检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2025年第1期45卷 30-38页

作者：董奕彤王晓萌岳凤娇王淑杰王春生东北林业大学生命科学学院中国农业科学院哈尔滨市兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

利用量子点单病毒示踪技术探究水貂肠炎病毒（mink enteritis virus, MEV）在细胞内的感染过程，为MEV的抗病毒治疗提供了潜在靶点。本研究通过生物素-链霉亲和素系统对MEV进行了量子点标记，经TCID50滴度测定和电镜表征后用于感染猫肾... 详细信息

利用量子点单病毒示踪技术探究水貂肠炎病毒（mink enteritis virus, MEV）在细胞内的感染过程，为MEV的抗病毒治疗提供了潜在靶点。本研究通过生物素-链霉亲和素系统对MEV进行了量子点标记，经TCID50滴度测定和电镜表征后用于感染猫肾细胞（CRFK）。CRFK细胞膜经DiO染色后用量子点标记的MEV进行侵染，利用活细胞工作站系统GE Dleta vision观测病毒进入细胞膜的过程；对CRFK细胞转染pEGFP-Rab5和pEGFP-Rab7载体来标记早期内体和晚期内体，当细胞感染量子点标记的MEV后观测MEV病毒粒子与早期内体和晚期内体的相互作用。为了进一步验证内体与病毒感染的关系，利用氯喹（chloroquine, CQ）和NH4Cl两种内体酸性抑制剂来抑制内体的酸性环境，对加入抑制剂的感染后的细胞提取细胞内总RNA和蛋白，通过qPCR及Western blot检测细胞内MEV的含量；MEV在胞内的转运与细胞骨架相关，为了探究MEV转运与哪种细胞骨架相关，对CRFK细胞分别转染GFP-lifeact和EGFP-MAP4质粒，经GE Dleta vision观测MEV与细胞骨架的关系。选择微管抑制剂Nocodazole和微丝抑制CytoD剂对感染MEV的CRFK细胞提取细胞内RNA及总蛋白，通过qPCR及Western blot检测细胞内MEV的含量。活细胞成像显示MEV首先附着在细胞膜上，并通过内吞作用进入细胞；成像结果显示MEV与Rab5和Rab7在宿主细胞中共定位，用内体酸化抑制剂NH4Cl或CQ预处理宿主细胞后，病毒感染被抑制，表明MEV感染需要内体的酸性环境；活细胞图像显示量子点（QD）-MEV沿着微管运动，使用微管抑制剂Nocodazole抑制了病毒感染，而微丝抑制剂CytoD的加入对感染没有影响。研究结果表明，MEV是通过内吞作用进入CRFK细胞膜，随后进入早期内体及晚期内体，在细胞内的转运过程依赖于微管。

关键词：水貂肠炎病毒量子点单病毒示踪侵染机制

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SARS冠状病毒S蛋白受体结合结构域的表达及其表位作图

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生物化学与生物物理进展 2005年第11期32卷 1030-1037页

作者：华荣虹童光志王云峰周艳君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新出现的人类传染病,该病的病原是SARS冠状病毒(SARS-CoV).S蛋白是SARS冠状病毒的一种主要结构蛋白,它在病毒与宿主细胞受体结合以及诱导机体产生中和抗体中起重要作用.研究表明S蛋白与受体结合的核心区... 详细信息

严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新出现的人类传染病,该病的病原是SARS冠状病毒(SARS-CoV).S蛋白是SARS冠状病毒的一种主要结构蛋白,它在病毒与宿主细胞受体结合以及诱导机体产生中和抗体中起重要作用.研究表明S蛋白与受体结合的核心区域为第318￣510氨基酸残基的片段.首先克隆并用pGEX-6p-1载体融合表达了该受体结合结构域,并且通过蛋白质印迹分析表明,该受体结合结构域融合蛋白能被SARS康复患者血清和S蛋白特异的单克隆抗体所识别.为了对这一区域进行抗原表位作图,进一步设计了一套23个覆盖受体结合结构域的长16个氨基酸残基的部分重叠短肽,并进行了GST融合表达.用免疫动物血清和单克隆抗体D3D1对23个融合蛋白进行蛋白质印迹和ELISA免疫反应性分析,结果鉴定出两个抗原表位SRBD3(F334PSVYAWERKKISNCV349)和表位D3D1(K447LRPFERDI455).其结果对进一步分析S蛋白结构与功能以及诊断试剂和基因工程疫苗的研究有一定意义.

