检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2020年第8期42卷 779-785页

作者：徐菱张振宇郭兴于萌萌王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为建立B型流感病毒(IBV)快速诊断方法,本研究采用真核表达系统表达并纯化了IBV中高度保守的核糖核蛋白(NP),以其为抗原,免疫小鼠制备IBV NP蛋白单克隆抗体(MAb),选取抗原表位长、特异性强的MAb2B3-5作为捕获抗体,选取抗原表位短、灵敏... 详细信息

为建立B型流感病毒(IBV)快速诊断方法,本研究采用真核表达系统表达并纯化了IBV中高度保守的核糖核蛋白(NP),以其为抗原,免疫小鼠制备IBV NP蛋白单克隆抗体(MAb),选取抗原表位长、特异性强的MAb2B3-5作为捕获抗体,选取抗原表位短、灵敏度高的MAb 3C3-7经HRP标记后作为检测抗体,经条件优化,建立了检测IBV NP蛋白的双MAb夹心ELISA检测方法。结果显示,该检测方法捕获抗体包被量为每孔100 ng,检测抗体使用量为每孔20 ng,NP蛋白浓度在3.9 ng/mL^62.5 ng/mL时与OD450nm呈良好的线性关系,相关系数R2>0.99。利用该ELISA方法对多种病毒进行检测,结果显示该方法仅能与IBV发生反应,表明该方法特异性强;灵敏度试验结果显示,该方法对病毒NP蛋白的最低检测限为13.26 ng/mL,敏感性高;批内和批间重复性变异系数均小于8%,重复性好;捕获抗体可在25℃和37℃保存4 d,热稳定性好。利用本实验建立的ELISA方法和qPCR方法对本实验室保存的40份人咽拭子进行检测,该方法与qPCR方法相比符合率为70%,表明本研究建立的方法可用于临床检测。本研究建立的ELISA检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为B型流感的快速诊断、NP蛋白功能研究及定量检测提供技术支持。

关键词： B型流感病毒 NP蛋白双单克隆抗体夹心ELISA

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猪德尔塔冠状病毒BJ株的分离鉴定与致病性分析

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中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1287-1291页

作者：刘秋歌王洪峰范前进冯力陈建飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司黑龙江哈尔滨150069

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新出现的猪冠状病毒。本研究将北京某猪场PDCoV阳性仔猪腹泻样品无菌处理后接种猪睾丸(ST)细胞并连续传代培养,通过电镜、间接免疫荧光和基因序列测定对病毒培养物进行鉴定。结果表明分离到一株PDCoV,并... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新出现的猪冠状病毒。本研究将北京某猪场PDCoV阳性仔猪腹泻样品无菌处理后接种猪睾丸(ST)细胞并连续传代培养,通过电镜、间接免疫荧光和基因序列测定对病毒培养物进行鉴定。结果表明分离到一株PDCoV,并将其命名为BJ株。基于全基因组序列的系统发育树分析结果表明BJ株与我国PDCoV参考株的亲源关系较近。利用105 TCID50/mL的病毒液2 mL口服接种3日龄仔猪并观察临床症状,结果显示BJ株能够引起3日龄仔猪发病,出现典型的腹泻症状。此外,病理组织学结果表明感染仔猪的小肠绒毛损伤,免疫组化结果表明在感染仔猪的小肠组织中检测到PDCoV抗原。本研究证实了PDCoV BJ株具有致病力,丰富了与PDCoV相关的流行病学、致病性和分子进化的信息。

关键词：猪德尔塔冠状病毒分离鉴定致病性

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基于ASFV转录报告系统的高通量筛选将臭椿酮鉴定为一种广谱抗病毒化合物

基于ASFV转录报告系统的高通量筛选将臭椿酮鉴定为一种广谱抗病毒...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：张宇航张振江张帆张继文焦俊侯敏钱年超赵东明郑晓峰谭旭湖南农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室清华大学医学院传染病研究中心清华大学药学院北京市结构生物学高精尖创新中心清华大学-北京大学生命科学联合中心合肥综合性国家科学中心大健康研究院

非洲猪瘟(ASF)是一种急性、高度传染性和致命的猪病毒性疾病,正在严重危害全球养猪业。但是,目前为止没有可用于ASF防控的权威疫苗和抗病毒药物。非洲猪瘟病毒(ASFV)是ASF的病原体,在ASFV蛋白中,p72是病毒体中最丰富的成分,不仅占病毒...

