检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1170-1177页

作者：关立峥孔兴天韩舒雨谷文丽刘驰煌陈思崔鹏飞胡永浩邓国华陈化兰甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)随着其不断进化、变异及对宿主的适应,部分毒株已经稳定存在并获得对其自然宿主的高致病力,这不仅严重危害到养禽业的发展,更对人类的公共卫生安全构成潜在威胁。为了解H5N3亚型AIV的生物... 详细信息

H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)随着其不断进化、变异及对宿主的适应,部分毒株已经稳定存在并获得对其自然宿主的高致病力,这不仅严重危害到养禽业的发展,更对人类的公共卫生安全构成潜在威胁。为了解H5N3亚型AIV的生物学特性,本研究对2015年江苏省分离的一株低致病性H5N3亚型AIV(A/Duck/Jiangsu/S1665/2015)进行遗传演化分析、小鼠(Mus musculus)感染性实验和受体结合特异性实验。遗传演化分析结果表明,该病毒的8个基因片段(血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)、碱性聚合酶蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)、PB2、酸性聚合酶蛋白(polymerase acid protein,PA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)、基质蛋白(matrix protein,M)和非结构蛋白(nonstructural protein,NS))来源均不相同,具有明显的遗传多样性。小鼠感染性实验结果显示,这株病毒可以在小鼠的肺脏和鼻甲内进行有效复制,仅引起小鼠的体重出现阶段性下降,对小鼠呈现低致病性。受体结合特异性分析结果表明,这株病毒同时具有与唾液酸(sialic acid,SA)α2,3-Gal和SAα2,6-Gal受体结合的能力,具有感染人类的潜在风险。本研究通过对这株低致病性的H5N3亚型AIV的生物学特性的系统性分析,发现此株病毒的基因来源具有野鸟源性,且具有感染哺乳动物的潜在风险。研究结果对于H5N3亚型AIV的综合防控具有重要的指导意义。

关键词：禽流感病毒(AIV) H5N3 生物学特性

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共表达H5亚型AIV HA基因和IBDV VP2基因重组DEV的构建及免疫效力评价

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农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1197-1206页

作者：李爱心丁蕾蕾刘璐高立胡玉珍陈普成姜永萍柳金雄王笑梅陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室甘肃农业大学动物医学学院

禽流感(Avian influenza,AI)和传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)严重危害家禽养殖业,疫苗免疫是防治的主要手段之一。为探索以鸭瘟病毒(Duck enteritis virus,DEV)(又称鸭病毒性肠炎病毒)为载体,研制在鸡(Gallus gallus)中使用的AI-IBD二联疫苗的可行性,本研究利用overlap PCR及Gateway LR克隆技术,扩增出血凝素(hemagglutinin,HA)-内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)-病毒蛋白2(virus protein 2,VP2)和VP2-IRES-HA基因片段,并将其克隆入DEV多片段拯救系统T-us78Kan ccd B粘粒短独特区7(unique short region 7,US7)和US8位点之间,利用该系统成功拯救出两株共表达H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)HA基因和传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)VP2基因的重组病毒r DEV-HA/VP2和r DEV-VP2/HA,并对其进行了初步免疫效果评价。经系统体外实验表明,病毒传至20代,外源基因均能在重组病毒中稳定遗传和表达,且不影响载体病毒的增殖。但免疫效力实验显示,重组病毒以103半数组织培养感染剂量(tissue culture infective dose,TCID50)、104TCID50、105TCID50免疫鸡后14 d,r DEV-HA/VP2最高仅诱导对同源AIV强毒70%的免疫保护和对超强IBDV(very virulent IBDV,vv IBDV)30%的免疫保护,部分鸡中能检测到血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗体,但整体水平较低,IBD抗体未检测到;r DEV-VP2/HA最高仅诱导对vv IBDV 40%的免疫保护,不能诱导对同源AIV强毒的免疫保护,HI抗体和IBD抗体均未检测到。结果显示,以IRES串联基因构建鸭瘟载体禽流感传染性法氏囊病二联疫苗的策略不可行。本研究为以DEV为载体构建在鸡中使用的多联疫苗的研究提供参考资料。

