检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：刘长明危艳武张朝霞袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

临床“高热综合征”病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第45-60代毒... 详细信息

临床“高热综合征”病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第45-60代毒价测定达107.5 TCID50/mL,采用免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞浆中;电镜观察到的病毒粒子呈圆形,直径约50-55nm。分离株Nsp2基因序列中第483和535-563位氨基酸存在缺失,属PRRSV变异株。用该毒株第5代培养物滴鼻接种试验猪(1×104.5 TCID50),临床表现为持续高热(≥40.5℃,9d-12d)、食欲下降、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、体表淋巴结肿大等,发病率为100％(10/10),死亡率为30％(3/10)。研究表明,PRRSV-HBR分离株对靶动物具有高致病力,培育的细胞适应毒株体外繁殖能力稳定,并产生了标志性基因突变,为该病毒致病机理、遗传变异规律、疫苗免疫等研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性遗传变异分离鉴定基因突变

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检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军温士刚武嘉男吴洪丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法,用于检测该病毒感染猪血清中和抗体。该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待... 详细信息

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法,用于检测该病毒感染猪血清中和抗体。该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待检猪血清抗体及辣根过氧化物酶标记的单抗进行反应,通过测定酶标单抗显示阻断ELISA检测结果。该方法与常规免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)对353份试验猪血清样品进行了平行试验,两种方法检测符合率为96.0％;该方法的敏感性为97.9％,特异性为92.4％,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。用阻断ELISA和血清中和试验检测PCV2血清中和抗体结果表明,两种方法呈显著正相关性(r=0.9970),其敏感性优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品检测结果显示,疫苗接种2 w开始能够检测到病毒中和抗体,4w后血清抗体阳转率达100％;此外,对来自东北3省不同地区送检的703份血清样品进行检测,抗体阳性检出率为73.4％,表明我国养猪场中PCV2感染率较高,该病毒危害严重。本研究建立的阻断ELISA具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV2流行病学调查及血清抗体检测提供了一种有效技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型血清中和抗体检测单克隆抗体阻断ELISA法

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用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：危艳武刘长明张朝霞黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在1001-106拷贝/μL范围... 详细信息

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在1001-106拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.9998,扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0％。用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7-10d达到高峰,其病毒核酸载量能达到106拷贝/μL。试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7-11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状。感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性。对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝和脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在。实验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株荧光定量分析 RT-PCR法体内分布

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新型动物疫苗的研究现状及进展

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畜禽业 2009年第12期20卷 16-18页

作者：姚贵哲祝超张振梅崔尚金钱爱东吉林农业大学吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

近年来,免疫学、分子生物学、微生物学、生物化学和其它一些基础学科的飞速发展,为动物疫苗的研究指明了新的方向,并且提供了相关的技术条件保证,特别是基因工程学和蛋白质组学以及其它一些新的技术为主体的现代生物技术的发展更是大大... 详细信息

近年来,免疫学、分子生物学、微生物学、生物化学和其它一些基础学科的飞速发展,为动物疫苗的研究指明了新的方向,并且提供了相关的技术条件保证,特别是基因工程学和蛋白质组学以及其它一些新的技术为主体的现代生物技术的发展更是大大促进了新型的疫苗研究的步伐,并使新型疫苗的应用朝着实用化迈了一大步。目前,亚单位疫苗、基因缺失疫苗以及载体疫苗被公众认为是可以考虑作为替代传统疫苗的新型疫苗,该文对这些新型动物疫苗的研究现状和进展进行了综述,以期能够进一步促进大家对其了解,并加快其发展,以便早日应用。

关键词：疫苗学动物疫苗疫苗的研究进展

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仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与防制

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畜禽业 2009年第5期20卷 68-71页

作者：苗岚飞张振梅祝超姚贵哲李金敏崔尚金东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

新生仔猪的肠道疾病是限制养猪业养殖效率和经济收益最重要的因素之一。它主要是导致仔猪死亡率上升和饲料效率的降低，进而可能使生猪推迟上市．猪的质量下降。因此，此类疾病应引起足够重视。本文就仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与预防... 详细信息

新生仔猪的肠道疾病是限制养猪业养殖效率和经济收益最重要的因素之一。它主要是导致仔猪死亡率上升和饲料效率的降低，进而可能使生猪推迟上市．猪的质量下降。因此，此类疾病应引起足够重视。本文就仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与预防进行探讨和总结如下。

关键词：新生仔猪肠道疾病鉴别诊断防制经济收益养殖效率饲料效率养猪业

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猪细小病毒分离株感染初孕母猪的病毒组织分布和病理学观察

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养猪 2009年第3期 65-68页

作者：苗岚飞胡守萍张超范张卓崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏... 详细信息

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结,胎猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和小肠,进行组织病毒载量测定和组织病理学检测。实时定量PCR检测结果显示,攻毒组母猪的心脏、脾脏、肺脏、肾脏和子宫内膜存在病毒复制,子宫内病毒含量最高;胎猪的心脏、脾脏、肺脏中存在病毒复制。对照组脏器中无病毒复制。病理切片结果显示,攻毒组母猪肺脏出现细支气管性肺炎,脾脏出现淋巴细胞减少,心脏、肝脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结未见明显的组织病理学变化;胎猪的脏器未见明显的病理损伤。对照组未发现组织病理学变化。

关键词：猪细小病毒病毒组织分布组织病理学变化

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番鸭呼肠孤病毒p10.8蛋白致细胞凋亡功能

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中国预防兽医学报 2009年第10期31卷 766-769页

