检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2023年第1期45卷 1-8页

作者：史鑫琪季朝阳陈晓彤张子博张鑫郭慧娟田璐王洪峰陈洪岩王靖飞冯力夏长友孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学创新团队/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原与病理形态学创新团队黑龙江哈尔滨150069

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV... 详细信息

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668~aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。

关键词：猪氨基肽酶N 猪传染性胃肠炎病毒 CRISPR/Cas9 ST细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

具有免疫反应活性的猪源重组抗体的原核表达及鉴定

引用

中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 220-224页

作者：沈旦枫王睿郭佃磊霍琳琳刘永刚郭龙军王玉娥李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA... 详细信息

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA中扩增出编码抗体重链可变区(VH)基因序列和轻链可变区(VL)基因序列,将扩增的可变区基因序列分别与本实验室前期克隆的猪源抗体轻链恒定区(CL)和重链恒定区(CH)基因序列连接后,以Linker序列将轻链和重链全长基因序列相连,构建全长的猪源抗体编码基因(H-linker-L)。将该基因克隆于原核表达载体p ET-28a中进行原核表达及纯化。Western blot鉴定结果显示,表达的重组蛋白能够被抗猪IgG抗体所识别,表明表达的重组蛋白为PrAb;经PRRSV包被的ELISA鉴定,PrAb与PRRSV弱毒株CH1R和强毒株HuN4呈阳性反应,表明所制备的PrAb为PRRSV特异性抗体。本实验为进一步制备诊断PRRS的猪源化重组抗体奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒原核表达猪源化重组抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

引用

中国畜牧兽医 2017年第3期44卷 667-672页

作者：王鑫石达董慧曹丽艳陈建飞时洪艳张鑫冯力东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

为了筛选与猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白,深入研究病毒入侵及致病的分子机制,本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA,反转录合成cDNA第一链之后,通过SMART... 详细信息

为了筛选与猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白,深入研究病毒入侵及致病的分子机制,本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA,反转录合成cDNA第一链之后,通过SMART技术合成了双链cDNA,并利用同源重组的方法,构建了ST细胞的酵母cDNA文库。结果显示,文库滴度为8.1×108 CFU/mL,插入的双链cDNA片段大小为250~1 000bp,平均大小约为500bp,文库的重组率为96%。此文库可用于筛选与病毒相互作用的ST细胞宿主蛋白,为进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础。

关键词：猪细小病毒酵母双杂交 ST细胞 cDNA文库

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

临床条件下PCV2灭活苗仔猪免疫程序优化试验

临床条件下PCV2灭活苗仔猪免疫程序优化试验

引用

第四十三届养猪产业博览会暨研讨会

作者：张志慧危艳武黄立平吴洪丽刘丹夏伟刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为了比较PCV2灭活苗(LG株)不同免疫程序对临床仔猪的免疫效果,本研究依据不同的免疫时间、免疫剂量和免疫次数设计了10组免疫程序.在临床条件下,从试验猪场中选取2～4周龄仔猪50头,随机分组10组,每组5头.采用PCR和IPMA检测疫苗免疫血清... 详细信息

为了比较PCV2灭活苗(LG株)不同免疫程序对临床仔猪的免疫效果,本研究依据不同的免疫时间、免疫剂量和免疫次数设计了10组免疫程序.在临床条件下,从试验猪场中选取2～4周龄仔猪50头,随机分组10组,每组5头.采用PCR和IPMA检测疫苗免疫血清中病毒核酸和抗体消长情况.检测抗体结果显示,对于疫苗单剂量一次免疫组,免疫后28d,4周龄仔猪PCV2抗体效价增长显著(p＜0.05);对于疫苗加强免疫组,免疫后28d各组抗体效价均显著提高(p＜0.05).病毒核酸检测显示,疫苗加强免疫组能够更好地清除病毒血症,4周龄仔猪疫苗单剂量免疫组效果次之.综合病毒核酸和抗体产生消长规律,推荐2种免疫程序:加强免疫:首免3周龄单剂量免疫,间隔3w加强免疫;一次性免疫:4周龄实施单剂量疫苗免疫.此外,仔猪疫苗免疫时母源抗体效价对疫苗免疫的影响试验表明,在低水平的母源抗体实施疫苗免疫时,免疫后产生的抗体水平较高,而高水平的母源抗体免疫时,仔猪抗体水平无明显变化.

