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畜牧兽医学报 2013年第8期44卷 1277-1282页

作者：姜莉莉祁小乐高玉龙邓小芸柴洪亮张礼洲贠炳岭秦立廷王永强高宏雷王笑梅华育平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨150040 辽宁医学院畜牧兽医学院锦州121001

利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV... 详细信息

利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV,分别来自于针尾鸭和绿头鸭,将分离病毒分别命名为DBYR1101和DBYR1102。克隆2个病毒株的主要保护性抗原基因gp90,并进行序列分析。结果显示,2个分离株gp90基因氨基酸相似性为99.5%;DBYR1101 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.7%、94.2%和98.2%;DBYR1102 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.2%、93.7%和97.7%;与中国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列相似性分别为94.7%和94.2%;与中国北方分离株氨基酸序列相似性为99.2%～100%。核苷酸遗传进化分析表明,2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近,趋于形成1个北方分离群;与SNV株亲缘关系最远;与170A株亲缘关系较远;与美国和中国台湾地区的某些分离株相似性较高。该研究首次自野鸭体内分离到REV,丰富了REV流行病学资料,同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色,为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。

关键词：野鸟禽网状内皮组织增生病病毒分离鉴定

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鸭坦布苏病毒鸭胚成纤维细胞适应病毒编码基因序列测定及分析

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 791-794页

作者：李云霞刘晓丽张玥韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为研究鸭坦布苏病毒(DTMUV)Du/CH/LSD/110128在鸭胚成纤维细胞(DEF)的适应性及变异情况,本研究将Du/CH/LSD/110128接种DEF,测定各代病毒的TCID50,表明DTMUV分离株已适应DEF,并在72 h产生明显的细胞病变(CPE),自F8代起病毒适应DEF,其F10... 详细信息

为研究鸭坦布苏病毒(DTMUV)Du/CH/LSD/110128在鸭胚成纤维细胞(DEF)的适应性及变异情况,本研究将Du/CH/LSD/110128接种DEF,测定各代病毒的TCID50,表明DTMUV分离株已适应DEF,并在72 h产生明显的细胞病变(CPE),自F8代起病毒适应DEF,其F10代病毒滴度为104.4TCID50/0.1 mL左右。对细胞适应毒F10代的DTMUV进行编码区基因测序并分析,结果表明Du/CH/LSD/110128细胞适应毒与DTMUV参考病毒株同源性在98%以上;其推导氨基酸序列与亲本病毒氨基酸序列差异不显著,仅存在10个氨基酸差异位点,主要在NS1和NS3蛋白,与鸡源、鸭源及鸽源病毒分别具有21个、14个、16个差异位点,这些差异位点主要存在于E蛋白、NS1蛋白和NS5蛋白。

关键词：鸭坦布苏病毒细胞适应序列分析氨基酸差异

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猪B7-H4的克隆鉴定与单克隆抗体制备

猪B7-H4的克隆鉴定与单克隆抗体制备

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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：刘培欣李涛彭金美田志军刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

B7家族分子是T细胞免疫应答的重要调控分子之一,在抗病毒和抗肿瘤免疫应答中发挥重要的免疫调节作用.B7-H4分子是新发现的B7家族成员之一,在人和小鼠中研究表明,它对T细胞免疫应答具有负调控功能.目的:克隆鉴定猪B7-H4基因,研究该分子... 详细信息

B7家族分子是T细胞免疫应答的重要调控分子之一,在抗病毒和抗肿瘤免疫应答中发挥重要的免疫调节作用.B7-H4分子是新发现的B7家族成员之一,在人和小鼠中研究表明,它对T细胞免疫应答具有负调控功能.目的:克隆鉴定猪B7-H4基因,研究该分子在猪体内的分布情况,并制备该分子的单克隆抗体.方法:用人B7-H4基因序列在GeneBank上进行Blast搜索猪B7-H4的EST序列,采用PCR方法从猪PBMC中扩增B7-H4分子;通过荧光定量PCR方法检测该分子在猪不同组织器官中的分布情况;利用GST融合方法将B7-H4的胞外区进行原核表达和纯化后免疫小鼠,利用经典杂交瘤技术将免疫小鼠脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,然后用稳定表达猪B7-H4的HEK293细胞系通过免疫荧光试验筛选阳性杂交瘤细胞.