非洲猪瘟(ASF)是一种急性、高度传染性和致命的猪病毒性疾病,正在严重危害全球养猪业。但是,目前为止没有可用于ASF防控的权威疫苗和抗病毒药物。非洲猪瘟病毒(ASFV)是ASF的病原体,在ASFV蛋白中,p72是病毒体中最丰富的成分,不仅占病毒颗粒总质量的32%,还是病毒组装过程中的关键衣壳蛋白,因此是抗ASFV药物设计的潜在靶标。本研究中,我们构建了一个由p72启动子驱动的荧光素酶报告系统(p72-Fluc),该系统由共转染的ASFV RNA聚合酶复合物驱动转录。使用该系统,我们筛选了3000多种化合物并获得了三种有效的抗ASFV化合物。我们进一步评估了三种化合物抗ASFV的效果,并证明在三个候选物中,臭椿酮(AIL)在纳摩尔浓度下能有效抑制p72-Fluc系统的荧光强度和ASFV的复制(IC50=15 nmol/L)。此外,采用中国流行毒株ASFV-HLJ-2018毒株进一步评估AIL对野生毒株ASFV的抗病毒作用,血细胞吸附试验和蛋白质印迹试验结果表明,AIL可以剂量依赖性方式有效抑制该野生型ASFV毒株的复制。据报道,AIL会抑制HSP90与其辅助伴侣蛋白p23之间的相互作用,并导致HSP90的客户蛋白错误折叠或降解。我们在体外实验中,通过过表达和敲低HSP90的辅助伴侣蛋白p23,发现过表达p23能显著上调p72-Fluc系统的荧光强度和ASFV的感染比例,而敲低p23会下调p72-Fluc系统的荧光强度和ASFV的复制,表明AIL的抗病毒作用与其抑制HSP90-p23辅助伴侣蛋白有关,p23促进ASFV的复制并缓解AIL的抑制作用。近百种病毒蛋白已被报道为HSP90伴侣循环的客户蛋白,由于p23既是HSP90伴侣循环的重要元件也是AIL的靶标,我们推测AIL有可能成为一种广谱抗病毒药物,并评估了其对寨卡病毒(Zika)和乙型肝炎病毒(HBV)的抗病毒能力。结果表明,AIL对寨卡病毒和乙型肝炎病毒具有显著的抗病毒活性,进一步证明AIL是一种潜在的广谱抗病毒剂。据我们所知,这是第一份关于AIL广谱抗病毒作用的报告。未来的研究可能探索AIL作为抗病毒药物的精确分子机制和临床效果。

关键词：

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雪山草鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定

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中国动物检疫 2021年第5期38卷 119-125页

作者：姜楠王雨龙张文英牛鑫鑫刘长军高玉龙高立崔红玉李凯潘青张艳萍刘爱晶王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150069 扬州大学江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进行了基因测序及序列分析。结果显示,引起该鸡群发病的病原是IBDV新型变异株,属于A2dB1基因型;这3个毒株的VP2高变区编码蛋白上含有IBDV变异株的特征性氨基酸,也具有IBDV新型变异株的独特氨基酸。结果提示,我国地方品种鸡群中也有IBDV新型变异株的流行,现有的部分商品化IBDV疫苗已不能有效预防IBDV新型变异株的流行。

关键词：传染性法氏囊病病毒新型变异株 A2dB1基因型雪山草鸡

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规模化驴场驴腺疫病原菌的分离鉴定及其对小鼠感染力的研究

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黑龙江畜牧兽医 2020年第22期 67-70,76,166页

作者：王宁王涛郭奎姜桂苗赵付伟王晓钧郭巍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒病研究团队哈尔滨150069 东阿阿胶股份有限公司国家胶类中药工程技术研究中心山东东阿252201

