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猪圆环病毒2型(PCV2)主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病,临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等,统称为猪圆环病毒病。本病于1991年在加拿大发现,相继北美、欧洲、亚洲等几乎所有养猪国家均有本病流行的报道。由于PCV2与其他多种病原混合感染情况不尽相同,猪群发表死亡率不等,较严重的地区暴病时死淘率高达40%,公认为继猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)之后,新发猪的重要传染病。

关键词：猪圆环病毒病 PRRSV PCV 防控对策母源抗体断奶仔猪多系统衰竭综合征感染性分子克隆流行趋势

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重组猪圆环病毒2型表达V5表位标签的构建及其拯救毒株的体外生物学特性

重组猪圆环病毒2型表达V5表位标签的构建及其拯救毒株的体外生物...

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：黄立平陆月华郭龙军危艳武吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

猪圆环病毒2型(PCV2)是引发PMWS的主要病原.为了研究PCV2作为表达载体的可行性，构建了以PCV2基因组为骨架，在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签，用构建感染性分子克隆重组质粒转染细... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引发PMWS的主要病原.为了研究PCV2作为表达载体的可行性，构建了以PCV2基因组为骨架，在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签，用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞，拯救出一株表达V5表位标签的重组毒株，命名为recPCV2/CL-V5.采用免疫过氧化物酶单层试验(PMA)、血清中和试验(SNA)、捕获ELISA及免疫电镜对重组毒株进行了鉴定. 结果表明：在recPCV2/CL-V5株感染细胞中检出PCV2和V5表位抗原;PCV2阳性血清和中和性单克隆抗体(1D2)能够完全中和recPCV2/CL-V5株的细胞感染性;recPCV2/CL-V5株在繁殖动力学和形态学上与亲本病毒基本一致.鉴于recPCV2/CL-V5株插入了一个V5表位，采用PCR、IPMA和捕获ELISA与亲本毒株相鉴别.recPCV2/CL-V5株经细胞连续传10代，体外培养增殖性能稳定，毒价可达106.25TCID50/mL.拯救的带有V5表位标签的重组PCV2毒株，为深入研究该病毒复制理、抗原表位展示及分子标记疫苗和鉴别诊断等开创了新的平台.

关键词：猪圆环病毒2型 V5表位标记毒株生物学特性

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猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：张龙刘建波黄立平危艳武郭龙军吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

为了表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备,以含tTTV1全长基因组的重组质粒(pMD18-TTVl-SY13)为模板,用高保真PCR法扩增了PTTV10RF1 (1501～2475)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa),引物两端设计了Sal Ⅰ和Not Ⅰ酶切位... 详细信息

为了表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备,以含tTTV1全长基因组的重组质粒(pMD18-TTVl-SY13)为模板,用高保真PCR法扩增了PTTV10RF1 (1501～2475)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa),引物两端设计了Sal Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点,将PCR产物克隆到pGEX-6P-1载体,构建了重组质粒(pGEX-TTVl-ORFl-C1).经序列验证的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta (DE3)菌株进行诱导表达,获得了融合GST的PTTVl-rCap重组蛋白,经SDS-PAGE电泳分析及Westem blot鉴定,目的蛋白获得了高效表达,分子量约64.0kDa,以包涵体形式存在.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术获得了8株稳定分泌抗PTTVl-rCap蛋白的杂交瘤细胞株,依次命名为1H4、1E9、1E11、4G12、5C5、7B8、8C2、8G2,单抗亚类鉴定均为IgG1,轻链为K型;单抗培养上清效价为400～3200倍,腹水为4.0×105～6.4×106;其中有7株单抗与PTTVl-rCap蛋白产生特异性反应,另1株单抗(1E11)呈阴性,可能针对构象表位.本研究表达的PTTVl-rCap蛋白和制备的单抗,为进一步建立检测该病毒的诊断方法及抗原表位分析奠定了基础.

关键词：猪输血传播病毒1型(PTTV1) 重组Cap蛋白表达单抗制备

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪圆环病毒型共感染协同致病性研究

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪圆环病毒型共感染协同致病性...

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺... 详细信息

为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+CD4+CD8-、CD3+ CD4-CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、 TNF-a、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。试验结果表明,HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60％;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子(尤以TNF-a)变化也最为明显。临床猪群中HP-PRRSV和PCV2普遍存在共感染,猪群感染HP-PRRSV后再感染PCV2,可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染协同致病性

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猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆与拯救病毒的体外生物学特性

猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆与拯救病毒的体外生物学...

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重，流行毒株基因不断发生变异，根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c三个基因型，还有PCV2d基因型新报道，这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明.采用感染性克隆技术构建了... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重，流行毒株基因不断发生变异，根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c三个基因型，还有PCV2d基因型新报道，这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明.采用感染性克隆技术构建了不同基因型代表性毒株，对拯救的毒株进行体外生物学特性试验.本研究构建了4个不同基因型的PCV2感染性分子克隆，经转化细胞后拯救4个克隆毒株，经核酸序列分析、病毒形态学观察、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)等证实属于不同基因型的PCV2毒株;拯救的毒株均通过细胞连续传10代，病毒增殖能力稳定，毒价均可达到105.0TCID50/ml;用具有中和病毒活性的单克隆抗体(1D2株)进行抗原捕获ELISA检测，拯救的PCV2a/rCL毒株与该单抗产生特异性反应，另3个克隆毒株(PCV2b/rYJ、rJF和PCV2d/rBDH)与该单抗均无反应，表明它们属于不同基因型代表毒株.这表明我国猪群中PCV2流行毒株存在不同基因型，其病毒抗原特性各异，构建和拯救了4个代表不同基因型PCV2克隆毒株，为进一步研究其致病性差异奠定了基础.

