检索结果-内蒙古大学图书馆

密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究

自然科学进展 2009年第8期19卷 813-818页

作者：刘春国刘明孙恩成李洪涛杜金玲张新涛石薇琳谢金鑫刘大飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室及国家禽流感参考实验室哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因... 详细信息

为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI-wt-HA分别转染Vero或293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和蛋白免疫印迹(WB)实验比较HA蛋白的表达量.将两种重组质粒免疫Balb/c小鼠,比较两者诱导的抗体产生水平.三次免疫后两周用强毒攻击,通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果.IP-MA和WB实验结果表明:密码子优化后,HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高.酶联免疫吸附实验(ELISA)结果表明:小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高.攻毒试验结果表明:两种重组质粒均能够提供较好的保护.

关键词： H5亚型流感病毒 HA 密码子优化 DNA疫苗免疫效果

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立及高产细胞型疫苗株的拯救

引用

中国农业科学 2009年第5期42卷 1797-1804页

作者：刘大飞刘明刘春国杨涛万春和陈浩齐金龙杜金玲李洪涛孙恩成刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室东北农业大学动物医学院黑龙江八一农垦大学动物科技学院莱阳市城厢兽医站

【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株... 详细信息

【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株的猪流感病毒rH1N1,并且成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株re-LM株,研究结果表明二者均具有良好的遗传稳定性。rH1N1经MDCK细胞连续传代培养后,血凝价最高仅为1:64;而re-LM的血凝价最高可以稳定在1:1024,表明该毒株具有细胞繁殖高产的特性。用该重组病毒制备油乳剂灭活苗免疫2月龄仔猪,首免2周即可检测出HI抗体,平均效价在1:32以上,三免后2周HI抗体平均效价达到1:512,说明其有良好的免疫原性。【结论】H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的成功建立为猪流感病毒致病机理、传播机制及病毒基因功能的研究奠定了基础;重组细胞高产型猪流感病毒株的拯救为H1N1亚型猪流感疫苗的研制开辟了新的途径。

关键词：猪流感 H1N1亚型反向遗传操作技术细胞培养型流感疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流感病毒HA基因的克隆及杆状病毒转移载体的构建

引用

生物技术通报 2009年第9期25卷 97-100页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝乔传玲陈化兰刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)不仅给养猪业造成重大经济损失,而且威胁人类健康。血凝素(hemag-glutinin,HA)是SIV囊膜上的重要免疫原,介导病毒吸附和膜融合。针对流感病毒的中和抗体主要以HA靶标阻断受体结合,本研究通过RT-PC... 详细信息

猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)不仅给养猪业造成重大经济损失,而且威胁人类健康。血凝素(hemag-glutinin,HA)是SIV囊膜上的重要免疫原,介导病毒吸附和膜融合。针对流感病毒的中和抗体主要以HA靶标阻断受体结合,本研究通过RT-PCR扩增了猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)的HA基因,并将其克隆入pMD18-T载体。重组pMD18-T经KpnI和PstI酶切后得到的HA基因插入pMelBacA载体的KpnI/PstI位点。PCR和限制性内切酶分析鉴定表明成功构建了pMelBacA-HA转移载体。这为开发HA亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：猪流感病毒 HA基因克隆转移载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流感疫苗的研究进展

引用

黑龙江畜牧兽医 2009年第6期 32-33页

作者：刘大飞刘明刘春国杨涛刘大程中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 莱阳市城厢兽医站山东莱阳265200

猪流感（swine influenza，SI）是由流感病毒引起的一种严重呼吸道疾病，临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征。迄今已发现的A型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）有H1N1、H1N2、H1N7、H3N1、H3N... 详细信息

猪流感（swine influenza，SI）是由流感病毒引起的一种严重呼吸道疾病，临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征。迄今已发现的A型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）有H1N1、H1N2、H1N7、H3N1、H3N2、 H3N3、H3N6、H4N6、H5N1和H9N2等10种不同血清亚型。自被发现以来，猪流感已成为严重危害猪群的疾病之一，已遍及亚洲、欧洲、非洲、南美洲、北美洲等，可谓全球流行。目前，世界范围内流行的猪流感血清型主要有人源H3N2、经典猪H1N1和类禽源H1N13种。

关键词：猪流感病毒流感疫苗呼吸道疾病 virus 呼吸困难血清亚型 H9N2 H5N1

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流感病毒NP基因的克隆及杆状病毒转移载体的构建

引用

西南农业学报 2009年第5期22卷 1453-1455页

作者：赵朴郑玉姝贾贝贝乔传玲陈化兰刘兴友李海燕河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究通过RT-PCR扩增了猪流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)的NP基因,并将其克隆入pMD18-T载体。重组pMD18-T经SalI和EcoR I酶切后得到的NP基因插入pMelBacB载体的SalI/EcoRI位点。PCR和限制性内切酶分析鉴定表明成功构建了... 详细信息

