检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医杂志 2010年第1期46卷 3-5页

作者：赵付荣华荣虹王斌陈娜莎阿合买提.买买提步志高新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合... 详细信息

流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,经有限稀释法获得1株特异性针对JEV E蛋白的杂交瘤细胞,命名为5D4,经测定5D4单抗亚类属于IgG2a,轻链为κ链。经Western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEV E蛋白结合。结果表明,所制备的抗JEV E蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体

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猪流感病毒河南株的分离鉴定和生物学特性

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华北农学报 2010年第4期25卷 107-110页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝刘丽艳刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

从河南省有呼吸道症状的5个不同猪场采集棉拭子和肺组织样品。样品处理后,通过尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚。获得3株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定,为H3N2亚型流感病毒,并对其部分生物学特性进行了研究。结果表明,其半数鸡胚感染量(EI... 详细信息

从河南省有呼吸道症状的5个不同猪场采集棉拭子和肺组织样品。样品处理后,通过尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚。获得3株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定,为H3N2亚型流感病毒,并对其部分生物学特性进行了研究。结果表明,其半数鸡胚感染量(EID50)分别是0-9.56/0.2mL,10-8.56/0.2mL和10-8.44/0.2mL,对小白鼠的半数致死量(LD50)分别是10-1.56/0.1mL,10-1.45/0.1mL和10-1.50/0.1mL;它们的血凝素对热不稳定,能凝集1%马、牛、驴、猪、绵羊、鸡、兔、豚鼠、小白鼠及人O型血的红细胞。这为了解河南猪群中流行的流感病毒奠定了基础。

关键词：猪流感病毒分离鉴定生物学特性

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本地毛形线虫49 ku排泄分泌蛋白基因的克隆及序列分析

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动物医学进展 2010年第10期31卷 68-71页

作者：郑宝亮边传周王秀荣宋铭忻郑州牧业工程高等专科学校河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目... 详细信息

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目的基因TNPG长度为951bp,核苷酸序列同已发表的***相应的序列P49同源性为98.63%,所推导的氨基酸序列同源性为99.05%。为***49 ku ES蛋白结构基因的进一步研究打下基础。

关键词：本地毛形线虫旋毛形线虫 49ku排泄分泌蛋白基因序列

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H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：包红梅王秀荣赵玉辉陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒（H7-AIV）血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增（LAMP）引物,并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP（逆转录环介导等温核酸扩增）技术的H7亚型禽流感病毒... 详细信息

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒（H7-AIV）血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增（LAMP）引物,并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP（逆转录环介导等温核酸扩增）技术的H7亚型禽流感病毒诊断方法。结果表明,该方法对H7-AIV RNA的最小检测限为10,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 100倍;全部反应可在1.5 h内完成;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H7亚型禽流感病毒的快速诊断方法。

关键词： H7亚型禽流感病毒逆转录环介导恒等温扩增快速检测

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两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：丁晴微齐瑛琳李印施建忠崔鹏飞于杨崔佳莹陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

2008年～2009年间,哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,其中H6N2亚型有12株,H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA,NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其... 详细信息

2008年～2009年间,哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒,其中H6N2亚型有12株,H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA,NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其他13株的HA差异很大,达到19.4%～20.2%,其余13株毒同源性在94.2%～99.9%。H6N2亚型间的NA片段的同源性在91.1%～99.9%,差异性比较大。两株H6N6的NA片段同源性为89.5%,差异显著;这些数据表明:不同毒株呈现出明显的时间和地域性差异。与我国周边地区的H6亚型禽流感毒株进行比较发现,只有DK/HN/284/09的HA片段与香港早期的毒株可能有着共同的来源,其余都和香港和韩国等的毒株有着较大的差异性,HA基因的糖基化位点也有所不同,表现出明显的异源性。

关键词：禽流感病毒 H6亚型 HA NA 基因分析

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两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：丁睛微齐瑛琳李印施建忠崔鹏飞于杨崔佳莹陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

08年～2009年间，哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒，其中H6N2亚型有12株，H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA，NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其...

08年～2009年间，哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒，其中H6N2亚型有12株，H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA，NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其他13株的HA差异很大，达到19.4％～20.2％,其余13株毒同源性在94.2％～99.9％。H6N2亚型间的NA片段的同源性在91.1％～99.9％，差异性比较大。两株H6N6的NA片段同源性为89.5％，差异显著;这些数据表明：不同毒株呈现出明显的时间和地域性差异。与我国周边地区的H6亚型禽流感毒株进行比较发现，只有DK/HN/284/09的HA片段与香港早期的毒株可能有着共同的来源，其余都和香港和韩国等的毒株有着较大的差异性，HA基因的糖基化位点也有所不同。表现出明显的异源性。

关键词：

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禽流感变异株灭活疫苗(H5N1,Re-4株)对鸡、鸭和鹅的免疫效果研究

禽流感变异株灭活疫苗(H5N1,Re-4株)对鸡、鸭和鹅的免疫效果研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：曾显营钟功勋李雁冰施建忠姜永萍王彦妮万晓鹏毛胜刚田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨维科生物技术开发公司

