检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2008年第5期24卷 376-382页

作者：邵昱昊韩宗玺陈露菲孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省疾病预防控制中心哈尔滨150030

在广东省采集的果子狸样品共192份,处理后接种Vero-E6细胞,从中分离到1株病毒。该病毒在Vero-E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变,表现为细胞内颗粒增多,细胞收缩、变圆,最后细胞从瓶壁脱落。经电镜观察发现,病毒粒子无囊膜,有双层衣... 详细信息

在广东省采集的果子狸样品共192份,处理后接种Vero-E6细胞,从中分离到1株病毒。该病毒在Vero-E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变,表现为细胞内颗粒增多,细胞收缩、变圆,最后细胞从瓶壁脱落。经电镜观察发现,病毒粒子无囊膜,有双层衣壳,呈正二十面体对称,具有呼肠孤病毒的形态特征,将病毒命名为MaskedPal m Civet/China/2004(MPC/04)。红细胞凝集试验表明该病毒能凝集健康人O型血红细胞,不能凝集SPF鸡、实验用普通级牛、大鼠和豚鼠的红细胞,这与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型的红细胞凝集谱相符。理化特性试验表明该病毒对氯仿有抵抗力;能耐受pH3.0的酸性环境;50℃水浴1h病毒未丧失感染能力;1mol/L MgCl2能提高病毒对热的抵抗力。为了进一步从分子水平上证实该病毒是呼肠孤病毒,用哺乳动物呼肠孤病毒特异性引物进行反转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR),扩增得到了预期大小的片段。测序结果经NCBI BLAST比较,选取同源性较高者进行序列同源性分析,发现该片段与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型参考毒株核苷酸同源性最高。以上结果证明该病毒为呼肠孤病毒科的成员。

关键词：果子狸呼肠孤病毒分离鉴定

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PRRSV和PCV-2以及PRV多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2008年第6期38卷 494-499页

作者：王小武符芳柴政孔令达蔡雪辉宋淑萍许红喜李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PC... 详细信息

根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法。敏感性试验结果显示,PRRSV、PCV-2的敏感性可达250拷贝/μL,PRV的敏感性可达500拷贝/μL。表明,该方法具有较好的特异性、重复性和敏感性,可以用于PRRSV、PCV-2和PRV的快速检测。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪伪狂犬病病毒多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光 PCR

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猪繁殖与呼吸综合征病毒Taq Man-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 944-948,991页

作者：韦天超田志军安同庆周艳君肖燕姜一峰郝晓芳张善瑞彭金美仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线... 详细信息

本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,比常规RT-PCR更敏感,可分别检测?

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR 病毒含量

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PCV2 PPV PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2008年第8期38卷 691-696页

作者：岳丰雄崔尚金冉多良张超范中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

参照GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计了4对引物分别用于扩增PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、PRRSV N基因的目的片段。通过对反应因素进行优化,建立... 详细信息

参照GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计了4对引物分别用于扩增PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、PRRSV N基因的目的片段。通过对反应因素进行优化,建立了检测PCV2、PPV、PRV、PRRSV的多重PCR(mPCR)诊断方法。敏感性和特异性结果显示,该mPCR对4种病毒的最低核酸检测量分别为29.0 pg(PCV2)、17.3 pg(PPV)、36.8 pg(PRRSV)、38.4 pg(PRV),而对猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒1型、牛病毒性腹泻黏膜病病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。119份临床样品的多重PCR检测结果显示,有3份样品同时感染PPV和PCV2,68份样品同时感染PRRSV和PCV2,其余样品均为PCV2阳性。表明,建立的多重PCR方法能够对PCV2、PPV、PRV、PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。

关键词：猪圆环病毒2型猪细小病毒猪伪狂犬病病毒猪生殖与呼吸综合征病毒多重PCR

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抗菌肽在宿主防御中的作用

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中国生物工程杂志 2008年第4期28卷 82-86页

作者：史春林王云峰石星明王玫孙妍童光志东北农业大学生研究生学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

抗菌肽广泛地存在于自然界中,其中许多抗菌肽具有直接抗微生物活性,能作用于G-,G+细菌、真菌、寄生虫甚至是包膜病毒,并且在宿主先天免疫和适应性反应中有重要的调节作用。近来,越来越多的证据表明抗菌肽是有效的免疫辅助因子,能够与其... 详细信息