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS—CoV) 纤突蛋白(S蛋白) 表位

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表达猪瘟病毒E2蛋白的BacMam病毒的构建及其免疫原性分析

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生物化学与生物物理进展 2009年第7期36卷 916-922页

作者：李淼王宇飞王煜高辉李娜孙元梁冰冰仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

含具有哺乳动物细胞活性的启动子的重组杆状病毒(BacMam病毒)可有效转导多种哺乳动物细胞,并被广泛用于开发新型非复制型载体疫苗.将水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)基因插入多角体启动子下游,得到经修饰的杆状病毒转移载体,将对虾白斑综合... 详细信息

含具有哺乳动物细胞活性的启动子的重组杆状病毒(BacMam病毒)可有效转导多种哺乳动物细胞,并被广泛用于开发新型非复制型载体疫苗.将水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)基因插入多角体启动子下游,得到经修饰的杆状病毒转移载体,将对虾白斑综合症病毒(WSSV)ie1启动子控制下的猪瘟病毒E2基因表达盒插入此载体中,构建了BacMam病毒BacMam/G-ie1-E2,以其感染Sf9细胞和转导HeLa细胞,通过间接免疫荧光试验和Western blot分析检测E蛋白的表达,同时用BacMam病毒直接免疫小鼠,用检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法检测免疫小鼠血清抗体,用基于CFSE和WST-8的淋巴细胞增殖试验评价其细胞免疫应答.结果显示,BacMam/G-ie1-E2能同时在昆虫细胞和哺乳动物细胞中高效表达E2蛋白,免疫小鼠能诱导产生针对猪瘟病毒的特异性抗体,免疫小鼠脾细胞经猪瘟病毒刺激后能诱导特异性的淋巴细胞增殖.这表明,由BacMam病毒介导的基因转移有望用于开发针对猪瘟病毒的非复制型载体疫苗.

关键词：猪瘟病毒 E2蛋白重组杆状病毒免疫原性

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马流产沙门氏菌的分离鉴定及其微量凝集抗体检测方法的建立与应用

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中国农业科学 2020年第10期53卷 2112-2121页

作者：郭奎王宁王金慧初晓雨赵语婷郭巍刘荻萩胡哲王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

【目的】对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测。【方法】利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进... 详细信息

【目的】对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测。【方法】利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进行细菌分离,对紫色菌落进行革兰氏染色鉴定;提取细菌全基因组,利用16S rRNA进行PCR扩增和测序鉴定,并对菌株进行生化鉴定和血清型鉴定,对病因进行综合诊断。利用分离获得的阳性菌株进行灭活后作为凝集抗原,以马流产沙门氏菌标准阳性血清作为阳性对照,通过反应条件优化,建立微量凝集试验方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了验证。与国家行业标准中的试管凝集试验方法进行对比,同时利用微量凝集对华北和西北各3个地方的共151份血清样品进行检测,并随机选取30份样品,利用微量凝集和试管凝集进行检测,并对两种方法检测的敏感性进行比较分析。【结果】各流产马驹组织在沙门氏菌显色培养基上划线结果,均可以获得大量紫色目标菌落;革兰氏染色结果表明,分离的菌株为革兰氏阴性短杆菌,16S rRNA测序证实分离株为沙门氏菌属,生化鉴定结果表明,分离的17株菌均符合马流产沙门氏菌的生化特性,但相比上世纪强毒株马流产沙门氏菌C77-1,均不能发酵鼠李糖;血清型鉴定证实分离株均为马流产沙门氏菌,将分离的17株马流产沙门氏菌分别命名为E.S-1—17。因此证实马匹流产均为马流产沙门氏菌感染所致。利用甲醛对E.S-1菌株进行了灭活处理,成功制备了马流产沙门氏菌凝集抗原,并建立了一种快速敏感的微量凝集检测方法,其中优化了最佳反应凝集抗原浓度为4亿/mL。其敏感性比试管凝集高1个滴度,其特异性与其他常见马传染病病原阳性血清无交叉反应,并且具有良好的重复性。利用微量凝集方法,对华北3个疫情区进行检测,阳性率分别为28.6%、42.9%和27.3%,西北3个无疫情区阳性率均为0%。此外,利用两种方法对相同的30份临床血清进行检测,微量凝集和试管凝集方法阳性份数分别为10份和3份,阳性率分别为33.3%和10%。与试管凝集相比,微量凝集诊断敏感性为100%,诊断特异性为74.1%,总体符合率为76.7%。【结论】分离鉴定获得了17株马流产沙门氏菌,建立了马流产沙门氏菌微量凝集抗体检测方法,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,简便、快速、高通量,可以广泛应用于马属动物中马流产沙门氏菌抗体的检测,是该病诊断及疫苗评估的重要依据之一。

