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中国预防兽医学报 2009年第4期31卷 300-304页

作者：周国辉于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室

本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒（FMDV）单克隆抗体，进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明，针对Asial型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量（PD50）分别为1995... 详细信息

本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒（FMDV）单克隆抗体，进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明，针对Asial型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量（PD50）分别为1995和2371；仅用8PD50单抗3E11和1IPD50单抗8E8，就可完全保护乳鼠耐受致死剂量Asial型和O型FMDV的攻击。被动免疫的乳鼠在攻毒后体重增长的百分率随单抗腹水浓度的升高而增加，而且随着单抗腹水浓度的升高，乳鼠的起始死亡时刻后延、终点死亡时刻前移。

关键词：口蹄疫病毒中和性单克隆抗体保护性免疫

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猪沙门氏菌病病原学、流行病学、诊断及防治进展

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猪业科学 2009年第12期26卷 24-28页

作者：刘芹防崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

沙门氏菌为肠杆菌科沙门氏菌属成员,具有约2500多种血清型。猪沙门氏菌病又称猪副伤寒(Paratyphoidof pigs),是由沙门氏菌属细菌感染引起的仔猪的一种传染病。急性经过为败血症,慢性者为坏死性肠炎,有时可发生卡他性或干酪性肺炎。在猪... 详细信息

沙门氏菌为肠杆菌科沙门氏菌属成员,具有约2500多种血清型。猪沙门氏菌病又称猪副伤寒(Paratyphoidof pigs),是由沙门氏菌属细菌感染引起的仔猪的一种传染病。急性经过为败血症,慢性者为坏死性肠炎,有时可发生卡他性或干酪性肺炎。在猪副伤寒的病例中,各国分离的沙门氏菌的血清型也十分复杂,其中主要致病菌为猪霍乱沙门氏菌(*** suis)、猪伤寒沙门氏菌(***-suis)。另外,鼠伤寒沙门氏菌(***)、都伯林沙门氏菌(***)和肠炎沙门氏菌(***)等也常引起本病。沙门氏菌在自然界中十分普遍,是一种条件致病菌,对家养畜禽健康、人类公共安全、食品安全都具有严重的影响。由于沙门氏菌属中的许多血清型对人、各种家畜和家禽以及其它动物有致病性,而猪也可感染多个血清型,除猪霍乱沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌外,很少有其他血清型能引起临床发病,但这些对猪非致病性的血清型可造成猪肉产品的感染。因此,它在公共卫生上具有重要意义。近年来,随着中国养猪业的快速发展,沙门氏菌对养猪业的影响越来越严重。而且沙门氏菌本身就极易产生抗药性,加上生产中抗生素的滥用,导致了沙门氏菌耐药性不断增强,耐药谱扩大,加大了对此病原的预防与治疗的难度。本文就猪沙门氏菌病的最近的研究进展进行了综述,以期为猪沙门氏菌疾病的预防与控制提供新的思路。

关键词：猪沙门氏菌病原学流行病学诊断及防治

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株分离鉴定及遗传变异分析

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株分离鉴定及遗传变异分析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：刘长明危艳武张朝霞袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR.该毒株接种细胞后能够产生细胞病变（CPE）,随传代次数增加毒价显著提升,第45... 详细信息

床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR.该毒株接种细胞后能够产生细胞病变（CPE）,随传代次数增加毒价显著提升,第45～60代毒价测定达10TCID/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测病毒抗原分布在细胞浆中;电镜观察到的病毒粒子呈圆形,直径约50～55nm。分离株Nsp2基因序列中第483和535～563位氨基酸存在缺失,属PRRSV变异株。用该毒株第5代培养物滴鼻接种试验猪(1×10 TCID),临床表现为持续高热（≥40.5℃,9d～12d）、食欲下降、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、体表淋巴结肿大等,发病率为100%（10/10）,死亡率为30%（3/10）。研究表明,PRRSV-HBR分离株对靶动物具有高致病力,培育的细胞适应毒株体外繁殖能力稳定,并产生了标志性基因突变,为该病毒致病机理、遗传变异规律、疫苗免疫等研究奠定了基础.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性遗传变异分析