抗菌肽广泛地存在于自然界中,其中许多抗菌肽具有直接抗微生物活性,能作用于G-,G+细菌、真菌、寄生虫甚至是包膜病毒,并且在宿主先天免疫和适应性反应中有重要的调节作用。近来,越来越多的证据表明抗菌肽是有效的免疫辅助因子,能够与其他的众多免疫效应子协同作用,从而起始适应性免疫,促进伤口愈合,抑制前炎症反应以及诱导和调节细胞因子和趋化因子的产生。另外,随着抗菌肽作用机理逐渐被揭开,将这些内源性肽及其衍生物制成抗感染治疗药剂将会有广阔的应用前景。

关键词：先天免疫宿主防御抗茵肽

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重组鸡β-防御素10蛋白的原核表达及其抗菌活性的测定

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 765-769,789页

作者：廖文艳马得莹韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

鸡抗菌肽属β-防御素类,在鸡的先天性免疫中发挥重要作用。本研究将克隆得到的鸡β-防御素-10基因(AvBD10)亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中构建了重组表达质粒pGEX-AvBD10。将重组质粒转化至BL21,于37℃用IPTG诱导培养不同时间,SDS-PAG... 详细信息

鸡抗菌肽属β-防御素类,在鸡的先天性免疫中发挥重要作用。本研究将克隆得到的鸡β-防御素-10基因(AvBD10)亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中构建了重组表达质粒pGEX-AvBD10。将重组质粒转化至BL21,于37℃用IPTG诱导培养不同时间,SDS-PAGE电泳与灰度扫描显示该重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.3%。表达的AvBD10融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约为31ku。重组蛋白经纯化后,以对数生长中期的大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌和猪霍乱沙门氏菌为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组鸡AvBD10蛋白的抗菌活性。结果显示,重组鸡AvBD10蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性。此外,重组鸡AvBD10蛋白在-70℃～100℃及在pH4～pH10条件下仍具有抗菌活性。

关键词：鸡AvBD10 融合蛋白抗菌活性

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鸡法氏囊B淋巴细胞三框cDNA表达文库的构建

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中国预防兽医学报 2008年第1期30卷 10-13页

作者：高玉龙刘伟高宏雷邓小芸李铁强王笑梅沈荣显中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

分离纯化3周龄SPF鸡法氏囊B淋巴细胞的mRNA,以5'端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接3种读码框的Adapter,层析柱分级纯化,通过BP重组反应分别构建3种读码框的cDNA入门文库,平均滴度分别为1×105CFU/mL、1×105... 详细信息

分离纯化3周龄SPF鸡法氏囊B淋巴细胞的mRNA,以5'端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接3种读码框的Adapter,层析柱分级纯化,通过BP重组反应分别构建3种读码框的cDNA入门文库,平均滴度分别为1×105CFU/mL、1×105CFU/mL、1.2×105CFU/mL,文库总容量分别为1.2×106CFU、1.2×106CFU、1.5×106CFU,平均插入片段分别为1270bp、1190bp和1120bp,阳性重组率均为100%。将3种读码框的cDNA入门文库扩增后提取质粒,取等量的质粒通过LR重组反应将入门文库转换为三框表达文库,经测定平均滴度为1×105CFU/mL,文库总容量为1.2×106CFU,平均插入片段为1017bp,阳性重组率为100%。结果表明所构建的三框cDNA表达文库具有较高的重组率和较大的库容量,为进一步筛选鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)在法氏囊B淋巴细胞中的受体及研究细胞嗜性奠定了基础。

关键词：三框cDNA文库 cDNA表达文库法氏囊 B淋巴细胞传染性法氏囊病毒(IBDV)

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新城疫病毒样颗粒(ND-VLPs)免疫效力的研究

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中国预防兽医学报 2008年第1期30卷 42-46,63页

作者：吴芬芳闫丽辉曹殿军刘培欣闻晓波孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为了研究ND-VLPs的免疫原性,利用共表达NDV F、HN、NP和M蛋白的重组杆状病毒rBac-F-HN-NP-M感染Sf9细胞,采用蔗糖密度梯度离心法纯化释放到细胞培养上清的VLPs,免疫60只,18日龄SPF鸡,监测血清中NDV特异性抗体滴度的变化。2周后用相同剂... 详细信息