关键词：马流产沙门氏菌分离鉴定微量凝集应用马

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NMRAL1对流感病毒复制的调控机制

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中国农业科学 2022年第10期55卷 2067-2076页

作者：严娅王广文孔凡迪王旭远王一涵李俊平赵玉辉李呈军陈化兰姜丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

【目的】流感病毒是一种人兽共患病原，常引起大流行，给人类健康造成巨大威胁，且流感病毒易发生变异，能不断逃逸宿主细胞的免疫反应，对现有抗流感药物产生耐药性，因此寻找抵抗流感的新方法迫在眉睫。研究通过探索NMRAL1(NmrA-like ... 详细信息

【目的】流感病毒是一种人兽共患病原，常引起大流行，给人类健康造成巨大威胁，且流感病毒易发生变异，能不断逃逸宿主细胞的免疫反应，对现有抗流感药物产生耐药性，因此寻找抵抗流感的新方法迫在眉睫。研究通过探索NMRAL1(NmrA-like family domain-containing protein 1)对流感病毒复制的影响，并揭示其发挥作用的分子机制，为抗流感药物研发提供潜在靶点。【方法】采用siRNA干扰技术在A549细胞中下调表达NMRAL1，并通过Western Blot检测siRNA干扰后NMRAL1的表达水平；在下调表达NMRAL1的细胞中，分别感染A/Anhui/2/2005 (AH05)(H5N1)和A/WSN/33 (H1N1)两株不同亚型流感病毒，利用蚀斑试验检测感染病毒后24和48 h细胞上清中的病毒滴度。为确定NMRAL1影响流感病毒复制的具体阶段，在HEK293T细胞中瞬时转染NMRAL1-Myc-pCAGGS质粒过表达NMRAL1，通过双荧光素酶报告系统检测过表达NMRAL1对流感病毒聚合酶活性的影响；使用免疫荧光技术对流感病毒NP蛋白进行染色，通过激光共聚焦试验观察下调表达NMRAL1对感染病毒后3、4、5、6和8 h NP蛋白在被感染细胞中的定位情况的影响，判断下调表达NMRAL1是否影响流感病毒的入核和出核过程；利用Western Blot检测下调表达NMRAL1对流感病毒各病毒蛋白表达的影响和对流感病毒激活I型干扰素通路下游IFN刺激基因（ISGs）表达的影响，利用间接免疫荧光试验进一步研究NMRAL1对流感病毒复制的影响。【结果】Western Blot检测发现NMRAL1 siRNA能显著下调NMRAL1表达，在下调表达NMRAL1的A549细胞中分别感染H5N1和H1N1病毒，并通过蚀斑试验检测感染病毒后细胞上清中的病毒滴度，结果显示在下调表达NMRAL1的细胞中，感染流感病毒后24和48 h收取的细胞上清中病毒滴度显著下降，表明NMRAL1能促进不同亚型流感病毒的复制；为进一步探索NMRAL1调控流感病毒复制的具体机制，利用双荧光素酶报告系统检测流感病毒聚合酶活性，发现过表达NMRAL1对流感病毒聚合酶活性无明显影响；激光共聚焦试验结果显示下调NMRAL1表达不影响NP蛋白的入核和出核过程，同时Western Blot检测表明下调NMRAL1表达不影响各病毒蛋白的表达；但荧光定量PCR试验结果显示下调NMRAL1表达能够促进流感病毒感染诱导的IFN-β mRNA水平上升，且Western Blot检测发现下调表达NMRAL1促进I型干扰素通路下游的MxA和IFITM3抗病毒蛋白的表达，与此同时，间接免疫荧光试验结果显示下调NMRAL1表达可显著抑制流感病毒复制。【结论】在流感病毒感染过程中，NMRAL1不影响流感病毒的入侵以及转录翻译过程，而是通过抑制I型干扰素通路激活从而抑制MxA、IFITM3等抗病毒因子的表达，最终促进流感病毒复制。研究证实宿主因子NMRAL1正调控流感病毒的复制，丰富了参与流感病毒复制的宿主因子网络。