关键词：禽流感(AI) 传染性法氏囊病(IBD) 鸭瘟病毒(DEV) 活载体疫苗

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1株猪源2009/H1N1流感病毒反向遗传系统的建立

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畜牧与兽医 2017年第1期49卷 61-64页

作者：许榜丰孟沙沙吴运谱陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明... 详细信息

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明,R-HLJ44与亲本病毒HLJ44的核苷酸序列完全一致;二者在细胞上具有相似的增殖特性;抗原性未发生变化;分别以106TCID50的剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,结果显示R-HLJ44与亲本HLJ44在小鼠脏器中的复制滴度也基本一致。以上结果表明拯救的重组病毒保持了与亲本病毒一致的生物学特性。该病毒反向遗传系统的建立,为进一步研究H1N1亚型流感病毒的致病分子机制及新型疫苗研制等奠定了基础。

关键词：流感病毒猪 2009/H1N1 反向遗传系统

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流感病毒NP蛋白与宿主蛋白SNRPA的相互作用研究

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 167-171页

作者：张杰罗维玉周圆王广文赵玉辉周陈陈黄山雨李呈军陈化兰姜丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病... 详细信息

流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病毒NP蛋白相互作用的宿主蛋白U1 small nuclear ribonucleoprotein A(SNRPA)。本研究通过酵母回交验证、免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull down试验进一步证实NP与SNRPA之间存在直接相互作用。利用siRNA干扰基因的表达后,流感病毒的复制滴度在24 h和48 h分别下降2.7倍和1.75倍,表明SNRPA蛋白表达对流感病毒的复制发挥正调控作用。本研究丰富了流感病毒蛋白与宿主蛋白之间的蛋白质调控网络,为进一步研究流感病毒复制调控的机制奠定了基础。

关键词：酵母双杂交 Co-IP NP蛋白 SNRPA蛋白相互作用

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2015—2016年湖南省长沙市活禽批发市场禽流感流行病学调查

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中国动物检疫 2018年第2期35卷 5-8页

作者：黄建龙王昌建邓国华何世成宁华杰张朝阳林源湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 长沙市动物疫病预防控制中心湖南长沙410013

为了解当地活禽批发市场的禽流感病毒污染状况,提升禽流感防控针对性,2015—2016年先后4次对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查,共在35个摊位分离到禽流感病毒,发现群阳性率为43.6%,禽流感病毒总分离率为14.24%,分离到H3... 详细信息

为了解当地活禽批发市场的禽流感病毒污染状况,提升禽流感防控针对性,2015—2016年先后4次对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查,共在35个摊位分离到禽流感病毒,发现群阳性率为43.6%,禽流感病毒总分离率为14.24%,分离到H3、H5、H6、H7、H9和H10等6种亚型禽流感病毒。其中,H9和H5亚型禽流感病原阳性率较高,分别为8.7%和3.8%。调查结果表明,长沙市活禽批发市场中的禽流感病毒污染面较广。建议加强活禽市场管理,特别要做好市场的清洗消毒工作。

关键词：活禽批发市场禽流感病毒分离流行病学调查长沙市

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2009年-2014年我国H3N2亚型禽流感病毒生物学特性研究

2009年-2014年我国H3N2亚型禽流感病毒生物学特性研究

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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：关立峥张芳肖丽崔鹏飞胡永浩陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

H3N2亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染猪、犬、猫、雪貂等多种哺乳动物,而且是造成人的季节性流感最直接的病原之一.近年来的禽流感监测数据显示,H3N2亚型禽流感病毒在水禽中分离率相对较高、流... 详细信息