为了对从某千头规模养驴场采集的病料进行驴腺疫病原菌的分离鉴定并判断其毒力,试验使用已报道的特异性PCR方法进行腺疫病原的快速鉴定,再通过生化鉴定、革兰氏染色、16S rRNA测序等方法进一步确定病原菌种类,然后对分离菌株进行药敏试... 详细信息

为了对从某千头规模养驴场采集的病料进行驴腺疫病原菌的分离鉴定并判断其毒力,试验使用已报道的特异性PCR方法进行腺疫病原的快速鉴定,再通过生化鉴定、革兰氏染色、16S rRNA测序等方法进一步确定病原菌种类,然后对分离菌株进行药敏试验和Balb/c小鼠的感染试验。结果表明:特异性PCR方法初步筛选到可能含有马链球菌马亚种的样品。分离纯化后将初步分离的菌株命名为SD2018,染色镜检可见典型的链球菌菌落形态。分离菌株SD2018精氨酸、蔗糖及溶血试验结果均为阳性,其余生化试验结果均为阴性。分离菌株SD2018 16S rRNA基因测序鉴定结果与马链球菌马亚种(JQ726496.1)序列同源性超过99%,判定为马链球菌马亚种。该菌株对苯唑西林、头孢曲松、红霉素、替考拉宁、利福平敏感,10 d内感染小鼠的最小完全致死剂量为1×103 cfu。说明分离菌株SD2018对小鼠致死性强,该规模化养驴场驴腺疫的病原体为马链球菌马亚种。

关键词：驴腺疫马链球菌马亚种分离鉴定耐药性感染力

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牛副流感病毒3型核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2019年第5期41卷 495-500页

作者：李德栋向文杰林俊朱远茂薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室

为建立以牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)为包被抗原的间接ELISA方法,本研究扩增BPIV3的NP基因并克隆于原核表达载体,获得重组表达质粒p ET30-NP。将其转化至表达菌BL21(DE3),获得了可溶性表达的重组N蛋白,用镍柱在非变性条件下... 详细信息

为建立以牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)为包被抗原的间接ELISA方法,本研究扩增BPIV3的NP基因并克隆于原核表达载体,获得重组表达质粒p ET30-NP。将其转化至表达菌BL21(DE3),获得了可溶性表达的重组N蛋白,用镍柱在非变性条件下纯化后将其作为包被抗原,建立了检测BPIV3抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示作为包被抗原的重组N蛋白仅与BPIV3阳性牛血清发生特异性反应,与牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒等牛的常见病原无血清学交叉反应,表明其特异性较强。牛BPIV3阳性血清在1:640倍稀释时按该方法检测仍为阳性,显示该方法具有较高的敏感性。重复性试验显示批内变异系数小于6%,批间变异系数小于12%,表明该方法具有较好的稳定性。对94份牛血清的比较试验显示,本研究建立的间接ELISA方法与病毒中和试验的符合率为98%。利用该方法检测了394份采自接种过BPIV3灭活苗牛场的血清样品和95份未接种疫苗牛场的血清样品,结果接种疫苗的牛血清均呈强阳性,而95份未接种疫苗牛血清的阳性率为80%。本研究建立的间接ELISA方法可以试用于国内BPIV3的流行病学调查和免疫监测,为国内BPIV3的防控提供技术支持。

关键词：牛副流感病毒3型重组N蛋白间接ELISA

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3株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及其基因分型

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中国预防兽医学报 2019年第4期41卷 422-425页

作者：向文杰林俊宋文凤李德栋薛飞朱远茂中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室

为确定牛呼吸道传染病的病原以及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在临床健康牛群中是否存在持续性感染,本研究采集了内蒙古自治区和黑龙江省两个牛场牛鼻拭子46份及肺脏样品8份,采用MDBK细胞进行病毒分离培养,经BVDV特异性引物RT-PCR检测有3份... 详细信息

