检索结果-内蒙古大学图书馆

首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：李国新周艳君于海田志军闫丽萍童光志中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

本研究应用表达HA的DNA疫苗和重组病毒免疫小鼠，探讨了不同类型疫苗的联合免疫对猪流感病毒攻击的保护效力。

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗 rPRV-HA C3d Prime-boost免疫策略联合免疫效力

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PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定

PEDV S蛋白B细胞抗原表位的筛选和鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孙东波朗洪武时洪艳陈建飞崔晓辰王承宝佟有恩冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室中国兽医药品监察所

以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的免疫优势区S1(1bp～2367bp)为靶基因,利用基于gIII表达外源多肽的fd丝状噬菌体展示系统,构建S1基因噬菌体展示肽库,以纯化的兔抗PEDV多克隆血清为靶蛋白对S1基因噬菌... 详细信息

以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的免疫优势区S1(1bp～2367bp)为靶基因,利用基于gIII表达外源多肽的fd丝状噬菌体展示系统,构建S1基因噬菌体展示肽库,以纯化的兔抗PEDV多克隆血清为靶蛋白对S1基因噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选,结果获得3个高亲和力的序列,分别命名为S1P1(248aa～280aa)、S1P2(442aa～499aa)和S1P3(697aa～742aa)。ELISA和Western blot结果显示,S1P1、S1P2和S1P3短肽都能被兔抗PEDV多克隆血清识别,其中S1P3反应性最强。为了进一步揭示S1P1、S1P2和S1P3短肽的抗原性,3个短肽GST融合蛋白和它们串连后GST融合蛋白的单因子血清被制备,间接免疫荧光试验(IFA)结果证实,抗S1P2-GST、S1P3-GST和S1P123-GST融合蛋白的单因子血清能够识别Vero细胞培养物中天然的PEDV。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白抗原表位噬菌体展示

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猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量RT2PCR检测方法的建立

猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量RT2PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：白兴华冯力陈建飞时洪艳孙东波吴波平高秀春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学

根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT2PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。... 详细信息

根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT2PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。结果,该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性,而常规RT2PCR方法只能检测到1.53×103拷/μL。对37份现地病料的检测结果也表明该法(检出17份)比常规RT2PCR方法(检出12份)和TGEV抗原快速检测试剂盒(免疫层析法,检出10份)的敏感性高。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 TaqMan探针荧光定量RT2PCR

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猪轮状病毒OSU强毒株VP7基因的克隆及其抗原表位原核表达和免疫学活性分析

猪轮状病毒OSU强毒株VP7基因的克隆及其抗原表位原核表达和免疫学...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：时洪艳冯力陈建飞孙东波吴波平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学

参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的VP7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-VP7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切... 详细信息

参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的VP7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-VP7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的表达引物进行PCR扩增得到含有VP7中和抗原表位区域639bp的基因片段,定向克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经酶切PCR鉴定的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(终浓度为1.0mmol/mL)37℃诱导4h后,SDS-PAGE电泳显示表达了大小约50ku带GST标签的融合蛋白,薄层扫描显示表达蛋白量占菌体总蛋白的33.2%。Western blot分析表明该VP7重组蛋白可与PRV阳性血清特异性反应。

关键词：猪轮状病毒 VP7基因克隆原核表达

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猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03全长cDNA克隆的构建

猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03全长cDNA克隆的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：吴波平冯力时洪艳陈建飞孙东波高秀春白兴华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学

为构建猪捷申病毒(PTV)感染性克隆,进行病毒基因组结构、功能及新型疫苗研究,根据NCBI发表的PTV Swine/CH/IMH/03株及Talfan株核苷酸序列,设计并合成了4对特异性引物,PCR扩增并克隆覆盖PTV swine/CH/IMH/03全长基因组的4个片段。经过反... 详细信息

为构建猪捷申病毒(PTV)感染性克隆,进行病毒基因组结构、功能及新型疫苗研究,根据NCBI发表的PTV Swine/CH/IMH/03株及Talfan株核苷酸序列,设计并合成了4对特异性引物,PCR扩增并克隆覆盖PTV swine/CH/IMH/03全长基因组的4个片段。经过反复拼接和测序,最终将PTV全长cDNA定向克隆到pBluescriptSK(+)中。PCR、双酶切及测序鉴定证明PTV全长cDNA克隆构建成功。与Swine/CH/IMH/03亲本株及NCBI登录的其他PTV毒株序列比对发现,该克隆只有3个位点存在核苷酸及氨基酸突变,分别位于2A、2C及3D中。

关键词： PTV 全长cDNA克隆感染性克隆

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猪瘟病毒JL-1(06)株的分离鉴定及其全基因组序列分析

猪瘟病毒JL-1(06)株的分离鉴定及其全基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：金美伶成丹孙元李娜彭伍平夏照和仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室延边大学农学院