H3N2亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染猪、犬、猫、雪貂等多种哺乳动物,而且是造成人的季节性流感最直接的病原之一.近年来的禽流感监测数据显示,H3N2亚型禽流感病毒在水禽中分离率相对较高、流行地区广,病毒分离阳性率有逐年增多的趋势.为了解近年来我国H3N2亚型禽流感病毒的流行情况,评估该亚型禽流感病毒对哺乳动物感染和传播的潜在风险,对2009-2014年间在我国南方省份的家禽交易市场、养殖场和家禽屠宰场的家禽群体中采集拭子样品,采集到的样品接种鸡胚后进行病毒分离,对不同群体分离到的H3亚型禽流感病毒进行病毒表面基因的序列测定和分析基础上,选取26株代表性病毒进行病毒的全基因组序列分析、抗原性分析、小鼠感染性和致病性实验、受体结合特异性分析以及病毒在豚鼠中的复制能力、直接接触传播和呼吸道飞沫传播能力的检测.

关键词：禽流感病毒全基因组序列抗原性感染性致病性

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禽白血病病毒对禽流感疫苗免疫效果的影响

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中国预防兽医学报 2016年第5期38卷 394-397页

作者：李鑫曾显营高玉龙白洁石文军陈化兰田国彬中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点开放实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究禽白血病病毒(ALV)对禽流感(AI)疫苗免疫效果的影响,本研究将1日龄SPF鸡经腹腔接种ALV HLJ09DH02株后,于21日龄免疫重组禽流感病毒(AIV)灭活疫苗(H5N1亚型,Re-8)或禽流感-新城疫重组二联活疫苗(r LH5-8),免疫后与未感染ALV的免疫... 详细信息

为研究禽白血病病毒(ALV)对禽流感(AI)疫苗免疫效果的影响,本研究将1日龄SPF鸡经腹腔接种ALV HLJ09DH02株后,于21日龄免疫重组禽流感病毒(AIV)灭活疫苗(H5N1亚型,Re-8)或禽流感-新城疫重组二联活疫苗(r LH5-8),免疫后与未感染ALV的免疫对照鸡同时检测血清HI抗体并采用H5N1亚型高致病性AIV攻毒。结果显示:实验鸡感染ALV后HI抗体滴度均显著低于相应的未感染ALV的免疫对照组(p<0.05)。感染ALV后,免疫Re-8灭活疫苗及其对照组攻毒后的排毒鸡数分别为4/10和0/10,存活率分别为90%和100%;感染ALV后,免疫r LH5-8活疫苗及其对照组攻毒后的排毒鸡数分别为10/10和0/10,存活率分别为0和100%;未感染ALV的AI免疫鸡均不发病、不死亡、不排毒;空白对照鸡攻毒后3 d内全部死亡并且排毒。本研究表明,ALV对AI灭活疫苗和活疫苗均具有显著免疫抑制作用,建议加强种鸡ALV的净化,降低对AI等疫苗免疫效果的影响。

关键词：禽白血病禽流感疫苗免疫效果影响

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我国部分省份猪群中流感病毒血清学抗体的调查

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 11-14页

作者：隋金钰杨大为杨焕良陈艳许榜丰尹航乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解近年来我国猪群中流感病毒的感染与流行情况，本研究分别对2013年11～12月期间采集于福建等9个重点养猪省份的2198份以及2014年3～4月期间采自于广东和湖南两省的3654份猪血清样品进行了血凝抑制（HI）抗体的检测。选取欧亚类禽型... 详细信息

为了解近年来我国猪群中流感病毒的感染与流行情况，本研究分别对2013年11～12月期间采集于福建等9个重点养猪省份的2198份以及2014年3～4月期间采自于广东和湖南两省的3654份猪血清样品进行了血凝抑制（HI）抗体的检测。选取欧亚类禽型猪H1N1（EAH1N1）、2009甲型H1N1（2009／H1N1）、H3N2亚型猪流感病毒（SIV）、H5N1禽流感病毒（AIV）、H9N2AIV及H7N9流感病毒制备的HI标准抗原作为检测抗原。结果显示，2013年我国猪群中EAH1N1、2009／H1N1、H3N2SIV、H5N1AⅣ、H9N2AIV及H7N9流感病毒平均抗体阳性率分别为49，73％、11．87％、1．71％、0、0、1．36％：2014年分别为48。52％、12．10％、1．04％、0、0、2．05％。检测结果表明2013年～2014年间我国猪群中H1N1亚型SIV感染比较普遍，H3N2、H9N2流感病毒抗体阳性率较低，未检测到H5N1、H7N9流感病毒抗体。

