检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2018年第10期51卷 1995-2003页

作者：尹彩霞于少雄宋琨李素杨玉莹仇华吉长江大学动物科学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

【目的】已有研究显示,猪瘟病毒(CSFV)通过网格蛋白介导的内吞作用侵入宿主细胞,然而参与侵入过程的病毒蛋白尚待阐明。研究旨在明确E2蛋白在CSFV侵入过程中的作用。【方法】通过瞬时转染包装携带E2基因的慢病毒,将慢病毒转导悬浮293细... 详细信息

【目的】已有研究显示,猪瘟病毒(CSFV)通过网格蛋白介导的内吞作用侵入宿主细胞,然而参与侵入过程的病毒蛋白尚待阐明。研究旨在明确E2蛋白在CSFV侵入过程中的作用。【方法】通过瞬时转染包装携带E2基因的慢病毒,将慢病毒转导悬浮293细胞构建稳定表达重组E2蛋白的悬浮293细胞系,利用亲和层析的方法纯化重组E2蛋白,同时优化表达时间以增加蛋白产量。利用SDS-PAGE和Western blotting分别鉴定了重组E2蛋白的表达水平及其反应原性。通过感染试验、吸附试验以及内化试验分别探究了E2蛋白对CSFV感染、吸附以及内化的影响。将重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过阻断ELISA检测血清中多克隆抗体的阻断率。利用制备的多克隆抗体与CSFV感作后进行吸附和内化试验,进一步探究了E2蛋白在介导CSFV吸附和内化中的作用。【结果】通过倒置荧光显微镜观察转导慢病毒后的细胞系,与对照细胞相比可见明显的绿色荧光,表明慢病毒成功转导悬浮293细胞。SDS-PAGE结果显示,在还原和非还原条件下均出现与预期大小相符的蛋白条带,经Western blotting验证,上清中表达的重组E2蛋白能够被抗E2蛋白单克隆抗体WH303所识别,表明构建的悬浮293细胞系能够表达重组E2蛋白。通过优化表达条件,悬浮293细胞培养第8天时上清中重组E2蛋白浓度最高可达5.84μg·m L-1。可溶性蛋白阻断试验结果显示,重组E2蛋白具有阻断CSFV感染的活性。利用重组E2蛋白在病毒入侵过程中处理细胞对CSFV的感染同样具有显著抑制作用;阻断ELISA和中和试验结果显示,针对E2蛋白的多克隆抗体能够阻断CSFV感染,且具有良好的中和活性;吸附试验和内化试验证明,重组E2蛋白处理细胞能够显著抑制CSFV的内化,而利用多克隆抗体与CSFV感作后能够显著抑制其吸附。【结论】E2蛋白参与CSFV吸附和内化。

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白悬浮细胞系吸附内化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达鸡γ-干扰素和传染性支气管病毒S1基因的重组鸡痘病毒疫苗对鸡外周血T淋巴细胞动态分布影响的研究

引用

中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 539-543页

作者：孙永科田占成王云峰刘胜旺童光志智海东王玫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

机体的免疫应答是一个复杂的生物学过程,它以体液和细胞免疫为主,二者相互影响,相互作用,而构成了一个动态整体。本研究通过FACS技术检测SPF鸡接种共表达IBVS1基因和鸡γ-干扰素基因的重组鸡痘病毒疫苗后外周血中CD4+、CD8+和TCRδγ+... 详细信息

机体的免疫应答是一个复杂的生物学过程,它以体液和细胞免疫为主,二者相互影响,相互作用,而构成了一个动态整体。本研究通过FACS技术检测SPF鸡接种共表达IBVS1基因和鸡γ-干扰素基因的重组鸡痘病毒疫苗后外周血中CD4+、CD8+和TCRδγ+三种亚类T淋巴细胞的数量的变化,初步探讨了干扰素对鸡外周血中T淋巴细胞亚类动态分布的影响。结果表明,含有干扰素基因的重组鸡痘病毒能显著增高机体特异性的CD8+和TCRδγ+T淋巴细胞水平,CD4+T淋巴细胞比例则要低于其他的疫苗免疫组。

关键词： T淋巴细胞鸡γ-干扰素传染性支气管病毒重组鸡痘病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA方法的初步建立

引用

微生物学报 2008年第2期48卷 220-225页

作者：万春和刘明刘春国张晓霁杨涛刘大飞陈浩齐金龙乔传玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

根据GenBank发表的H1亚型猪流感HA基因序列设计引物,扩增出HA基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67B-H1,转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体获得... 详细信息

根据GenBank发表的H1亚型猪流感HA基因序列设计引物,扩增出HA基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67B-H1,转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体获得重组转座子(rBacmid-H1),在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(rBV-H1),再感染细胞,收获目的蛋白。通过血凝试验、免疫印迹法、免疫组化分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物学活性。利用表达的蛋白作为猪流感间接ELISA的抗原,初步建立H1亚型猪流感的间接ELISA检测方法,并对内蒙古、辽宁和黑龙江等地送检的93份猪血清进行了检测,阳性率为31.18%,为研制开发快速、准确、简便的H1亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定基础。