关键词： PCV2 不同基因型感染性克隆病毒拯救生物学特性

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猪输血传播病毒2型(PTTV2)Cap蛋白在杆状病毒中的表达及活性测定

猪输血传播病毒2型(PTTV2)Cap蛋白在杆状病毒中的表达及活性测定

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室哈尔滨150001

PTTV1和PTTV2基因组结构相似,有3个大的开放阅读框(Open reading frames,ORFs)(ORF1、ORF2和ORF3),其中ORF1被认为是编码病毒壳体蛋白(Cap)的基因,ORF2编码可能病毒复制酶相关蛋白(Rep),ORF3编码蛋白与细胞凋亡有关.由于Cap蛋白为病毒... 详细信息

PTTV1和PTTV2基因组结构相似,有3个大的开放阅读框(Open reading frames,ORFs)(ORF1、ORF2和ORF3),其中ORF1被认为是编码病毒壳体蛋白(Cap)的基因,ORF2编码可能病毒复制酶相关蛋白(Rep),ORF3编码蛋白与细胞凋亡有关.由于Cap蛋白为病毒主要结构组成蛋白,能够刺激机体产生体液和细胞免疫反应,是建立检测诊断方法的理想靶抗原.为了开展该病毒血清学诊断方法的建立,本研究对PTTV2的ORF1基因进行扩增,并克隆到pBlueBac4.5N5-His TOPO TA载体,分别构建了PTTV2-ORF1全长序列(pBlueBac4.5N5-His-PTTV2-ORF 1-F)和截短的N端ORF1部分序列(pBlueBac4.5N5-His-PTTV2-ORF 1-S)的重组质粒.将上述2种重组质粒与Bac-N-BlueTM DNA共转染昆虫细胞(Sf21),经3次病毒蚀斑克隆,获得了2株重组杆状病毒,分别表达全长和截短的TTV2 Cap(rBlueBac-PTTV2-ORF1-F和rBlueBac-PTTV2-ORF1-S).重组杆状病毒毒种接种昆虫细胞进行重组蛋白表达,优化表达条件,用SDS-PAGE和Western blot鉴定表明,表达的全长和截短重组蛋白分子质量分别为79kDa和43 kDa.在重组蛋白C末端设计了6 xHis-Tag标签,采用Ni2+亲和层析法进行了蛋白纯化.为该病毒血清抗体检测和疫苗免疫的研究奠定了基础.

关键词：猪输血传播病毒2型重组Cap蛋白杆状病毒表达

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猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白全长的原核表达及其反应原性分析

猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白全长的原核表达及其反应原性分析

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中关村全球农业生物技术创新论坛

作者：张志榜陈建飞时洪艳陈小金冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

根据猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白的基因组序列，设计一对引物，采用RT-PCR方法扩增出M基因，将其克隆至原核表达载体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M，经测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3)，并进行IPTG诱导表达。结果表明重组菌pMXB-... 详细信息

根据猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白的基因组序列，设计一对引物，采用RT-PCR方法扩增出M基因，将其克隆至原核表达载体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M，经测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3)，并进行IPTG诱导表达。结果表明重组菌pMXB-M表达的融合蛋白MBP-M-CBD(rM)的分子质量约为951ku。在IPTG的浓度为0.8mmol/L，诱导时间为5h时，重组菌的表达效果最好，重组蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。Western-blot结果显示，rM能与兔抗PEDV多克隆血清及PEDVM蛋白单克隆抗体发生特异的免疫印迹反应，表明原核表达的rM蛋白具有良好的反应原性，为进一步开展关于PEDV M蛋白的研究奠定基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒跨膜蛋白原核表达免疫印迹

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我国猪圆环病毒病流行趋势与防控对策

我国猪圆环病毒病流行趋势与防控对策

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中国畜牧兽医学会2011学术年会

作者：刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

猪圆环病毒2型(PCV2)主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病。文章综述了引起主要疫病的临床症状，分析了流行趋势与毒株变异情况，介绍了国外同类疫苗的研究情况以及我国国产疫苗的研制历程、特点和推广应用情... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病。文章综述了引起主要疫病的临床症状，分析了流行趋势与毒株变异情况，介绍了国外同类疫苗的研究情况以及我国国产疫苗的研制历程、特点和推广应用情况，提出了国产疫苗的免疫过程及注意事项。

关键词：猪圆环病毒病流行病学家畜免疫疫苗开发疫病防控

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猪流行性腹泻病毒检测与遗传演化分析

猪流行性腹泻病毒检测与遗传演化分析

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：陈建飞刘孝珍石达时洪艳史楠冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨 150001 东北农业大学生命科学院哈尔滨150030

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