关键词： NMRAL1 流感病毒病毒复制 IFN-β 抗病毒基因

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置换HN基因对新城疫病毒LaSota株致病力的影响

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微生物学报 2008年第5期48卷 638-643页

作者：王永葛金英丁玉林解希帝步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

【目的】新城疫病毒的血凝素-神经氨酸酶(HN)和融合蛋白(F)在病毒装配、出芽、释放及侵入宿主细胞的过程中发挥关键作用,但HN对病毒致病力的影响程度尚不完全清楚。【方法】为探讨这一问题,本研究以中等毒力毒株Mukteswar的HN基因替换... 详细信息

【目的】新城疫病毒的血凝素-神经氨酸酶(HN)和融合蛋白(F)在病毒装配、出芽、释放及侵入宿主细胞的过程中发挥关键作用,但HN对病毒致病力的影响程度尚不完全清楚。【方法】为探讨这一问题,本研究以中等毒力毒株Mukteswar的HN基因替换我国广泛应用的LaSota疫苗株HN基因,通过反向遗传操作技术拯救出嵌合病毒(rL-MuHN)。【结果】rL-MuHN红细胞吸附能力较亲本株rLaSota无显著升高,具有相似的细胞融合活性;嵌合病毒ICPI由rLaSota株的0.36降为0,MDT≥90,IVPI=0与rLaSota株相同,保持典型低致病力缓发型特点不变。进一步以Mukteswar株F基因替换rL-MuHN的F基因,拯救出F和HN双基因替换嵌合病毒rL-MuFHN,尽管该病毒的细胞融合能力显著提高,但其MDT、ICPI和IVPI分别为98h,0.59和0,显示F和HN双基因替换仍未能使嵌合新城疫病毒rL-MuFHN的致病力达到中等毒力毒株Mukteswar(MDT、ICPI及IVPI分别为46h、1.32和0.64)的水平。【结论】试验结果表明,F及HN囊膜蛋白基因之外的病毒基因组骨架背景对病毒的致病性同样具有重要的决定性意义,不同HN蛋白对嵌合病毒的致病能力的影响不同,与供体毒株毒力无关;以流行野毒株HN替代rLaSota疫苗株构建抗原针对性更强的弱毒疫苗株存在技术可行性。

关键词：重组新城疫病毒 F蛋白 HN蛋白致病力

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针对非洲猪瘟病毒MGF360-13L基因的TaqMan荧光定量PCR的建立

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中国农业科学 2021年第5期54卷 1073-1080页

作者：王涛韩玉潘力王冰孙茂文王翌罗玉子仇华吉孙元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

【目的】建立一种以MGF360-13L基因为靶标的实时荧光定量PCR检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的方法,为非洲猪瘟(African swine fever, ASF)的诊断、MGF360-13L基因缺失毒株鉴别、病毒分离鉴定、基因功能研究提供技... 详细信息

