检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 879-884页

作者：李晶梅刘长军张艳萍施维松曲鹏刘爱玲闫福海中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

马立克氏病(MD)是由鸡马立克氏病病毒血清1型(MDV1)引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病,MDV1在体内的复制状况与其致病性强弱及传播能力直接相关。本实验选择近几年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株、弱毒疫苗"814&... 详细信息

马立克氏病(MD)是由鸡马立克氏病病毒血清1型(MDV1)引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病,MDV1在体内的复制状况与其致病性强弱及传播能力直接相关。本实验选择近几年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株、弱毒疫苗"814"株和国内标准MDV1强毒J-1株,分别人工感染SPF鸡,采用双重实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,检测感染后1d～28d病毒在淋巴细胞和羽髓中的复制状况。结果显示,接种1d后即可在淋巴细胞中检测到MDV1(102.6copies～105.2copies/106cells);在检测期间,淋巴细胞中病毒载量略有上升的趋势,总体呈现不规律变化,而且变化并不明显。接种7d后羽髓中病毒载量开始显著增加,14d～21d达到峰值,超强毒株峰值处病毒载量可达到107copies/106cells,峰值期病毒载量是感染前期(1d～7d)的100～10000倍。强毒株在体内的病毒载量高于弱毒株,即复制能力高于弱毒株。研究表明,MDV1国内流行的毒株有增殖速度快,病毒载量高的新特点;MDV1致病性的高低与在其在体内的复制能力的高低呈正相关。

关键词：复制动力学马立克氏病病毒血清1型双重荧光定量PCR 分离株病毒载量

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其体外传代遗传变异分析

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其体外传代遗传变异分...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘长明危艳武张朝霞袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从临床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第4... 详细信息

从临床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),随传代次数增加毒价显著提升,第45～60代毒价测定达107.5TCID50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原分布在细胞浆中;电镜观察到的病毒粒子呈圆形,直径约50nm～55nm。分离株Nsp2基因序列中第483和535～563位氨基酸存在缺失,属PRRSV变异株。该毒株Nsp2基因序列比较发现,经细胞传40代后第3115位核苷酸处插入12个碱基序列(GAGATCGCCTTT)。用该毒株第5代培养物滴鼻接种试验猪(1×104.5TCID50),临床表现为持续高热(≥40.5℃,9d～12d)、食欲下降、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、体表淋巴结肿大等,发病率为100%(10/10),死亡率为30%(3/10)。研究表明,PRRSV-HBR分离株对靶动物具有高致病力,培育的细胞适应毒株体外繁殖能力稳定,并产生了标志性基因突变,为该病毒致病机理、遗传变异规律、疫苗免疫等研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性遗传变异分析

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用免疫抑制法制备猪瘟病毒野毒株E2蛋白的特异性单克隆抗体

用免疫抑制法制备猪瘟病毒野毒株E2蛋白的特异性单克隆抗体

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

采用环磷酰胺免疫抑制法,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测,该单克... 详细信息

采用环磷酰胺免疫抑制法,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测,该单克隆抗体能够与石门株发生反应,同时能与1.1、2.1、2.2和2.3基因亚群猪瘟野毒发生特异性反应,并具有中和活性,而与猪瘟兔化弱毒疫苗株不发生反应。该单克隆抗体可以用于鉴别猪瘟野毒株和猪瘟兔化弱毒疫苗株。

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白重组杆状病毒环磷酰胺免疫抑制单克隆抗体

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猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2参考阳性血清进行试验表明,... 详细信息

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2参考阳性血清进行试验表明,血清稀释倍数(?)1:100可消除两种病毒间存在的低水平交叉反应。该方法与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA检测符合率为88.9%,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交又反应.时来自黑龙江、吉林、河北、上海、辽宁等地猪场送检的257份血清样品进行检测,PCV1和PCV2血清抗体阳性检出率分别为19.1%、80.5%.PCV1抗体阳性猪中有95.9%为PCV2阳性,表明我国猪群已存在PCV1感染,在临床上PCV1与PCV2多以混合感染形式存在。本研究建立的PCV1-IPMA方法具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV1流行病学调查及血清抗体检测提供了一种技术手段。

关键词：猪圆环病毒1型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测

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猪流行性腹泻病毒分子生物学研究进展

猪流行性腹泻病毒分子生物学研究进展

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孙东波冯力时洪艳陈建飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病[1]。PEDV与猪传染性胃

关键词：复制酶 RNA 基因组猪流行性腹泻病毒分子生物学研究非结构蛋白核衣壳蛋白冠状病毒多聚蛋白

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两株猪细小病毒分离株的分子特征分析

两株猪细小病毒分离株的分子特征分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：戚亭崔尚金张超范中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪细小病毒在临床上出现了一些新的特征,为了解猪细小病毒在我国的遗传变异情况,本文应用PCR方法对两株猪细小病毒现地分离株BQ株和ZJ株进行了基因组测序,并结合已经报道的若干国内猪细小病毒序列和国外代表株序列做了相关分析.测序结... 详细信息