为系统评估禽流感变异株灭活疫苗（H5N1,Re-4株）对家禽的免疫效果,本研究将Re-4株油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡和商品蛋鸡、商品鸭、商品鹅。免疫后每周采集血清测定HI抗体,绘制抗体消长曲线,免疫SPF鸡在免疫后2周、3周和50周时以10～5EID... 详细信息

为系统评估禽流感变异株灭活疫苗（H5N1,Re-4株）对家禽的免疫效果,本研究将Re-4株油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡和商品蛋鸡、商品鸭、商品鹅。免疫后每周采集血清测定HI抗体,绘制抗体消长曲线,免疫SPF鸡在免疫后2周、3周和50周时以10～5EID强毒（CK/SX/2/06）的剂量进行攻毒试验。研究结果显示,该疫苗对蛋鸡、鸭、鹅家禽均具有良好的免疫效果,而且SPF免疫鸡血清HI抗体在4 log2以上时能够完全抵抗变异株CK/SX/2/06强毒的攻击。根据试验结果推荐该油乳剂灭活疫苗的对上述禽类的免疫程序:商品蛋鸡10日龄颈部皮下注射0.3 mL,60日龄和110日龄（开产前）时依次胸肌注射0.5 mL和1.0 mL进行免疫;商品鸭、鹅在2周龄均以0.5 mL首免,5周龄和4月龄左右时以1 mL的剂量肌肉注射方式进行加强免疫。

关键词：禽流感 H5N1 变异株灭活疫苗免疫效果

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抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备和鉴定

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生物技术通讯 2010年第1期21卷 47-50页

作者：孙林季琰左为亮王秀荣潘志明焦新安扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

目的:获得分泌抗H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。方法:以H9N2亚型AIV为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14,在PEG4000的作用下进行细胞融合,通过血凝抑制(HI)试验筛选分泌抗H9... 详细信息

目的:获得分泌抗H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。方法:以H9N2亚型AIV为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14,在PEG4000的作用下进行细胞融合,通过血凝抑制(HI)试验筛选分泌抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果:经过连续3～4次克隆化,获得能稳定分泌抗H9亚型AIV血凝素的单克隆抗体细胞系6株,分别命名为1B2、1C10、1G2、2B7、2E3和5E11。6株细胞培养上清HI效价为24～28,腹水HI效价为210～213。除1G2为IgM外,其余5株均为IgG1。Western blotting结果显示,1B2、1C10、2B7和2E3能与AIVH9蛋白在Mr为75000处反应,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的单抗。特异性试验表明该6株单抗均只与H9亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他14个HA亚型的AIV及新城疫病毒、传染性支气管炎病毒发生交叉反应,显示出良好的特异性。结论:制备了针对H9亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体,为禽流感的快速诊断和病毒的抗原性分析等奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 H9亚型血凝素单克隆抗体

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H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/duck/HuBei/49/05株反向基因操作系统的建立

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畜牧与饲料科学 2010年第2期31卷 20-21,27页

作者：苏胜杰许静宋家升李雁冰希尼尼根内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

水禽是禽流感病毒的天然储存库,为了研究高致病性禽流感病毒对水禽致病性的分子基础,研究构建了DKHB/49/05的8质粒反向遗传操作系统。用Trizol从含A/duck/HuBei/49/05株病毒的鸡胚尿囊液中提取总RNA,用RT-PCR扩增PB2、PB1、PA、HA、NP... 详细信息

水禽是禽流感病毒的天然储存库,为了研究高致病性禽流感病毒对水禽致病性的分子基础,研究构建了DKHB/49/05的8质粒反向遗传操作系统。用Trizol从含A/duck/HuBei/49/05株病毒的鸡胚尿囊液中提取总RNA,用RT-PCR扩增PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS基因片段,将其分别克隆至pBD载体中。利用8质粒反向遗传操作系统,将重组的pBD质粒共转染293T细胞,成功拯救了该病毒,并命名为R-DKHB。

关键词： H5N1 禽流感病毒反向遗传

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传染性喉气管炎病毒WG株糖蛋白gD基因截短表达与鉴定

传染性喉气管炎病毒WG株糖蛋白gD基因截短表达与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：李印邓国华崔佳莹于洋丁晴微陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室华南农业大学湖南农业大学

根据GenBank中已发表的传染性喉气管炎病毒全基因组序列(EU 675324),用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的aa 256～aa 405片段设计引物,以传染性喉气管炎病毒WG株基因组为模板,PCR扩增,克隆并连接到原核表达载体pET-32a中,转... 详细信息

根据GenBank中已发表的传染性喉气管炎病毒全基因组序列(EU 675324),用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的aa 256～aa 405片段设计引物,以传染性喉气管炎病毒WG株基因组为模板,PCR扩增,克隆并连接到原核表达载体pET-32a中,转化BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导后,获得大小为43.5 ku的重组蛋白,命名为r-gd;western blot分析表明r-gd具有较强的抗原性。为传染性喉气管炎病毒诊断方法的建立及单克隆抗体的的制备奠定了基础。

关键词：传染性喉气管炎病毒糖蛋白D(gD) 序列分析 Western blot

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