关键词：仔猪养殖猪圆环病毒2型灭火疫苗免疫程序母源抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

引用

第四十三届养猪产业博览会暨研讨会

作者：危艳武张志慧黄立平刘建波吴洪丽刘丹李胜斌王一平张辉夏伟刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株猪鼻支原体(Mhr),命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rna基因序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和7... 详细信息

从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株猪鼻支原体(Mhr),命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rna基因序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和74.0％.取Mhr-DL株培养物(1.8×109CCU/mL)经腹腔和气管途径接种SPF小型巴马猪,临床症状表现为精神沉郁、粪便干燥、食欲不振、结膜炎、体温高达41.6℃;剖检病理表现为肺脏、肝脏、脾脏等器官纤维渗出,淋巴结充血肿胀、胸膜炎、腹膜炎、肺脏呈虾肉样病变.菌株核酸检测发现,肺脏和扁桃体检出率最高;组织病理表现为间质性肺炎,淋巴细胞增生、坏死、崩解,肾毛细血管淤血,小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整,心脏小血管淤血,脾白髓内淋巴细胞增生.本研究获得的Mhr-DL菌株,为开展Mhr感染引起的疫病防控技术的研究奠定了基础.

关键词：猪鼻支原体分离鉴定工艺巴马猪致病性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

2014年部分地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查

引用

中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 335-338页

作者：常铁城陈建飞冯力倪宏波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25... 详细信息

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25个,占总数的59.52%;混合感染PEDV和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的猪场有2个,占总数的4.76%,PEDV和猪轮状病毒(Po RV)混合感染猪场有7个,占总数的16.67%;3种病毒均混合感染的猪场有2个,占总数的4.76%。结果表明PEDV在我国的猪腹泻病病原中仍占主导地位。对2014年分离的21株PEDV ORF3基因进行测序分析,并与Gen Bank中登录的12株国内外PEDV参考株相关序列进行遗传变异分析。这33个PEDV株的ORF3基因系统发育树显示,目前我国的PEDV现地病毒株分布在Ⅰ群中的Ⅰ-Ⅰ亚群和Ⅰ-Ⅲ亚群。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行病学调查 ORF3基因序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪瘟病毒衣壳蛋白核仁定位信号鉴定

引用

中国预防兽医学报 2015年第2期37卷 93-96页

作者：张鑫刘宁时洪艳徐佳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150069

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)在细胞中的核仁定位信号(No LS),本研究采用截短表达的方法将含有C基因不同片段的真核表达重组质粒转染猪睾丸细胞(ST)。结果表明,瞬时表达的截短C蛋白的aa51-aa71多肽定位于ST细胞核仁中。而将C蛋白的a... 详细信息

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)在细胞中的核仁定位信号(No LS),本研究采用截短表达的方法将含有C基因不同片段的真核表达重组质粒转染猪睾丸细胞(ST)。结果表明,瞬时表达的截短C蛋白的aa51-aa71多肽定位于ST细胞核仁中。而将C蛋白的aa51-aa71缺失突变后,C蛋白则丧失了其核仁定位的能力。此外,将C蛋白的51KKK53突变为51AAA53,也同样导致C蛋白丧失核仁定位能力,表明该序列为核仁定位的核心基序。本研究为进一步分析C蛋白在CSFV复制过程中的功能提供了实验依据。

关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白核仁定位信号

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪瘟病毒衣壳蛋白与宿主细胞核仁素蛋白相互作用

引用

中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 430-433页

作者：张鑫时洪艳徐佳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150069

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)与宿主细胞核仁素(NCL)蛋白的相互作用,本研究将重组质粒p EGFP-CSFV-C转染至猪睾丸细胞(ST)中,采用GST pull-down和免疫共沉淀方法沉淀ST细胞中的NCL蛋白,通过共聚焦显微镜分析C蛋白和NCL蛋白的共定位... 详细信息