作者：张云郭东春耿宏伟王钰魏萍东北农业大学动物医学院博士后流动站黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农科院植物脱毒苗木研究所黑龙江哈尔滨150086

为确定番鸭呼肠孤病毒(DRV)p10.8蛋白的生物学功能,本研究采用RT-PCR方法扩增DRVS14株p10.8编码基因,将其克隆到真核表达载体中,构建了重组表达质粒pcDNA-p10.8;通过转染鸭胚成纤维细胞(DEF),首次对p10.8蛋白的凋亡功能进行了研究。细... 详细信息

为确定番鸭呼肠孤病毒(DRV)p10.8蛋白的生物学功能,本研究采用RT-PCR方法扩增DRVS14株p10.8编码基因,将其克隆到真核表达载体中,构建了重组表达质粒pcDNA-p10.8;通过转染鸭胚成纤维细胞(DEF),首次对p10.8蛋白的凋亡功能进行了研究。细胞转染48h后,Hoechest、DNALadder和TUNEL法的细胞凋亡检测结果显示:光镜下可见细胞形态学上出现的细胞皱缩,Hoechest染色后可见细胞核固缩,染色质凝固成团块状;DNALadder法可检测到凋亡细胞DNA样品呈梯形条带;TUNEL法可观察到褐色调亡细胞的存在。以上结果均表明,p10.8在DEF中的表达具有诱导宿主细胞凋亡的作用,是番DRV的凋亡蛋白。

关键词：番鸭呼肠孤病毒 p10.8蛋白凋亡细胞鸭胚原代成纤维细胞

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雪龙黑牛卵巢存放不同温度及不同时间对卵母细胞成熟及囊胚发育的影响

雪龙黑牛卵巢存放不同温度及不同时间对卵母细胞成熟及囊胚发育的...

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第四届中国牛业发展大会

作者：许红喜邢雪森吴蒙王秀利李曦大连雪龙产业集团股份有限公司大连水产学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

将雪龙黑牛卵巢分别于38.5℃、32℃、4℃3个不同温度放置4h、8h、12h、24h、48h不同时间间隔的卵母细胞成熟率、卵裂率及囊胚发育率。结果显示,放置于不同温度下(38.5℃、32℃、4℃)4h后,卵裂率依次为74.3%、80.3%、73.5%,囊胚发育率为3... 详细信息

将雪龙黑牛卵巢分别于38.5℃、32℃、4℃3个不同温度放置4h、8h、12h、24h、48h不同时间间隔的卵母细胞成熟率、卵裂率及囊胚发育率。结果显示,放置于不同温度下(38.5℃、32℃、4℃)4h后,卵裂率依次为74.3%、80.3%、73.5%,囊胚发育率为30.8%、34.5%、30%;8h后,观察其卵裂率为50.9%、71.3%、71.2%,囊胚发育率为24.6%、33.7%、23.1%;12h后,其卵裂率为0、4%、69.5%,囊胚发育率为0、4%、20.7%;24h后,仅放置于4℃的卵母细胞仍然可以观察到生长,其卵裂率55.8%,囊胚发育率为20%;48h后,放置于4℃的卵母细胞的卵裂率为20%、囊胚发育率为0.8%。上述观察结果表明,雪龙黑牛卵巢在≤8h的运输途中可以存放于4℃～38.5℃,≥12h的运输时间,则仅能于4℃下存储,若≥48h,雪龙黑牛卵巢卵裂率及囊胚发育率极低,即停止发育。因此,本试验结果提示,雪龙黑牛卵巢的运输应尽量在4℃条件下进行,且运输时间≤48。

关键词：卵母细胞卵丘细胞复合体卵裂率囊胚发育率体外受精技术

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5种重要猪病病毒基因芯片探针的建立及其初步应用

5种重要猪病病毒基因芯片探针的建立及其初步应用

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：陈微晶符芳蔡雪辉田志军宋淑萍李曦黑龙江省八一农垦大学黑龙江大庆1631109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究将猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、2型猪圆环病毒(PCV-2)5种病毒核酸的特异cDNA片段作为探针点制于氨基修饰的玻片上，以5种细胞培养毒的核酸作为模板，进行不对称PCR扩增... 详细信息

本研究将猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、2型猪圆环病毒(PCV-2)5种病毒核酸的特异cDNA片段作为探针点制于氨基修饰的玻片上，以5种细胞培养毒的核酸作为模板，进行不对称PCR扩增，制备靶物，经绿色荧光染料Cy3标记后，分别与cDNA微阵列的芯片探针进行杂交。杂交信号经Genepix4000A扫描仪扫描。结果显示，芯片探针可以分别特异地与Cy3标记的5种特异靶物结合。应用本研究制备的基因芯片对100份现地采集的猪全血样品进行检测，其中，PRRSV阳性样品26份，PCV-2阳性样品47份，且PRRSV、PCV-2混合感染阳性样品17份，PPV阳性样品5份，PRV阳性样品2份，CS-FV检测阳性样品20份。结果表明，本研究设计并点制的cDNA芯片可以特异的检出5种病毒，具有明确的、潜在的诊断应用性。

关键词：猪病病毒病毒感染免疫学检验基因芯片探针

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TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究

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检验检疫科学 2009年第5期19卷 17-20页

作者：白兴华原志伟李军民王亚文贺同欣冯力菏泽出入境检验检疫局山东菏泽274000 荣成出入境检验检疫局中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

本研究根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,RT-PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体得到阳性质粒,即为质粒标准品。通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检... 详细信息

本研究根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,RT-PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体得到阳性质粒,即为质粒标准品。通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法。该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 TaqMan探针荧光定量RT-PCR

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