用PK15细胞从吉林某猪场疑似急性猪瘟仔猪的脾脏中分离出1株猪瘟病毒,命名为JL-1(06)。参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从细胞培养物中扩增得到了JL-1(06)基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD1... 详细信息

用PK15细胞从吉林某猪场疑似急性猪瘟仔猪的脾脏中分离出1株猪瘟病毒,命名为JL-1(06)。参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从细胞培养物中扩增得到了JL-1(06)基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD18-T载体中,经测序和拼接后,获得了JL-1(06)株基因组全序列。序列分析表明,JL-1(06)基因组全长12298bp,含有1个大的开放阅读框架(ORF),编码1个由3898个氨基酸组成的多聚蛋白,其5-UTR和3-UTR分别由373和231bp组成。该分离株与与石门株的核苷酸和氨基酸同源性在99.4%以上,表明JL-1(06)属于1基因型中的1.1基因亚型。

关键词：猪瘟病毒病毒分离基因组序列同源性分析

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免疫层析快速诊断试纸条的制备及在养猪业上的应用

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畜禽业 2008年第1期19卷 72-75页

作者：周盛华崔尚金戚亭岳丰雄张超范东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

胶体金免疫层析技术是一种微量、特异、简便和结果容易判定的新的检测方法,非常适用于基层兽医和猪场。本文综述了免疫层析快速诊断试纸条的基本原理、制备方法、标记技术以及目前在养猪业上的应用情况。

关键词：胶体金试纸条猪病

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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：陈建飞冯力时洪艳孙东波白兴华佟有恩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨维科生物技术开发公司

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777... 详细信息

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和ZhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白基因序列同源性重组蛋白免疫学活性

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反向遗传操作研究进展

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东北农业大学学报 2008年第1期39卷 134-138页

作者：吴波平时洪艳陈建飞冯力东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

反向遗传操作(又称感染性克隆)为在DNA水平上研究RNA病毒的基因组结构及功能和病毒宿主相互作用提供了重要手段。文章综述了反向遗传操作的研究策略,包括全长克隆的获得、体外转录和病毒的挽救,概括了反向遗传操作在病毒分子生物学研究... 详细信息

反向遗传操作(又称感染性克隆)为在DNA水平上研究RNA病毒的基因组结构及功能和病毒宿主相互作用提供了重要手段。文章综述了反向遗传操作的研究策略,包括全长克隆的获得、体外转录和病毒的挽救,概括了反向遗传操作在病毒分子生物学研究、疫苗的研制、基因治疗和重组载体中的应用,分析了当前反向遗传操作研究中存在的问题。

关键词：反向遗传操作感染性克隆全长克隆体外转录病毒挽救

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PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：苗岚飞崔尚金张超范胡守萍陈长木周盛华岳丰雄戚亭谢红玲张垚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室东北农业大学动物医学学院

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID=10～7/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于... 详细信息

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID=10～7/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第0、7、14、28、35天进行PCV2接种。阴性对照组和一次性攻毒组分别在接种后7、14、28和42天处死,连续攻毒组在首次接种后42天处死。试验过程中每天观察、记录小鼠生活状态并在处死前进行体重测量。脱颈椎法分批处死小鼠并采集心、肝、脾、肺、肾、胸腺、淋巴、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、舌、脑等组织进行病理切片观察。用PCR方法对机体中PCV2病毒的分布和含量进行分析,用ELISA试剂盒检测血清中的抗PCV2抗体水平。通过试验发现:三组试验小鼠体重均有增加,其中阴性对照组小鼠体重增长比率大于一次性攻毒组和连续攻毒组,而一次性攻毒组又明显高于连续攻毒组。PCR检测结果显示一次性攻毒组和连续攻毒组体内存在病毒复制并有其特定的转归规律,对照组体内无病毒复制。ELISA方法证实一次性攻毒组和连续攻毒组均产生抗PCV2抗体,但连续攻毒组抗体水平要明显高于一次性攻毒组,整个实验过程中对照组未检测到抗PCV2抗体。将采集的病料进行组织切片观察发现一次性攻毒组和连续攻毒组有明显的微观病理损伤,损伤最严重的器官是淋巴结,对照组未发现明显病理损伤。据此,根据攻毒组小鼠体重增长比率的差异、淋巴结内持续的病毒复制、血清PCV2抗体阳性、明显的微观病理损伤得到小鼠已经感染了PCV2的结论,并初步探讨了小鼠感染PCV2的检测标准。本试验成功建立了PCV2感染SPF昆明小鼠的动物模型,为PCV2的致病机理研究、疫苗研究等奠定了理论基础。

关键词： SPF昆明小鼠 PCV2 微观病理损伤动物模型

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