天津市畜牧兽医研究所天津300112

为调查奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌的流行病学和耐药性情况,本研究对采集自内蒙古部分地区3个规模化奶牛场的330份奶样进行了葡萄球菌的分离、鉴定、耐药表型分析及基因型的检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对分离株进... 详细信息

为调查奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌的流行病学和耐药性情况,本研究对采集自内蒙古部分地区3个规模化奶牛场的330份奶样进行了葡萄球菌的分离、鉴定、耐药表型分析及基因型的检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对分离株进行了亲缘性分析,多位点序列分型(MLST)法对金黄色葡萄球菌进行了基因分型分析。结果表明,从330份奶样共分离到14株金黄色葡萄球菌和23株产色葡萄球菌,两者的分离率分别为4.24%(14/330)和6.97%(23/330);PFGE分型共获得8种不同谱型的金黄色葡萄球菌和16种不同谱型的产色葡萄球菌,表明这些分离株中存在克隆传播现象;药敏试验结果显示,两种病原菌对林可霉素、青霉素、苯唑西林和红霉素耐药率较高,分别为66.67%(16/24)、66.67%(16/24)、37.5%(9/24))和25%(6/24);介导青霉素耐药的bla Z基因检出率最高,为54.17%(13/24),其次为介导林可霉素和红霉素耐药的Inu(A)和erm(B)基因,其检出率分别为33.33%(8/24)和20.83%(5/24)。本研究结果为控制该地区奶牛乳房炎的传播、蔓延及临床用药提供了实验依据。

关键词：金黄色葡萄球菌产色葡萄球菌分子流行病学耐药性

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牛支原体脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞差异表达的转录组学研究

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中国预防兽医学报 2017年第4期39卷 267-271页

作者：王显兵汪洋李媛邵家日王琪陈莹周长平于艳超王莉莉辛九庆马红霞吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病研究室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为阐明牛支原体(Mycoplasma bovis,***)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞的免疫应答机制,本研究采用转录组测序(RNA-seq)技术结合生物信息学方法分析*** LAMPs诱导EBL细胞产生的差异表达基因。本实验首先分别构建LAMPs诱导组... 详细信息

为阐明牛支原体(Mycoplasma bovis,***)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞的免疫应答机制,本研究采用转录组测序(RNA-seq)技术结合生物信息学方法分析*** LAMPs诱导EBL细胞产生的差异表达基因。本实验首先分别构建LAMPs诱导组与对照组EBL细胞的c DNA文库并对其进行高通量测序,利用MAS3.0软件对差异表达基因进行筛选,结果显示共筛选得到706个差异表达基因,其中上调和下调差异基因分别为364个和342个;GO注释显示,差异表达基因编码蛋白主要与细胞黏附、免疫应答以及细胞增殖等相关;利用荧光定量PCR对部分差异表达基因(PIM2、F2RL1以及PTPN2)的表达情况进行验证,结果与RNA-seq测序结果相符。本研究为进一步阐述***的致病机制及宿主的免疫应答机制提供依据。

关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白胎牛肺细胞细胞转录组测序

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三种传染性法氏囊病疫苗对文昌鸡免疫效果的研究

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中国家禽 2017年第18期39卷 78-80页

作者：李辉吴甜甜曹宗喜李凯高立刘爱晶 Altaf Hussain 范林进王永强高玉龙刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅林哲敏祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南海口571100 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是危害文昌鸡的重要传染病之一。为了筛选最适合文昌鸡的IBD防控措施,试验选用新型重组疫苗(rGt HLJVP2)和商品化的弱毒疫苗、中毒力疫苗,评价其免疫效果。结果显示,重组疫苗(rGt HLJVP2... 详细信息

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是危害文昌鸡的重要传染病之一。为了筛选最适合文昌鸡的IBD防控措施,试验选用新型重组疫苗(rGt HLJVP2)和商品化的弱毒疫苗、中毒力疫苗,评价其免疫效果。结果显示,重组疫苗(rGt HLJVP2)组表现更高的抗体滴度,且致死性攻毒后保护率为100%,为文昌鸡的疫病科学防控提供了新思路。

关键词：传染性法氏囊病(IBD) 重组疫苗文昌鸡免疫

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