关键词：猪 B7-H4分子原核表达单克隆抗体

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腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2不同免疫途径的效力评价

腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2不同免疫途径的...

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：孙元秦华洋袁晋王春花赵碧波李素罗玉子仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

猪瘟是一种非常重要的猪传染病,对养猪业危害极大。具有标记特性的新型猪瘟疫苗及相应的鉴别诊断方法将会对猪瘟的防控起到重要的作用。先前我们证实,构建的表达猪瘟病毒E2基因的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体病毒rAdV-SFV-E2在猪体上可... 详细信息

猪瘟是一种非常重要的猪传染病,对养猪业危害极大。具有标记特性的新型猪瘟疫苗及相应的鉴别诊断方法将会对猪瘟的防控起到重要的作用。先前我们证实,构建的表达猪瘟病毒E2基因的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体病毒rAdV-SFV-E2在猪体上可诱导高水平的猪瘟特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,免疫攻毒的保护效果与猪瘟兔化弱毒疫苗C株相当。系统评价显示,该疫苗初步具备了理想猪瘟疫苗的特征。本研究对该腺病毒/甲病毒复制子嵌合病毒rAdV-SFV-E2以三种免疫途径(肌肉、皮下、滴鼻)在猪体上的免疫效果进行了比较。选取21头5周龄左右猪瘟抗体及抗原均为阴性的健康仔猪,将所有仔猪随机分成A、B、C和D四组,其中A、B、C三组分别经肌肉、皮下和滴鼻方式注射5×106TCID50rAdV-SFV-E2,D组分别经三种途径免疫5×106TCID50rAdV-SFV-empty。免疫后3周以同种疫苗、同样途径和剂量进行加强免疫。加强免疫后4周,所有猪用猪瘟病毒石门株进行攻毒。研究结果显示,皮下免疫组诱导的体液免疫水平较其他途径免疫组较高。在攻毒前,A组、B组和C组免疫猪的平均抗体阻断率分别为46.28%、51.66%和31.94%。皮下免疫组与滴鼻免疫组在攻毒前的抗体水平比较上差异显著(p<0.05)。攻毒后3d,A组、B组和C组免疫猪的平均抗体阻断率分别为54.28%、62.39%和39.35%。皮下免疫组与肌肉免疫组、滴鼻免疫组间差异显著(p<0.05)。在细胞免疫方面,皮下免疫组诱导了高水平的特异性的淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-4的分泌,与rAdV-SFV-empty免疫组及肌肉和滴鼻免疫组之间差异显著(p<0.05)。本研究进一步证实了腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗作为一种理想猪瘟疫苗的可能性,将会对猪瘟的防控起到重要的作用。

关键词：猪瘟嵌合载体疫苗免疫途径效力

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几种猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的比较与应用

几种猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的比较与应用

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：张志慧危艳武吴洪丽黄立平李胜斌刘建波张辉王一平刘丹刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

1引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)属于圆环病毒科圆环病毒属,为单股环状共价闭合DNA病毒,基因组为1766～1768nt。该病毒被证实是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,主要危害7～15周龄仔猪,临床表现为渐... 详细信息

1引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)属于圆环病毒科圆环病毒属,为单股环状共价闭合DNA病毒,基因组为1766～1768nt。该病毒被证实是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,主要危害7～15周龄仔猪,临床表现为渐进性消瘦,淋巴肿大,被毛粗乱,皮肤苍白等。临床上PCV2通常与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)混合感染,引起严重的临床疾病[1]。对该病控制的有效手段是通过疫苗预防接种,这一策略已被广泛采用,并取得了良好效果[2]。随着P