关键词： H1亚型猪流感病毒血凝素基因昆虫细胞杆状病毒表达间接ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸭肠炎病毒UL51和UL52基因的克隆及序列分析

引用

中国预防兽医学报 2008年第9期30卷 689-693页

作者：李阳安瑞李慧昕韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

利用靶基因步行PCR方法扩增得到鸭肠炎病毒(DEV Clone-03)5352bp基因片段,并进行克隆和测序。序列分析发现,该片段包含2个ORF。Blast分析表明,这2个ORF分别与单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL51和UL52基因同源,命名为DEV Clone-03UL51和UL52,... 详细信息

利用靶基因步行PCR方法扩增得到鸭肠炎病毒(DEV Clone-03)5352bp基因片段,并进行克隆和测序。序列分析发现,该片段包含2个ORF。Blast分析表明,这2个ORF分别与单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL51和UL52基因同源,命名为DEV Clone-03UL51和UL52,分别编码252和1124个氨基酸。DEV Clone-03UL51和UL52基因排列方式与HSV-1同源基因相一致,为"头对头"的转录方向,两个ORF间有236bp间隔序列。用DNAStar(Megalign)软件分别对这2个ORF和11株α-疱疹病毒参考毒株进行分析,发现DEV Clone-03UL51与HSV-1的氨基酸序列有相对较高同源性,DEV Clone-03UL52与EHV-4同源性相对较高。并且DEV Clone-03UL51基因在α-疱疹病毒中比较保守。与HSV-1UL52蛋白相似,DEV Clone-03UL52蛋白C末端存在锌指结构。系统发育分析表明,DEV Clone-03与α疱疹病毒亚科成员的关系比较保守,与Mardivirus属的成员具有较近的亲缘关系。

关键词：鸭肠炎病毒靶基因步行PCR UL51 UL52 序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖 - 呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-1a株基因型鉴定

引用

中国兽医学报 1998年第2期18卷 118-121页

作者：仇华吉郭宝清童光志刘文兴于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

根据猪繁殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲型毒株和欧洲型毒株的基因组序列设计合成了２对引物，即１００８ＰＳ／１００９ＰＲ和１０１０ＰＬＳ／１０１１ＰＬＲ。我国分离的ＣＨ－１ａ株用这２对引物均能扩增出与预期大小相符... 详细信息

根据猪繁殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲型毒株和欧洲型毒株的基因组序列设计合成了２对引物，即１００８ＰＳ／１００９ＰＲ和１０１０ＰＬＳ／１０１１ＰＬＲ。我国分离的ＣＨ－１ａ株用这２对引物均能扩增出与预期大小相符的ＲＴ－ＰＣＲ产物，分别与美洲型代表株（ＶＲ－２３３２）的ＲＴ－ＰＣＲ产物大小相当。特异性试验表明，这２对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的ＲＮＡ或ＤＮＡ以及未感染的ＭＡＲＣ－１４５细胞ＲＮＡ。间接免疫荧光试验也证明，ＣＨ－１ａ株与ＰＲＲＳＶ核衣壳蛋白特异性单克隆抗体以及美洲型毒株抗血清均呈阳性反应。因此初步证实ＣＨ－１ａ株为美洲型ＰＲＲＳＶ。

关键词：猪 PRRSV RT-PCR 基因型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪戊型肝炎病毒ORF2片段克隆及原核表达

引用

中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 298-301页

作者：赵宇军朱远茂薛飞赵立平沈荣显相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

设计套式引物,内套引物含有BamHⅠ/XhoⅡ酶切位点,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2部分片段,长度为634bp,将其克隆于PGEX-T载体,测序结果表明插入的片段属于戊型肝炎病毒ORF2部分,将该片段插入PproEXHTb表达载体... 详细信息

设计套式引物,内套引物含有BamHⅠ/XhoⅡ酶切位点,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2部分片段,长度为634bp,将其克隆于PGEX-T载体,测序结果表明插入的片段属于戊型肝炎病毒ORF2部分,将该片段插入PproEXHTb表达载体,经酶切鉴定证实获得了重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1mmol/LIPTG诱导,得到表达,表达蛋白分子量为27Ku,以包涵体形式存在。Westernblot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。

关键词：猪戊型肝炎病毒表达套式引物

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H3N2亚型猪流感病毒的拯救及HA与NA基因的替换

引用

微生物学报 2009年第6期49卷 813-819页

作者：杜金玲刘明刘春国杨涛李洪涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

【目的】为研究流感病毒突破种间屏障分子机制,筛选流感基因工程疫苗株。【方法】本试验以猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)为亲本株,利用反向遗传学操作技术,采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分段进行扩增,通过与双向转录载体p... 详细信息

