检索结果-内蒙古大学图书馆

猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对人工感染猪体内猪瘟病毒的检测

畜牧兽医学报 2007年第7期38卷 685-693页

作者：赵建军成丹李娜史子学孙元赵和平朱庆虎涂长春仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001 军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

本研究应用猪瘟病毒通用引物和野毒特异性TaqMan探针,并以质粒作为阳性标准品,结合Corbett公司的RotorGene3000荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测猪瘟病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在10^8-10^... 详细信息

本研究应用猪瘟病毒通用引物和野毒特异性TaqMan探针,并以质粒作为阳性标准品,结合Corbett公司的RotorGene3000荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测猪瘟病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在10^8-10^1范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10拷贝/μL的病毒核酸,与本实验室建立的RT-套式PCR（RT-nPCR）具有相近的敏感性,二者对152份不同样品检测符合率达94.7%。应用本方法对人工感染10^6TCID50猪瘟石门强毒的猪只感染后0-14 d全血中猪瘟病毒RNA进行了定量检测,揭示了猪瘟病毒在猪体内复制的动态变化,证实了感染猪临床表现与病毒滴度存在明显的时间相关性。此外发现,在同居感染猪出现猪瘟临床症状前3-4 d可从其全血中检出病毒RNA。

关键词：猪瘟病毒荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针 RT-nPCR

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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

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中国预防兽医学报 2007年第11期29卷 856-860,895页

作者：陈建飞冯力时洪艳孙东波白兴华佟有恩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150001

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777... 详细信息

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4Ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白基因序列同源性重组蛋白免疫学活性

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新城疫病毒D90株对肺癌A549细胞的抑制作用

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中国预防兽医学报 2007年第2期29卷 155-158页

作者：符芳李继昌宋纯李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 哈尔滨医科大学黑龙江哈尔滨150086

本试验将不同浓度的新城疫D90病毒株感染肺癌A549细胞,光学显微镜下,分别在24h、48h、72h观察细胞形态,并通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法在不同感染时间,对不同浓度D90作用下的肺癌细胞A549进行细胞生长状况的检测。结果表明,在24h的时间内... 详细信息

本试验将不同浓度的新城疫D90病毒株感染肺癌A549细胞,光学显微镜下,分别在24h、48h、72h观察细胞形态,并通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法在不同感染时间,对不同浓度D90作用下的肺癌细胞A549进行细胞生长状况的检测。结果表明,在24h的时间内,不同浓度(1×10-1～1×10-4)的D90毒株作用下的细胞形态学变化具有一个共同的特征:小的气泡出现,且细胞发生圆缩,这是典型的凋亡形态学变化。在48h～72h时间段内,细胞迅速且大量崩解、坏死。在MTT试验中,新城疫病毒D90株对A549肺癌细胞产生了明显的抑制作用,不同浓度的D90毒株对A549肺癌细胞的作用差异较为明显,抑制率随着病毒浓度的增加而增大,即抑制率与病毒的浓度呈正相关。

关键词：凋亡新城疫病毒肿瘤

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A群猪轮状病毒JS株VP6基因序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2007年第7期 27-29页

作者：高秀春时洪艳佟有恩吴波平孙东波白兴华陈建飞冯力东北农业大学生命科学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

参考GenBank中发表PRVOSU毒株VP6序列ORF两端保守区，设计1对特异引物，以PRVJS株反转录cDNA为模板，通过PCR方法获得约1．3kb的基因片段，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明：获得了VP6的1320bp全基因序列；将其ORF与... 详细信息

参考GenBank中发表PRVOSU毒株VP6序列ORF两端保守区，设计1对特异引物，以PRVJS株反转录cDNA为模板，通过PCR方法获得约1．3kb的基因片段，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明：获得了VP6的1320bp全基因序列；将其ORF与国内外9株PRVVP6基因的ORF进行核苷酸和氨基酸同源性比较，核苷酸同源性在77．1％～91．1％之间，氨基酸的同源性在89．7％～99．5％之间；在氨基酸系统发育进化树中，JS毒株与A131、OSU、CN86毒株亲缘关系较近．为一个进化群。