关键词：猪圆环病毒 PCV ELISA 抗体检测试剂盒抗体效价

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猪圆环病毒基因组复制机制的研究进展

猪圆环病毒基因组复制机制的研究进展

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：张辉唐青海刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

1引言圆环病毒科(Circoviridae)是由多种非囊膜动物病毒成员组成,其基因组为很小的单链、闭合环状DNA,通过双链中间体复制[1]。猪圆环病毒(PCVs)基因组含2个主要开放阅读框(ORFs),其中ORF1即rep基因编码35.7ku的Rep蛋白,它与病毒复制相... 详细信息

1引言圆环病毒科(Circoviridae)是由多种非囊膜动物病毒成员组成,其基因组为很小的单链、闭合环状DNA,通过双链中间体复制[1]。猪圆环病毒(PCVs)基因组含2个主要开放阅读框(ORFs),其中ORF1即rep基因编码35.7ku的Rep蛋白,它与病毒复制相关[2];ORF2即cap基因编码27.8ku的Cap蛋白,该蛋白是病毒唯一的衣壳蛋白,具有良好的免疫原,能够诱导机体产生中和抗体,属于保护性抗原[3]。此外,ORF3编码与宿主细胞凋亡有关的蛋白,其与病毒致病性有关[4-5]。在圆环病毒科

关键词： PCV 复制起始基因组回文序列子代病毒滚环复制反向重复序列猪圆环病毒宿主细胞蛋白圆环病毒科

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猪圆环病毒2型及其相关疾病的流行趋势与防控对策

猪圆环病毒2型及其相关疾病的流行趋势与防控对策

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：刘建波张辉刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

1引言自1991年加拿大西部首次确认断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)爆发以来,该病被认为是危害全球养猪业最严重的传染病之一。在猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)中,PMWS和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)是最常见的临床表现形式。到目前为止,PMWS... 详细信息

1引言自1991年加拿大西部首次确认断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)爆发以来,该病被认为是危害全球养猪业最严重的传染病之一。在猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)中,PMWS和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)是最常见的临床表现形式。到目前为止,PMWS仍是最重要的经济性疾病。但是,PCVAD疾病的形式发生了轻微变化,PMWS的发生率有所降低而PRDC的发生率却有所升高。在P

关键词： PCVAD 沙门氏菌养猪业支原体防控对策猪圆环病毒 PRRSV 肺炎支原体感染流行趋势相关疾病

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猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：危艳武张志慧黄立平刘建波吴洪丽刘丹李胜斌王一平张辉夏伟刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

1引言猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)是引起猪多发性浆膜炎、肺炎、心包炎、胸膜炎、关节炎、中耳炎等疾病的主要病原,该病在猪群中发病率高,死亡率低。临床上Mhr常与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)等混合... 详细信息

1引言猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)是引起猪多发性浆膜炎、肺炎、心包炎、胸膜炎、关节炎、中耳炎等疾病的主要病原,该病在猪群中发病率高,死亡率低。临床上Mhr常与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)等混合感染,造成严重的猪呼吸道综合征,致使断奶仔猪的死亡率显著升高,给我国养猪业造成巨大的经济损失。2006年台湾学者Lin等[1]报道Mhr

关键词：猪鼻支原体 SEP 肠系膜淋巴结间质性肺炎相对增重率淋巴细胞增生主要病原分离鉴定巴马猪

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与PCV2基因组茎环结构相互作用宿主细胞蛋白的筛选与鉴定

与PCV2基因组茎环结构相互作用宿主细胞蛋白的筛选与鉴定

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：张辉唐青海危艳武黄立平张志慧刘建波吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库... 详细信息

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库,将总cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化酵母诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建,以药物筛选阳性克隆;通过酵母菌落PCR得到阳性克隆中的cDNA插入片段,序列分析确认。本实验成功地构建了酵母单杂交文库,筛选出1.01×106个酵母克隆,其中196个为阳性克隆,经PCR产物测序,并通过NCBI Blast法进行序列比对,确定有4种蛋白可与PCV2基因组茎环序列发生作用。本研究为进一步阐明这些宿主蛋白对PCV2复制的调节作用奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型茎环结构宿主细胞互作蛋白

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猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗免疫增强作用的研究

猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗...