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用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：危艳武刘长明张朝霞黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在10～1～10～6拷贝/μ... 详细信息

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在10～1～10～6拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R=0.9998,扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0%.用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7～10d达到高峰,其病毒核酸载量能达到10～6拷贝/μL.试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7～11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状。感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性.对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝和脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在.实验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株荧光定量RT-PCR 体内分布规律

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检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军温士刚武嘉男吴洪丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法。用于检测该病毒感染猪血清中和抗体.该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待... 详细信息

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法。用于检测该病毒感染猪血清中和抗体.该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待检猪血清抗体及辣根过氧化物酶标记的单抗进行反应,通过测定酶标单抗显示阻断ELISA检测结果。该方法与常规免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)对353份试验猪血清样品进行了平行试验,两种方法检测符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应.用阻断ELISA和血清中和试验检测PCV2血清中和抗体结果表明,两种方法呈显著正相关性(r=0.9970),其敏感性优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品检测结果显示,疫苗接种2 w开始能够检测到病毒中和抗体,4w后血清抗体阳转率达100%;此外,对来自东北3省不同地区送检的703份血清样品进行检测,抗体阳性检出率为73.4%,表明我国养猪场中PCV2感染率较高,该病毒危害严重.本研究建立的阻断ELISA具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV2流行病学调查及血清抗体检测提供了一种有效技术手段.

关键词：猪圆环病毒2型中和抗体检测单克隆抗体阻断ELISA

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我国部分地区猪圆环病毒2型流行毒株的遗传变异分析

我国部分地区猪圆环病毒2型流行毒株的遗传变异分析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

临床上由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染引起的相关疾病日益严重,流行毒株基因不断发生变异,为了了解我国PCV2流行毒株遗传变异情况,本试验对来自全国10个省份不同地区送检的90份病料中分离到19株PCV2流行毒株.通... 详细信息

临床上由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染引起的相关疾病日益严重,流行毒株基因不断发生变异,为了了解我国PCV2流行毒株遗传变异情况,本试验对来自全国10个省份不同地区送检的90份病料中分离到19株PCV2流行毒株.通过病毒基因组克隆和测序,将19株病毒分为2个大基因群和3个亚群,基因组组成分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8%、73.7%和10.5%.以1767nt毒株为基准,其第39或1039位有1个碱基缺失后突变成1766nt毒株;第1040位有1个碱基插入后突变成1768nt毒株.对19株病毒ORF2编码的Cap蛋白分析发现,有4株病毒编码基因发生了突变,出现了705nt和708nt两种突变型,使ORF2编码的Cap蛋白C末端分别有1和2个氨基酸延伸.本试验选用AccⅠ和FbaⅠ内切酶对19株病毒基因组PCR产物进行了限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),其结果可作为流行毒株分型鉴别手段.研究表明,我国猪群中流行的PCV2以基因组1767nt毒株为主,但也出现了1766nt基因变异毒株。此外,试验也证实上述毒株的ORF2编码Cap蛋白的C末端有突变现象,表明我国PCV2流行毒株呈现多样性。本研究建立的PCR-RFLP方法可为PCV2流行毒株分型提供鉴别手段.

关键词：猪圆环病毒2型流行毒株遗传变异 PCR-RFLP

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猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张朝霞刘长明危艳武袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

用纯化的重组杆状病毒表达的猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白作为检测抗原,建立了一种间接ELISA用于血清抗体检测。昆虫细胞株（Sf9）接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7... 详细信息

用纯化的重组杆状病毒表达的猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白作为检测抗原,建立了一种间接ELISA用于血清抗体检测。昆虫细胞株（Sf9）接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%左右;Ni亲和层析柱纯化获得重组蛋白回收率为1.7～1.9μg/10～8细胞,纯度为90.1%;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。建立的ELISA法时30份已知阴性血清样本检测临界OD值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3%（143/150）,特异性为91.2%（31/34）,敏感性为96.5%（112/116）;其他几种常见猪病毒参考血清无交叉.组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0%～4.8%和8.9%～9.9%;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5w抗体阳转,第8w～9w抗体水平达到高;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6%.研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血请抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段.