关键词：流感病毒血清学抗体猪血凝抑制试验

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Wnt/β-Catenin信号通路对流感病毒复制的影响

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中国预防兽医学报 2016年第5期38卷 343-347页

作者：王金光梁立滨朱鹏阳李俊平孙楠赵玉辉罗维玉姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

Wnt/β-Catenin信号通路是广泛存在于多种真核生物中的一条高度保守的信号通路,但对于该信号通路是否参与流感病毒的复制及其对流感病毒致病性的影响目前还缺乏深入研究,为研究其对流感病毒复制的影响,本研究通过转染Wnt/β-Catenin信... 详细信息

Wnt/β-Catenin信号通路是广泛存在于多种真核生物中的一条高度保守的信号通路,但对于该信号通路是否参与流感病毒的复制及其对流感病毒致病性的影响目前还缺乏深入研究,为研究其对流感病毒复制的影响,本研究通过转染Wnt/β-Catenin信号通路荧光素酶报告质粒Topflash试验,表明甲型H1N1流感病毒感染后可以抑制Wnt/β-Catenin信号通路的激活。而当先转染β-Catenin蛋白真核表达重组质粒激活Wnt/β-Catenin信号通路后,再感染甲型H1N1流感病毒时,结果显示病毒复制受到了抑制,并且这种抑制作用不依赖于病毒NS1蛋白C端的PBM结构域。此外,将不同亚型流感病毒NS1蛋白真核表达重组质粒与Topflash质粒共转染,以检测其对Wnt/β-Catenin信号通路的激活能力时,结果表明H1N1的NS1可以更显著地激活Wnt/β-Catenin信号通路。本研究为进一步深入研究流感病毒感染与Wnt/β-Catenin信号通路的相互关系奠定了基础。

关键词：流感病毒 Wnt/β-Catenin信号通路 NS1蛋白

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NA蛋白对流感病毒受体结合特性影响的研究

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 518-522页

作者：马树杰孔晖晖施建忠谷春阳宋洋铭曲志远关云涛陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究两株H7亚型流感病毒A/chicken/Jilin/SD020/2014(H7N2)(简称JL/020)和A/Anhui/1/2013(H7N9)(简称AH/1)受体结合特异性差异的影响机制,本实验利用反向遗传操作技术,构建一系列重配病毒和HA基因点突变病毒,检测其对受体结合特性的... 详细信息

为研究两株H7亚型流感病毒A/chicken/Jilin/SD020/2014(H7N2)(简称JL/020)和A/Anhui/1/2013(H7N9)(简称AH/1)受体结合特异性差异的影响机制,本实验利用反向遗传操作技术,构建一系列重配病毒和HA基因点突变病毒,检测其对受体结合特性的影响。固相ELISA检测结果表明血凝素蛋白(HA)中的57和312位氨基酸不影响流感病毒的受体结合特性,而神经氨酸酶蛋白(NA)使r-JL/020(AH/1骨架)结合SAα2,3Gal受体的结合能力高于r-AH/1(R57K/R312K),表明NA影响了流感病毒受体结合特性;同源建模进一步发现HA中的57和312位点与流感病毒受体结合结构域相距较远;交叉血凝抑制试验(HI)结果表明,H7单因子血清和H7N9全病毒血清对拯救的JL/020和AH/1病毒株的抑制价没有差异,而N2单因子血清对病毒的抑制能力存在差异。以上结果表明,NA蛋白影响了流感病毒的受体结合特性。本研究表明,除HA以外,NA也能够影响流感病毒的受体结合特性,该实验为进一步研究流感病毒受体结合特性提供了实验依据。

关键词：流感病毒受体结合特性血凝抑制 NA蛋白

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