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272 篇 期刊文献
123 篇 会议

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395 篇 电子文献
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学科分类号

378 篇 农学
- 361 篇 兽医学
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29 篇 理学
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- 1 篇 生态学
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- 26 篇 生物工程
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9 篇 医学
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- 3 篇 药学(可授医学、理...
- 2 篇 临床医学
- 2 篇 公共卫生与预防医...
1 篇 经济学
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主题

105 篇 禽流感病毒
63 篇 禽流感
46 篇 猪流感病毒
32 篇 dna疫苗
29 篇 单克隆抗体
25 篇 ha基因
21 篇 流感病毒
20 篇 致病性
20 篇 h5亚型
18 篇 序列分析
16 篇 原核表达
15 篇 免疫保护
15 篇 生物学特性
14 篇 猪流感
13 篇 h5n1
12 篇 蓝舌病病毒
10 篇 克隆
10 篇 重组禽痘病毒
9 篇 血凝素
9 篇 基因芯片

机构

91 篇 中国农业科学院哈...
77 篇 中国农业科学院哈...
61 篇 东北农业大学
36 篇 中国农业科学院哈...
33 篇 中国农业科学院哈...
27 篇 中国农业科学院哈...
27 篇 中国农业科学院哈...
21 篇 甘肃农业大学
19 篇 湖南省动物疫病预...
19 篇 农业部畜牧兽医总...
15 篇 内蒙古农业大学
15 篇 中国农业科学院哈...
13 篇 湖南农业大学
13 篇 中国农业科学院哈...
10 篇 全国畜牧兽医总站
10 篇 中国动物疫病预防...
9 篇 华南农业大学
8 篇 黑龙江八一农垦大...
8 篇 莱阳市城厢兽医站
7 篇 南京农业大学

作者

267 篇 陈化兰
99 篇 邓国华
73 篇 姜永萍
71 篇 乔传玲
57 篇 杨涛
57 篇 王秀荣
54 篇 于康震
49 篇 杨焕良
46 篇 施建忠
44 篇 李雁冰
42 篇 陈艳
42 篇 田国彬
40 篇 刘明
39 篇 刘春国
38 篇 刘丽玲
37 篇 步志高
36 篇 李呈军
34 篇 吴东来
32 篇 曾显营
31 篇 孙恩成

语言

395 篇 中文

检索条件"机构=中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、农业部动物流感重点开放实验室"

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H1N1亚型猪流感病毒HA基因的序列测定及原核表达

H1N1亚型猪流感病毒HA基因的序列测定及原核表达

引用

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：丁选亚乔传玲韩庆功杨焕良陈艳辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切和测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1mM的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的抗原反应活性,为以重组HA蛋白作为抗原建立检测H1N1亚型猪流感病毒血清学抗体水平奠定了基础.

关键词：猪流感病毒 HA基因原核表达基因序列

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H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

引用

第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静王全英于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用1... 详细信息

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用100LD50的HPAIV A/FPV/Rostock/34(H7N1)[RK/34(H7N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。结果,pCAGGoptiHA7一次免疫后,100μg、50μg和100μg剂量均可对免疫鸡形成90%的死亡保护;pCAGGoptiHA7加强免疫后, 100μg和50μg剂量可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而10μg剂量则可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),但不能完全阻止排毒。结果表明,H7亚型DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7具有良好的免疫保护性,有望成为预防H7亚型高致病力禽流感的物质技术储备。

关键词：禽流感 H7亚型 DNA疫苗保护效力

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H5亚型禽流感DNA疫苗的实验室研究

H5亚型禽流感DNA疫苗的实验室研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静于康震田国斌陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室农业部畜牧兽医总站

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡、商品蛋鸡、鹅和鸭的免疫效力进行了实验室研究。pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡和5周龄商品蛋鸡,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIVA/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄本地鹅和金定鸭,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIVA/Duck/ShanghaiNanhui/16/2004(H5N1)[DK/SHNH/1604(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,其免疫保护效力通过免疫和攻毒后的HI抗体反应水平、攻毒后的AGP抗体测定、病毒分离与滴定以及对发病率和死亡率的统计等几个方面来综合评价。结果,10μgpCAGGoptiHA5加强免疫可对SPF鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5加强免疫可对商品蛋鸡形成100%的保护(不发病、不致死),100μgpCAGGoptiHA5加强免疫可对鹅和鸭均形成100%的保护(不发病、不致死)。结果表明,pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫效力

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H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

H7亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效力研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

将表达密码子优化的H7亚型HA基因的DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7的免疫保护效力进行了评估。首先以100μg、50μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,然后以100μg、50μg和10μg剂量间隔3周加强免疫3周龄SPF鸡,一次免疫后4周、加强免疫后2周用100LD50的HPAIVA/FPV/Rostock/34(H7N1)[RK/34(H7N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。结果,pCAGGoptiHA7一次免疫后,100μg、50μg和10μg剂量均可对免疫鸡形成90%的死亡保护;pCAGGoptiHA7加强免疫后,100μg和50μg剂量可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),而10μg剂量则可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),但不能完全阻止排毒。结果表明,H7亚型DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA7具有良好的免疫保护性,有望成为预防H7亚型高致病力禽流感的物质技术储备。