【目的】为研究流感病毒突破种间屏障分子机制,筛选流感基因工程疫苗株。【方法】本试验以猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)为亲本株,利用反向遗传学操作技术,采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分段进行扩增,通过与双向转录载体pHW2000连接,重组质粒转染293T和MDCK共培养细胞,拯救出全部基因均来自于亲本株的猪流感病毒rgH3N2,并分别以人流感病毒A/PR/8/34(H1N1)、禽流感病毒A/Duck/Nanchang/4-165/2000(H4N6)、马流感病毒A/Equine/Fuyun/2008/(H3N8)的HA和NA基因替换A/Swine/Henan/S4/01的相应基因。【结果】生物学试验结果表明rgH3N2在鸡胚半数感染量、组织培养半数感染量、稳定性试验等方面都与亲本株保持一致。rgH3N2经鸡胚多次传代后血凝价最高可达到1∶256,接种MDCK细胞60h后,血凝价可以达到1∶64。基因替换后成功拯救出的重组病毒rgH1N1、rgH4N6和rgH3N8在鸡胚和细胞上均具有较高的增殖能力。【结论】病毒的成功拯救为流感病毒突破种间屏障分子机制,HA、NA基因在流感病毒跨种属传播中所扮演角色的研究和流感基因工程疫苗株的筛选奠定了基础。

关键词：猪流感反向遗传 RT-PCR H3N2亚型病毒拯救

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H9N2亚型猪流感病毒A/Swine/Shandong/1/02分离株的基因序列分析

引用

中国兽医科学 2007年第6期37卷 473-476页

作者：杨焕良乔传玲陈艳辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

从有肺炎症状的病猪中分离到1株H9N2亚型猪流感病毒（SIV）A／Swine／Shandong／1／02，对其进行了全病毒基因序列分析。结果表明，该毒株8个基因片段的核苷酸序列均来自禽流感病毒（AIV），与我国目前家禽中流行的H9N2亚型AIV毒株具有... 详细信息

从有肺炎症状的病猪中分离到1株H9N2亚型猪流感病毒（SIV）A／Swine／Shandong／1／02，对其进行了全病毒基因序列分析。结果表明，该毒株8个基因片段的核苷酸序列均来自禽流感病毒（AIV），与我国目前家禽中流行的H9N2亚型AIV毒株具有很高的同源性，与A／Duck／Hong Kong／Y280／97（H9N2）的同源性为94．1％～98．9％，与A／Chicken／Beijing／1／94（H9N2）的同源性为94．5％～98．2％；推导的其血凝素（HA）裂解位点处的氨基酸序列为P—A-R—S-S-R，完全符合H9亚型AIV欧亚分支中的类A／Chicken／Beijing／1／94亚分支的特征；基因分析结果表明，该分离株的所有基因片段均来源于H9N2亚型AIV，它可直接感染猪，并导致发病，但它并未在猪体内发生重组。

关键词：猪流感病毒 H9N2 序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达及多克隆抗体的制备

引用

中国兽医学报 2004年第3期24卷 255-257页

作者：丁忠庆刘胜旺孔宪刚宋铭忻中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

将克隆得到的鸡 IFN- γ基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体 p PROEXTMHT的 Pst 和 Kpn 位点上 ,构建了重组表达质粒 p PROEXTMHT- IFN -γ,经序列分析鉴定 ,确证目的基因克隆入载体的预期位点。将重组质粒转化大肠杆菌 DH5 α,于 37℃... 详细信息

将克隆得到的鸡 IFN- γ基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体 p PROEXTMHT的 Pst 和 Kpn 位点上 ,构建了重组表达质粒 p PROEXTMHT- IFN -γ,经序列分析鉴定 ,确证目的基因克隆入载体的预期位点。将重组质粒转化大肠杆菌 DH5 α,于 37℃不同时间诱导培养 ,SDS- PAGE电泳表明 ,该基因在大肠杆菌中发生高水平表达 ,表达的鸡 IFN- γ融合蛋白相对分子质量约为 2 2 0 0 0。重组蛋白占菌体总蛋白的 33%。经 Western blot鉴定 ,该重组蛋白质具有生物学活性。包涵体被 6 mol/ L 盐酸胍裂解后 ,通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡 IFN- γ融合蛋白及其纯化产物经 3次肌肉注射于新西兰白兔 ,制备了兔抗鸡 IFN- γ多克隆抗体。琼脂扩散结果表明 ,多克隆抗体可与纯化的鸡IFN

关键词：鸡 γ-干扰素基因大肠杆菌表达抗体生物学特性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

引用

中国兽医学报 1997年第5期17卷 431-433页

作者：刘滨东刘思国袁秀芳万梅梅孔宪刚卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标... 详细信息

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。

关键词： PCR 核酸探针传染性支气管炎病毒鸡病

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：