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)与宿主细胞核仁素(NCL)蛋白的相互作用,本研究将重组质粒p EGFP-CSFV-C转染至猪睾丸细胞(ST)中,采用GST pull-down和免疫共沉淀方法沉淀ST细胞中的NCL蛋白,通过共聚焦显微镜分析C蛋白和NCL蛋白的共定位情况。结果表明,CSFV C蛋白与NCL蛋白在核仁中存在共定位现象,并且在体外和转染细胞中均存在相互作用。NCL蛋白被抑制后,CSFV的复制能力下降。本研究为进一步分析C蛋白核转运机制以及在CSFV复制过程中的功能提供了实验依据。

关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白核仁素相互作用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪源抗体基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

引用

中国预防兽医学报 2015年第9期37卷 712-715页

作者：王香玲柴政田华彬符芳姜福成郑楠张雪云郭佃磊李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150025

为制备原核表达猪源重组抗体,本研究利用FITC标记的山羊抗猪Ig G标记猪外周血淋巴细胞,通过流式细胞术筛选出Ig G+B细胞。以提取的Ig G+B细胞总RNA反转录制备的c DNA为模板,通过PCR扩增猪抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),将扩增的... 详细信息

为制备原核表达猪源重组抗体,本研究利用FITC标记的山羊抗猪Ig G标记猪外周血淋巴细胞,通过流式细胞术筛选出Ig G+B细胞。以提取的Ig G+B细胞总RNA反转录制备的c DNA为模板,通过PCR扩增猪抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),将扩增的可变区与本实验室前期克隆的猪源抗体恒定区编码序列通过Linker序列[(Gly)4Ser]3连接,构建全长的猪源抗体编码基因(H-linker-L)。将该基因克隆于原核表达载体p ET-28a中进行原核表达及纯化。Western blot鉴定结果表明,该重组蛋白能够被兔抗猪Ig G-HRP所识别,表明构建的重组抗体为猪源抗体。本研究为特异性猪源抗体的制备以及猪病的防制奠定了基础。

关键词： B淋巴细胞抗体可变区猪源抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪肾细胞源三种蛋白质对猪圆环病毒2型复制的调节作用

引用

畜牧兽医学报 2015年第11期46卷 2040-2049页

作者：张辉唐青海黄立平危艳武刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001 南阳师范学院南阳市兽医生物工程技术研究中心/昆虫生物反应器河南省工程实验室南阳473061

为了验证猪肾细胞系(PK-15)源3种蛋白质基因(AP2α2、Elf4和ISCU)表达水平对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的调节作用,采用RT-PCR扩增这3种蛋白质编码基因,构建真核表达载体;同时设计这3种蛋白质的RNAi片段,分别插入到pGPU6-GFP载体构建shRN... 详细信息

为了验证猪肾细胞系(PK-15)源3种蛋白质基因(AP2α2、Elf4和ISCU)表达水平对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的调节作用,采用RT-PCR扩增这3种蛋白质编码基因,构建真核表达载体;同时设计这3种蛋白质的RNAi片段,分别插入到pGPU6-GFP载体构建shRNA干扰载体。以荧光定量PCR法检测干扰效率,选取干扰效率较高的干扰载体,利用G418筛选转染真核表达载体或干扰载体后的PK-15细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)法检测PCV2LG毒株在这些细胞中的复制效率。结果表明,Elf4蛋白和ISCU蛋白基因过表达能够显著增强PCV2的复制;而AP2α2蛋白基因过表达对PCV2的复制无显著影响。AP2α2、ISCU和Elf4这3种蛋白质基因被干扰表达后均可降低PCV2复制效率,表明这3种宿主细胞蛋白质对该病毒复制具有调节作用。

关键词：猪圆环病毒2型复制 AP2α2 Elf4 ISCU

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：