为确定牛呼吸道传染病的病原以及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在临床健康牛群中是否存在持续性感染,本研究采集了内蒙古自治区和黑龙江省两个牛场牛鼻拭子46份及肺脏样品8份,采用MDBK细胞进行病毒分离培养,经BVDV特异性引物RT-PCR检测有3份样品为阳性。利用间接免疫荧光检测3株阳性样品,可以观察到特异性荧光,表明分离得到3株BVDV,分别命名为480、A0583和Lung-6。进一步研究显示480、A0583和Lung-6均为非致细胞病变型。对3株分离病毒的5'端非编码区和Npro基因进化树分析显示3株病毒均属于BVDV1型,其中480株属于BVDV1c亚型,A0583株和Lung-6株同属于BVDV1m亚型。本研究首次在国内同一个牛场分离到BVDV1m(A0583)和BVDV1c(480)两个基因亚型。本研究为我国BVDV-1型不同基因亚型的抗原关系分析及BVDV疫苗的研制奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒分离鉴定基因分型

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基于牛呼吸道合胞体病毒融合前F蛋白的间接ELISA方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1126-1130,1158页

作者：王磊常继涛于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队

为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗... 详细信息

为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗牛Ig G-HRP的稀释度为1:8000,抗体阴阳性临界值为0.204。特异性试验结果显示,该ELISA方法与阿卡斑病毒(AKAV)、牛轮状病毒(BRV)、蓝舌病病毒(BTV)、口蹄疫病毒(FMDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)以及牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果显示,当BRSV阳性血清稀释倍数达1∶6400时仍为阳性结果,表明该方法具有较高的敏感性。重复性试验结果显示,ELISA组内、组间最大变异系数分别为6.80%和8.80%,表明该方法的重复性良好。对195份临床牛血清样品检测结果显示,BRSV抗体阳性率为61.0%;对其中的143份血清同时进行病毒中和试验检测,结果显示二者符合率为89.5%。上述结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于牛群中BRSV抗体的检测,为BRSV的血清流行病学调查提供可靠的技术手段。

关键词：牛呼吸道合胞体病毒融合前的F蛋白间接ELISA 抗体检测

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蛋鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定

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中国家禽 2020年第5期42卷 36-40页

作者：王雨龙范林进姜楠高玉龙李凯高立刘长军崔红玉潘青张艳萍王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150001 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在成为养禽业健康发展新的重要威胁。目前报道的IBDV新型变异株均来自肉鸡群的感染。为了解IBDV新型变异株感染蛋鸡的情况,通过对黑龙江省一个疑似非典型IBD发病... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在成为养禽业健康发展新的重要威胁。目前报道的IBDV新型变异株均来自肉鸡群的感染。为了解IBDV新型变异株感染蛋鸡的情况,通过对黑龙江省一个疑似非典型IBD发病蛋鸡群样品进行RT-PCR检测及相关分析,结果显示,引起该鸡群非典型IBD的病原是IBDV新型变异株。这是蛋鸡感染IBDV新型变异株的首次报道,对于更全面了解IBDV新型变异株的流行态势具有重要意义。

关键词：传染性法氏囊病病毒新型变异株蛋鸡

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Leachii支原体的致病作用及其传播途径

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中国预防兽医学报 2019年第7期41卷 763-766页

作者：常继涛于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队

Leachii支原体最初由Simmons等于1963年在澳大利亚患多发性关节炎犊牛的关节液内分离获得,代表菌株为PG50[1]。之后,该病原菌陆续从患乳房炎的母牛、患关节炎和肺炎的犊牛以及流产胎儿的体内获得分离[2-7]。目前全世界大约有60个leachi... 详细信息

Leachii支原体最初由Simmons等于1963年在澳大利亚患多发性关节炎犊牛的关节液内分离获得,代表菌株为PG50[1]。之后,该病原菌陆续从患乳房炎的母牛、患关节炎和肺炎的犊牛以及流产胎儿的体内获得分离[2-7]。目前全世界大约有60个leachii支原体分离株,除7株分离于德国、葡萄牙、尼日利亚、法国和中国外,其余所有菌株均分离自澳大利亚。在分类上,leachii支原体作为独立的群,与丝状支原体群和山羊支原体群同属于丝状支原体族成员[8]。

关键词：丝状支原体传播途径致病作用澳大利亚分离株关节炎流产胎儿尼日利亚

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