关键词：禽流感 H7亚型 DNA疫苗保护效力

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H5亚型禽流感DNA疫苗的实验室研究

H5亚型禽流感DNA疫苗的实验室研究

引用

第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡、商品蛋鸡、鹅和鸭的免疫效力进行了实验室研究。pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡和5周龄商品蛋鸡,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄本地鹅和金定鸭,加强免疫后2周分别用100LD50的HPAIVA/Duck/ShanghaiNanhui/16/2004(H5N1)[DK/SHNH/1604(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,其免疫保护效力通过免疫和攻毒后的HI抗体反应水平、攻毒后的AGP抗体测定、病毒分离与滴定以及对发病率和死亡率的统计等几个方面来综合评价。结果,10μg pCAGGoptiHA5加强免疫可对SPF鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),10μg剂量pCAGGoptiHA5加强免疫可对商品蛋鸡形成100%的保护(不发病、不致死),100μg pCAGGoptiHA5加强免疫可对鹅和鸭均形成100%的保护(不发病、不致死)。结果表明,pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫效力

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H1N1亚型猪流感病毒中国分离株神经氨酸酶基因分子演化的研究

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株神经氨酸酶基因分子演化的研究

引用

第六次人畜共患病学术交流会

作者：陈君彦李海燕陈化兰杨焕良李泽君于康震毕英佐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京) 华南农业大学动物科学学院(广州)

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的神经氨酸酶(NA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NA基因核甘酸全长为1458bp,共编码477个氨基酸.15株H1N1亚型SIV的NA... 详细信息

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的神经氨酸酶(NA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NA基因核甘酸全长为1458bp,共编码477个氨基酸.15株H1N1亚型SIV的NA蛋白在58、63、68、88、146位都存在糖基化位点;但是,SW/GD/714/01和SW/GD/771/01在50位存在一糖基化位点,为"-NQS-",其余13株H1N1亚型SIV在50位无糖基化位点,却在44位存在"-NHS-"的糖基化位点;而且,SW/GD/714/01、SW/GD/771/01和其余13株H1N1亚型SIV的NA蛋白头部抗原位点,在328、332、334、339、340位的氨基酸不同;但是,15株H1N1亚型SIV在366位的氨基酸均为N,与所有参考毒株在此位的S不同.经同源性比较结果和进化树分析可见,SW/GD/714/01和SW/GD/771/01的NA基因明显属于类禽型H1N1猪谱系,其余13株H1N1亚型SIV的NA基因皆属于古典型H1N1猪谱系.

关键词：猪流感病毒神经氨酸酶序列分析分子演化正粘病毒科

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禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)研究与应用

禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)研究与应用

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

作者：乔传玲于康震姜永萍李呈军田国彬王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室全国畜牧兽医总站

本研究利用DNA重组技术,以我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因为抗原基因供体,以高度成熟安全的鸡痘病毒疫苗株S-FPV-017为载体,构建了一株可共表达HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗株。经细胞连续传代确证了重组病毒良好的遗... 详细信息

本研究利用DNA重组技术,以我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因为抗原基因供体,以高度成熟安全的鸡痘病毒疫苗株S-FPV-017为载体,构建了一株可共表达HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗株。经细胞连续传代确证了重组病毒良好的遗传稳定性,经鸡体内连续传代证实了其毒力稳定性。大量的实验室研究与现地应用结果表明,该疫苗免疫后对鸡十分安全、无任何不良反应;免疫后1周可诱导免疫效力产生,免疫持续期可达10个月。

关键词：禽流感重组鸡痘病毒疫苗

来源：评论

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用鸡体偏嗜性密码子对H5亚型禽流感病毒HA基因的优化与构建及其DNA疫苗体外表达研究

用鸡体偏嗜性密码子对H5亚型禽流感病毒HA基因的优化与构建及其DN...

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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍李呈军张洪波步志高张芳芳于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/... 详细信息

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA和pCIoptiHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.

关键词： HA基因密码子优化重叠延伸PCR 间接免疫荧光 Western blot检测禽流感病毒 DNA疫苗体外表达

来源：评论

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鸡体偏嗜性密码子优化免疫原基因增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

鸡体偏嗜性密码子优化免疫原基因增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保...

引用

中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军步志高张芳芳于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA.将pCIoptiHA和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白;随之将pCIoptiHA及pCIHA分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100LD<,50>的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果,间接免疫荧光法和Western-blot分析表明密码子优化的HA基因表达水平显著高于野生型HA基因;免疫SPF鸡后,100μg pCIoptiHA可形成75﹪的免疫保护,100μg pCIHA可形成50﹪的免疫保护;10μg pCIoptiHA可形成对免疫鸡75﹪的部分免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCIoptiHA诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA.试验结果表明,HA基因密码子的优化可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫保护密码子优化

来源：评论

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表达载体的优化显著增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

表达载体的优化显著增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

引用

中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：姜永萍张洪波李呈军张芳芳步志高于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(黑龙江哈尔滨) 农业部畜牧兽医总站(北京)

CAGGS含鸡β-actin启动子和CMV增强子,是一种高效真核表达载体.将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因插入pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA,将pCAGGHA和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白,Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果载体pCAGGS表达水平显著高于载体pCI.为进一步评估不同表达载体对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响,DNA疫苗质粒pCIHA及pCAGGHA分别以100μg和10μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后分别用100LD<,50>的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果,100μg pCAGGHA可形成100﹪的免疫保护,100μg pCIHA可形成50﹪的免疫保护;10μg pCAGGHA可形成对免疫鸡100﹪的免疫保护,而10μg pCIHA则基本不能形成免疫保护;pCAGGHA诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA.试验结果表明,鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗免疫保护表达载体

来源：评论

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