关键词：猪圆环病毒2型重组蛋白间接ELISA 抗体检测试剂盒

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几种中国鸡传染性支气管炎致弱毒株对流行毒株CK/CH/LDL/97Ⅰ保护作用的评价

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中国兽医学报 2009年第4期29卷 389-393页

作者：张晓楠王滨李成仁王钰刘乔然韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 青岛市动物卫生监督所山东青岛266071 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110、tl/CH/LDT3/03 F120和1株同种毒株CK/CH/LDL97ⅠF115,研究其对中国流行强毒株CK/CH/LDL97Ⅰ的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析,研究了CK... 详细信息

选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110、tl/CH/LDT3/03 F120和1株同种毒株CK/CH/LDL97ⅠF115,研究其对中国流行强毒株CK/CH/LDL97Ⅰ的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析,研究了CK/CH/LDL97Ⅰ与其他病毒的基因型关系。结果显示,CK/CH/LDL97Ⅰ属于有别于其他IBV毒株的一个独立的基因群。在此基础上,通过血清抗体检测、攻毒后发病率、死亡率、临床症状、病理变化观察以及气管和肾脏中病毒分离等方面研究了同种致弱毒株和异种致弱毒株对CK/CH/LDL97Ⅰ的免疫效力。结果显示,同种致弱毒株对CK/CH/LDL97Ⅰ强毒的攻击可提供100%的临床和病毒分泌的保护性。异种毒株tl/CH/LDT3/03 F120可提供100%的临床保护,但呼吸道病毒检出率达50%,表明对呼吸系统的保护效果不好。异种毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110免疫组临床发病率为50%,气管样品病毒检出率为100%,可见临床和对病毒分泌的保护效果均较差。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因交叉保护同种异种

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我国部分地区猪圆环病毒2型流行毒株的遗传变异分析

我国部分地区猪圆环病毒2型流行毒株的遗传变异分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

临床上由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染引起的相关疾病日益严重,流行毒株基因不断发生变异,为了了解我国PCV2流行毒株遗传变异情况,本试验对来自全国10个省份不同地区送检的90份病料中分离到19株PCV2流行毒株.通过病毒基因组克隆和测序,将19株病毒分为2个大基因群和3个亚群,基因组组成分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8％、73.7％和10.5％.以1767nt毒株为基准,其第39或1039位有1个碱基缺失后突变成1766nt毒株;第1040位有1个碱基插入后突变成1768nt毒株。对19株病毒ORF2编码的Cap蛋白分析发现,有4株病毒编码基因发生了突变,出现了705nt和708nt两种突变型,使ORF2编码的Cap蛋白C末端分别有1和2个氨基酸延伸.本试验选用AccⅠ和Fba Ⅰ内切酶对19株病毒基因组PCR产物进行了限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),其结果可作为流行毒株分型鉴别手段。研究表明,我国猪群中流行的PCV2以基因组1767nt毒株为主,但也出现了1766nt基因变异毒株。此外,试验也证实上述毒株的ORF2编码Cap蛋白的C末端有突变现象,表明我国PCV2流行毒株呈现多样性,本研究建立的PCR-RFLP方法可为PCV2流行毒株分型提供鉴别手段。

关键词：猪圆环病毒2型流行毒株遗传变异 PCR-RFLP法鉴别诊断

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猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：张朝霞刘长明危艳武袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

用纯化的重组杆状病毒表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立了一种间接ELISA用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf9)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7％左... 详细信息

用纯化的重组杆状病毒表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立了一种间接ELISA用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf9)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7％左右;Ni2+亲和层析柱纯化获得重组蛋白回收率为1.7-1.9μg/108细胞,纯度为90.1％;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3％(143/150),特异性为91.2％(31/34),敏感性为96.5％(112/116);其他几种常见猪病毒参考血清无交叉。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0％-4.8％和8.9％-9.9％;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5w抗体阳转,第8w-9w抗体水平达到高;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6％,研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型重组蛋白间接ELISA 抗体检测试剂盒纯化工艺

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