关键词： PRV VP6基因序列分析

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应用SYBR GreenI实时荧光定量PCR检测Ⅱ型猪圆环病毒

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中国兽医杂志 2007年第12期43卷 13-14页

作者：许洪喜符芳鲁晶红李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

Ⅱ型猪圆环病毒(porcine circovirus type2,PCV-2)为近年来引起多种综合征的重要病原,且经常与猪呼吸与繁殖障碍综合症、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流感病毒发生混合感染。建立对于该病毒的快速检测及准确定量的方法,无疑对于病原... 详细信息

Ⅱ型猪圆环病毒(porcine circovirus type2,PCV-2)为近年来引起多种综合征的重要病原,且经常与猪呼吸与繁殖障碍综合症、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流感病毒发生混合感染。建立对于该病毒的快速检测及准确定量的方法,无疑对于病原诊断及病因学研究具有重要的意义。实时荧光定量PCR具有敏感性高、重复性好、速度快、操作简便和污染少等优点。[第一段]

关键词：实时荧光定量PCR Ⅱ型猪圆环病毒荧光定量PCR检测繁殖障碍综合症猪伪狂犬病病毒应用病原诊断猪细小病毒

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规模化养猪场的消毒措施

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猪业科学 2007年第6期24卷 20-25页

作者：杨汉春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

随着养猪业的迅速发展，疾病的流行也越来越复杂，这些疾病主要是由于外界病原微生物的侵入及扩散或场内猪群本身存在的条件病原微生物扩散造成的，消毒是控制疾病发生的一个非常重要的措施，通过消毒工作可以达到杀灭和抑制病原微生物... 详细信息

随着养猪业的迅速发展，疾病的流行也越来越复杂，这些疾病主要是由于外界病原微生物的侵入及扩散或场内猪群本身存在的条件病原微生物扩散造成的，消毒是控制疾病发生的一个非常重要的措施，通过消毒工作可以达到杀灭和抑制病原微生物扩散或传播的效果。但是，如果在消毒过程中药物选择或方法不当，常导致消毒失败。本期将详细介绍一下猪场的消毒措施。

关键词：规模化养猪场消毒措施病原微生物应用种类疾病发生消毒工作药物选择

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消毒的种类及其应用

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猪业科学 2007年第6期24卷 21-25页

作者：崔尚金岳丰雄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

消毒,是指杀灭物体中的病原微生物的方法。消毒只要求达到消除传染性的目的,而对非病原微生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死。消毒是贯彻“预防为主”方针的一项重要措施。消毒的目的就是消灭传染源,切断病原体的传播途径,达到预... 详细信息

消毒,是指杀灭物体中的病原微生物的方法。消毒只要求达到消除传染性的目的,而对非病原微生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死。消毒是贯彻“预防为主”方针的一项重要措施。消毒的目的就是消灭传染源,切断病原体的传播途径,达到预防疾病的继续蔓延。

关键词：洗必泰水溶液广谱结核杆菌细菌繁殖体杀菌作用结核分枝杆菌分枝杆菌属环氧乙烷灭菌器消毒剂碱性戊二醛

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规模化养猪场的消毒措施——消毒的种类及其应用

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猪业科学 2007年第6期24卷 20-25页

作者：崔尚金岳丰雄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室　　哈尔滨　　（150001）

关键词：规模化养猪场消毒措施病原微生物应用种类疾病发生消毒工作药物选择

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畜禽业 2007年第5期18卷 6-8页

作者：崔尚金戚亭岳峰雄周盛华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物国家重点实验室猪传染病学研究室黑龙江哈尔滨150001

人们越来越多地在育肥猪的呼吸道疾病中诊断出与猪圆环病毒II型相关的肺炎。很多实验室诊断的呼吸系统综合征(PRDC)病例通常是多种病毒混合感染。在美国,2000年,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)占病例的42%,PCV2占22%,猪流感病毒(SIV)占1... 详细信息