为了研究ND-VLPs的免疫原性,利用共表达NDV F、HN、NP和M蛋白的重组杆状病毒rBac-F-HN-NP-M感染Sf9细胞,采用蔗糖密度梯度离心法纯化释放到细胞培养上清的VLPs,免疫60只,18日龄SPF鸡,监测血清中NDV特异性抗体滴度的变化。2周后用相同剂量的VLPs加强免疫。二免后2周以3.16×103EID50的F48E9株强毒滴鼻攻毒。攻毒前,LaSota灭活苗、LaSota+20μgVLP和不同剂量VLPs组(10μg、20μg、25μg)HI效价分别为28.3、28.9、24.1、26.1、26.7;攻毒后,10μg和20μgVLP免疫组仅能提供了80%和90%的保护率,但与LaSota灭活苗、LaSota+20μgVLP一样,25μgVLP试验组却能够完全抵抗致死剂量的NDV强毒攻击。本试验表明,ND-VLPs具有良好的免疫原性,25μgVLP诱导机体产生的免疫应答能抵抗致死剂量强毒的攻击。ND-VLPs有可能用来研制针对新城疫流行变异株的高效疫苗。

关键词：新城疫病毒病毒样颗粒免疫原性免疫效力

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传染性喉气管炎病毒WG株Us区基因结构分析

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 779-784页

作者：韩文雄石星明王云峰兰德松胡文玮王玫曹贵方童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

根据GenBank中的传染性喉气管炎病毒(ILTV)全序列(NCBI登录号:NC-006623),利用Oligo6.2分析序列并设计6对引物,以ILTVWG株基因组DNA为模板,PCR扩增了长度为13.1kb的区域,得到了完整的WG株的Us区序列,初步鉴定了WG株的Us区基因结构。将W... 详细信息

根据GenBank中的传染性喉气管炎病毒(ILTV)全序列(NCBI登录号:NC-006623),利用Oligo6.2分析序列并设计6对引物,以ILTVWG株基因组DNA为模板,PCR扩增了长度为13.1kb的区域,得到了完整的WG株的Us区序列,初步鉴定了WG株的Us区基因结构。将WG株的Us区序列分别与ILTVUSDA株、BHV-1、CeHV-1、EHV-1、HSV-1、HSV-2、MDV、PrV、HVT、VZV相比较,ILTVWG株与USDA株同源性为99.2%,而与其他疱疹病毒之间的同源性较低,而且Us区大小也不一致;与已发表的ILTVUSDA株Us区基因序列分别比较后发现,两者之间差异较大的基因分别为gJ基因和gD基因。其中,gJ基因在第1983个碱基处比USDA株多出30bp,DNAStar预测这30bp可能形成一个独立的抗原表位;gD基因的长度在不同的ILTV毒株之间差别较大,与其他疱疹病毒具有相似的结构特征。

关键词：传染性喉气管炎病毒 WG株 Us区基因序列分析

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实时荧光定量RT-PCR检测ICP4、IFN-γ和IL-18基因在ILTV感染鸡三叉神经节中的表达

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中国兽医学报 2008年第10期28卷 1150-1153,1166页

作者：木古丽王云峰石星明童光志何来王玫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

将20只4月龄SPF鸡人工感染传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株,于感染后39d翅静脉和肌肉注射地塞米松(DEX),感染后5、9、10、11、12、39d及DEX处理后1、2、3、5、6、7、8d采喉拭子,检测病毒DNA,并于感染前和感染后6、10、20、31d及DEX处理后2... 详细信息

将20只4月龄SPF鸡人工感染传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株,于感染后39d翅静脉和肌肉注射地塞米松(DEX),感染后5、9、10、11、12、39d及DEX处理后1、2、3、5、6、7、8d采喉拭子,检测病毒DNA,并于感染前和感染后6、10、20、31d及DEX处理后2、4、7、10、30d每组各取1只鸡颈静脉放血致死后无菌采集三叉神经节,提总RNA后利用real-timeRT-PCR的方法定量检测ICP4、IFN-γ和IL-18特异性mRNA。结果表明,在人工感染后处于潜伏状态的病毒能再被激活,并且ICP4基因在病毒还未被激活时就能低水平表达,这种低水平的立即早期(IE)基因的表达能提供持续的抗原刺激来维持神经节中的炎性细胞分泌IFN-γ和IL-18,以至于维持病毒处于潜伏状态而不致激活后感染其他的健康宿主;DEX处理后2d,IFN-γ的表达达到峰值,对病毒的再激活起抑制作用,尽管DEX处理前后IL-18的表达量没有明显变化,推测当潜伏的病毒一旦被激活时,IFN-γ可协同IL-18起到抑制IL-TV的作用。

关键词：传染性喉气管炎病毒地塞米松(DEX) 基因表达定量分析实时荧光定量RT—PCR 鸡

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