猪细小病毒在临床上出现了一些新的特征,为了解猪细小病毒在我国的遗传变异情况,本文应用PCR方法对两株猪细小病毒现地分离株BQ株和ZJ株进行了基因组测序,并结合已经报道的若干国内猪细小病毒序列和国外代表株序列做了相关分析.测序结果表明猪细小病毒BQ株和ZJ株基因组全长分别为5013m和5031nt,其编码区序列均不存在碱基的插入与缺失,但在VP1/VP2终止密码子处的非编码区存在不同程度的碱基缺失,分别缺少63和45个碱基,推测可能与毒力变化有关。根据VP2蛋白的多序列比对结果以及VP2蛋白215位、378位、383位、436位和565位等关键氨基酸位点的变异情况,发现猪细小病毒感染的临床病理型(生物型)与VP2蛋白这些关键氨基酸位点的改变密切相关。遗传进化分析表明,我国猪细小病毒的演化主要发生基因漂移,其对抗原性的影响需要进一步研究。

关键词：猪细小病毒基因组序列比对遗传变异

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两株猪细小病毒分离株的分子特征分析

两株猪细小病毒分离株的分子特征分析

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：戚亭崔尚金张超范中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪细小病毒在临床上出现了一些新的特征,为了解猪细小病毒在我国的遗传变异情况,本文应用PCR方法对两株猪细小病毒现地分离株BQ株和ZJ株进行了基因组测序,并结合已经报道的若干国内猪细小病毒序列和国外代表株序列做了相关分析。测序结... 详细信息

猪细小病毒在临床上出现了一些新的特征,为了解猪细小病毒在我国的遗传变异情况,本文应用PCR方法对两株猪细小病毒现地分离株BQ株和ZJ株进行了基因组测序,并结合已经报道的若干国内猪细小病毒序列和国外代表株序列做了相关分析。测序结果表明猪细小病毒BQ株和ZJ株基因组全长分别为5013nt和5031nt,其编码区序列均不存在碱基的插入与缺失,但在VP1/VP2终止密码子处的非编码区存在不同程度的碱基缺失,分别缺少63和45个碱基,推测可能与毒力变化有关。根据VP2蛋白的多序列比对结果以及VP2蛋白215位、378位、383位、436位和565位等关键氨基酸位点的变异情况,发现猪细小病毒感染的临床病理型(生物型)与VP2蛋白这些关键氨基酸位点的改变密切相关。遗传进化分析表明,我国猪细小病毒的演化主要发生基因漂移,其对抗原性的影响需要进一步研究。

关键词：猪细小病毒基因组序列比对遗传变异

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致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定

致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：张超范刘长明危艳武刘霓虹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育一株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。分离株经细胞培养传代,... 详细信息

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育一株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。分离株经细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第24代毒价达108.5TCID50/mL。免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PRV阳性血清中和。电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观,无囊膜的病毒粒子直径约110nm～150nm,有囊膜的成熟病毒粒子直径约150nm～180nm。PCR鉴定该毒株含有gE基因,其序列与GenBank登录的7株PRV同源性为97.7～100%。用不同剂量病毒培养物接种家兔于24h～72h内全部死亡。研究表明,PRV-JF分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定基础。

关键词：猪伪狂犬病病毒强毒株分离鉴定

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猪圆环病毒2型IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用

猪圆环病毒2型IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘长明张超范危艳武张朝霞袁婧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA),用于猪圆环病毒2型(PCV2)血清抗体检测。对IPMA反应条件进行了优化,并组装成诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测PCV2人工感染猪血清,于感染后第3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检... 详细信息

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA),用于猪圆环病毒2型(PCV2)血清抗体检测。对IPMA反应条件进行了优化,并组装成诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测PCV2人工感染猪血清,于感染后第3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检出率为92.8%(52/56),同设对照组猪血清抗体检测均为阴性(33/33)。试剂盒在-20℃稳定保存18个月,对其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中PCV2污染相当严重。试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒

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猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2参考阳性血清进行试验表明,血清稀释倍数≥1:100可消除两种病毒间存在的低水平交叉反应。该方法与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA检测符合率为88.9%,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、辽宁等地猪场送检的257份血清样品进行检测,PCV1和PCV2血清抗体阳性检出率分别为19.1%、80.5%。PCV1抗体阳性猪中有95.9%为PCV2阳性,表明我国猪群已存在PCV1感染,在临床上PCV1与PCV2多以混合感染形式存在。本研究建立的PCV1-IPMA方法具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV1流行病学调查及血清抗体检测提供了一种技术手段。

关键词：猪圆环病毒1型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测

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