关键词：猪流感病毒 NP基因克隆转移载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

H5N1亚型禽流感变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫原性研究

引用

中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 717-720页

作者：田国彬曾显营钟功勋姜永萍李雁冰施建忠毛胜刚冯菊艳王君伟陈化兰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150001

本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血... 详细信息

本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re-4重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡后,3周后平均HI抗体效价达8.75log2;免疫鸡对亲本强毒株CKSX/06,以及变异株CKNX/06和流行株GSGD/96攻击提供完全保护。以上结果表明变异株灭活疫苗种毒Re-4株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,并且以该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是研制预防H5N1亚型禽流感病毒山西变异株的理想疫苗种毒株。

关键词：禽流感 H5N1 变异株灭活疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

禽流感、新城疫可目视化诊断蛋白芯片的制备及初步应用

引用

中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 60-64页

作者：石霖王秀荣杨忠苹陶启蒙王煜武嘉男蔡冬冬包红梅陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 重庆出入境检验检疫局重庆400020

本研究制备了可以同时鉴别诊断禽流感(AI)、新城疫(ND)2种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。以超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了2种病毒蛋白抗原,用点样缓冲液稀释后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;将芯片与待检血清杂交后,再与... 详细信息

本研究制备了可以同时鉴别诊断禽流感(AI)、新城疫(ND)2种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。以超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了2种病毒蛋白抗原,用点样缓冲液稀释后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;将芯片与待检血清杂交后,再与胶体金标记的二抗杂交,银染显色后根据灰度值判定结果,从而建立了2种禽病的可视化蛋白芯片鉴别诊断方法。采用该方法对18份现地血清样品进行初步检测,结果显示该芯片可特异性的与相应的抗体杂交,无交叉反应,而且呈现较强的杂交信号,其信号灰度值在阳性血清浓度为50μg/mL～300μg/mL范围内成线性关系(Y=0.426X+4.225)。用该芯片方法和琼扩(AGP)抗体检测方法对18份现地样品进行符合率检测,结果表明该可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且检测灵敏度为是AGP方法的400倍以上。研究表明该方法可用于同步鉴别2种禽病,是一种有效的抗体检测新方法。

关键词：禽流感新城疫可视化诊断蛋白芯片

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：孔维乔传玲陈艳杨焕良展小过辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒（SIV）作为免疫原免疫6～8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、... 详细信息

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒（SIV）作为免疫原免疫6～8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、2F10、3D3、4E8、5C7、5D12,用其制备的腹水ELISA效价分别为1:10～5、1:10～6、1:10～4、1:10～5、1:10～6、1:10～5、1:10～6;其中1C9、2C5、2F10、3D3单抗亚类为IgG,而4E8、5C7、5D12则是IgG,所有的单抗轻链均为κ型.Western-blot结果显示,这7株单抗都能识别HA蛋白,均能分泌针对血凝素的抗体。将本实验室构建的pCAGGS-H3HA质粒转染到293T细胞后,分别用7株单抗进行间接免疫荧光试验,能观察到特异性绿色荧光,证实该7株单抗具有良好的特异性。该亚型单克隆抗体的制备,为SIV鉴别诊断方法的建立奠定了基础.

关键词：猪流感病毒血凝素单克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达H3N2亚型猪流感病毒NP基因重组腺病毒的构建

表达H3N2亚型猪流感病毒NP基因重组腺病毒的构建

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：展小过乔传玲陈艳杨焕良孔维吴运谱辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒p... 详细信息

以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-NP-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-NP-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选到重组腺病毒rAd-NP-EGFP。经PCR和Western-blot鉴定,结果表明NP基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物性活性.

关键词：猪流感病毒 NP基因重组腺病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒对小鼠免疫原性的研究

表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒对小鼠免疫原性的研究

引用

中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：展小过乔传玲杨焕良陈艳孔维辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

以含有SIV HA基因的重组质粒pMD18-H3HA为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因,将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有H3HA及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP。利用脂质体转... 详细信息

以含有SIV HA基因的重组质粒pMD18-H3HA为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因,将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有H3HA及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选重组腺病毒rAd-H3HA-EGFF。将重组病毒rAd-H3HA-EGFP以10～8TCID两次接种6周龄的BALB/c小鼠,时间间隔为3周,通过检测免疫小鼠的抗体水平及对病毒攻击的保护情况评价该重组病毒的免疫原性。结果HA基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物性活性。重组腺病毒rAd-H3HA-EGFP以1×10～8TCID的剂量免疫小鼠后,能够诱导产生高水平的特异性抗体,并对H3亚型SIV的攻击提供完全保护。

关键词：猪流感病毒 HA基因重组腺病毒小鼠免疫原性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：