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第二届免疫学博士生论坛

作者：王一平刘丹郭龙军危艳武吴红丽刘建波李胜斌黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

背景:猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明,IFN-γ、IL-2及GM-CSF等细胞因子佐剂能增强疫苗的免疫保护效力,因此可采用细... 详细信息

背景:猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明,IFN-γ、IL-2及GM-CSF等细胞因子佐剂能增强疫苗的免疫保护效力,因此可采用细胞因子与抗原组合的策略研制PCV2新型亚单位疫苗,以验证这3种细胞因子对PCV2-Cap蛋白的免疫增强作用。方法 :采用杆状病毒表达系统表达PCV2-Cap蛋白、猪IFN-γ(Po IFN-γ)、猪IL-2(Po IL-2)、猪GM-CSF(Po GM-CSF)及这3种细胞因子与PCV2-Cap蛋白的融合蛋白Cap-Po IFN-γ、Cap-Po IL-2和Cap-Po GM-CSF,制备几种不同形式的PCV2亚单位疫苗,并经鼠体模型鉴定其免疫原性;采用IPMA和阻断ELISA方法测定免疫及攻毒后PCV2特异性抗体滴度,通过监测淋巴细胞增殖反应和细胞因子分泌水平评价细胞免疫应答;采用常规PCR检测PCV2病毒血症,并经定量PCR检测攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒载量。结果 :采用杆状病毒表达系统成功地表达了PCV2-Cap蛋白、Po IFN-γ及CapPo IFN-γ融合蛋白,制备了3种PCV2亚单位疫苗:Cap-Po IFN-γ疫苗、PCV2-Cap+Po IFN-γ疫苗及PCV2-Cap疫苗,并经鼠体试验证实,PCV2-Cap+Po IFN-γ疫苗能诱导产生更高水平的PCV2特异性IPMA抗体和中和抗体滴度,明显提高T淋巴细胞的增殖能力,并显著降低攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒核酸载量。以杆状病毒表达系统成功地表达了Po IL-2、Po GM-CSF、Cap-Po IL-2融合蛋白及Cap-Po GM-CSF融合蛋白,制备了5种PCV2亚单位疫苗:Cap-Po IL-2疫苗、PCV2-Cap+Po IL-2疫苗、Cap-Po GM-CSF疫苗、PCV2-Cap+Po GM-CSF疫苗及PCV2-Cap疫苗,并经鼠体试验证实,PCV2-Cap+Po IL-2疫苗、Cap-Po GM-CSF疫苗和PCV2-Cap+Po GM-CSF疫苗均可明显提高T淋巴细胞的增殖能力,刺激淋巴细胞分泌更高水平的IFN-γ和IL-2,并显著降低攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒核酸载量。结论 :研究表明,用Po IFN-γ与PCV2-Cap蛋白混合免疫时,Po IFN-γ能显著增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫保护效力,但以Cap-Po IFN-γ融合蛋白免疫时,Po IFN-γ对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用;用Po IL-2或Po GM-CSF与PCV2-Cap蛋白混合免疫或以Cap-Po GM-CSF融合蛋白免疫时,Po IL-2和Po GM-CSF对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的抗体应答均无增强作用,但可促进免疫应答向Th1型免疫应答转变,从而增强疫苗的免疫保护效力,然而以Cap-Po IL-2融合蛋白免疫时,Po IL-2对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白亚单位疫苗 IFN-γ、IL-2及GM-CSF 免疫增强

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