人们越来越多地在育肥猪的呼吸道疾病中诊断出与猪圆环病毒II型相关的肺炎。很多实验室诊断的呼吸系统综合征(PRDC)病例通常是多种病毒混合感染。在美国,2000年,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)占病例的42%,PCV2占22%,猪流感病毒(SIV)占19%,猪肺炎支原体占22%;我们国家现在的情况与此相似。本文介绍3个临床病例分别是PRRSV和PCV2共感染、PCV2和SIV共感染以及PCV2和猪肺炎支原体共感染。这就是今年国内的主要猪病形势,经常导致严重的临床疾病,唯一的组织学损伤是淋巴组织消退和气道纤维化,在这些损伤中大量的PCV2抗原表明PCV2在PRDC中起到重要的致病作用。去年夏季,江苏、安徽、江西、湖南、湖北、河南、山东等地的部分区域发生了以高热、呼吸困难和全身性出血为主的猪疫情。根据所收集的流行病学资料、实验室检测结果和相关动物实验,初步认为造成本次猪疫情发生的主要病原为多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus)以及猪2型圆环病毒(Porcine circovirus-2)感染,即3P综合征(3P Syndrome,以下称3P综合征)。这就是例证。PCV2感染相关的疾病经常与一种或多种病原体共发生。PCV2感染经常在PRDC暴发中出现,可能导致这些病例中损伤的严重性和持续性的原因。PCV2感染相关的损伤能够在急性呼吸系统疾病中发现,并不局限于消瘦症状。

关键词：猪猪圆环病毒Ⅱ型猪繁殖与呼吸综合征病毒猪流感病毒猪呼吸道疾病综合征

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一种猪疱疹病毒的分离与鉴定

一种猪疱疹病毒的分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：田志军仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

2006年在哈尔滨郊区进行猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)流行病学调查时,在一个疑似PRRSV的猪场分离到一株病毒,该病毒可以适应猪肾细胞(PK15和IBRS2)、猪睾丸细胞(ST),但不适应Vero、Marc-145、BHK21和鸡胚成纤维细胞(CEF)。在猪源细胞上可... 详细信息

2006年在哈尔滨郊区进行猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)流行病学调查时,在一个疑似PRRSV的猪场分离到一株病毒,该病毒可以适应猪肾细胞(PK15和IBRS2)、猪睾丸细胞(ST),但不适应Vero、Marc-145、BHK21和鸡胚成纤维细胞(CEF)。在猪源细胞上可以形成明显的细胞病变(CPE),表现为病变细胞聚集成丛,变形和脱落,病毒滴度为105.5-6.5TCID50/ml。将病变细胞进行超薄切片和冻融后高速离心负染电镜观察,均可看到典型的带有囊膜,直径在200nm左右的疱疹病毒粒子,命名为LH-TP1。该病毒比较脆弱,传至第8代时虽然细胞病变比较明显,但电镜观察时发现几乎很难发现带有囊膜的病毒粒子。用伪狂犬病毒(PRV)阳性血清不能中和该病毒,也不与该病毒细胞培养物发生荧光反应。用猪瘟病毒(CSFV)E2基因、PRRSV GP5和N基因、圆环病毒II型(PCV-2)ORF2基因、口蹄疫病毒(FMDV)VP2基因、PRV gB、gE、gG基因和猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因引物对该病毒培养物进行PCR扩增,结果均为阴性。我们用蛋白酶K和SDS裂解方法提取该病毒感染细胞的总DNA和经过超离纯化后的病毒DNA,电泳时发现条带非常弱,而作为对照的PRV感染细胞后提取DNA的电泳条带非常亮,说明我们分离的病毒具有强烈降解细胞和病毒DNA的作用。动物试验:将LH-TP1第3代细胞毒以2×105.5TCID50/头滴鼻和肌肉接种5头40日龄健康仔猪,观察21天,仔猪表现出一过性的升温,皮肤发红,厌食和精神沉郁,剖杀后未见各脏器有肉眼可见的病理变化。接种仔猪产生了针对LH-TP1的特异性荧光抗体(IFA)和中和抗体(VN)。以上结果表明,我们分离的病毒LH-TP1不是PRV和PCMV,可能是一种新的猪疱疹病毒,该疱疹病毒只能适应猪源细胞并产生明显的CPE,病毒比较脆弱,具有降解DNA的能力,对仔猪呈低致病性。

关键词：猪疱疹病毒细胞病变 PRV 分离与鉴定

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