【目的】建立一种以MGF360-13L基因为靶标的实时荧光定量PCR检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的方法,为非洲猪瘟(African swine fever, ASF)的诊断、MGF360-13L基因缺失毒株鉴别、病毒分离鉴定、基因功能研究提供技术支持。【方法】首先,以ASFV中国流行毒株(GenBank:MK333180.1)的MGF360-13L基因序列为靶标设计并筛选了1对特异性引物和探针,建立其荧光定量PCR检测方法。设计引物13L-F/13L-R,扩增MGF360-13L,并将其克隆至pOK12载体,挑取阳性克隆并测序验证,构建重组质粒标准品。将重组质粒标准品连续10倍梯度稀释,以稀释后的各梯度质粒标准品为模板,配制反应体系和设置反应条件后进行荧光定量PCR检测,建立标准曲线,并对其敏感性和重复性进行评价;其次,以连续10倍梯度稀释的重组质粒标准品为模板,利用引物13L-F/13L-R进行常规PCR检测,以比较荧光定量PCR的敏感性。最后,运用本检测方法和本研究组已建立的针对ASFV p72的荧光定量PCR检测方法同时对黑龙江某猪场发生ASF时采集的30份临床样品进行检测,以比较两种检测方法的符合率。另外,应用该方法对感染原代巨噬细胞的ASFV野毒株和MGF基因缺失毒株进行鉴别检测。【结果】利用引物13L-F/13L-R可扩增出一条800 bp左右的特异性目的条带,而阴性对照无条带,成功构建出标准品。本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法在质粒标准品为1.56×10～1-1.56×10～8拷贝/μL时,呈现出良好的线性关系,线性回归方程为:y=-3.295 lg(x)+45.995,线性相关系数R2为0.997,对ASFV核酸最低检测限为15.6拷贝/μL。在特异性检验中,除ASFV核酸外,猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型等病毒核酸均未出现扩增曲线,表明该方法的特异性良好。与最低检测限为1.56×10～4拷贝/μL病毒核酸的常规PCR检测方法相比,本研究建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法高出其约3个数量级,具有较高的敏感性。在临床样品检测中,两种检测方法经过McNemar检验,P=0.5>0.05,表明两种检测方法的结果无统计学差异;经过Kappa检验,Kappa=0.867>0.75,P<0.001,提示两种检测方法符合率较好,能够有效区分ASFV野毒株和MGF360-13L基因缺失毒株。【结论】建立的TaqMan荧光定量PCR特异、敏感、重复性好,不仅丰富了ASFV现有检测靶标,也为后续MGF360-13L功能、MGF缺失毒株的鉴定及相应基因缺失疫苗株的鉴别诊断提供技术支持。

关键词：非洲猪瘟病毒 MGF360-13L 荧光定量PCR 鉴别诊断

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PB2蛋白E627V突变可增强H7N9病毒对小鼠的致病力

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中国农业科学 2018年第17期51卷 3379-3388页

作者：尹馨马树杰李梅邓国华侯玉杰崔鹏飞施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

【背景】低致病性H7N9病毒自2013年在我国首次出现以来,研究发现其对家禽均呈现低致病力,对哺乳动物模型小鼠也不表现任何的致病力。但是,2015年在湖南分离的1株低致病性H7N9病毒(简称HuN/S40726),却对哺乳动物小鼠表现为高致病力。分... 详细信息

【背景】低致病性H7N9病毒自2013年在我国首次出现以来,研究发现其对家禽均呈现低致病力,对哺乳动物模型小鼠也不表现任何的致病力。但是,2015年在湖南分离的1株低致病性H7N9病毒(简称HuN/S40726),却对哺乳动物小鼠表现为高致病力。分析、推测导致该病毒对哺乳动物致病力改变的原因可能在于该病毒PB2蛋白E627V的改变。【目的】为了揭示该病毒致病力的变化原因以及对哺乳动物致病性增强的机制,提供人类H7N9病毒感染、危害增强风险预警,展开该研究。【方法】选取2013年低致病性H7N9病毒代表株(简称SH/S1053)和上述湖南HuN/S40726病毒,开展了哺乳动物致病力对比试验以及可能导致病毒发生致病力变化的相关基因位点对比分析。然后以HuN/S40726病毒为模式毒株,利用反向遗传学技术,成功建立了病毒的反向遗传操作系统;利用基因点突变技术定点突变了HuN/S40726病毒PB2蛋白的627位氨基酸,救获了重组病毒r HuN/S40726、r HuN/S40726-PB2/627E和r HuN/S40726-PB2/627K。通过小鼠感染模型评估了以上3株重组突变病毒对哺乳动物的致病力,分析了PB2蛋白627位氨基酸的突变对小鼠致病力的差异。然后通过构建HuN/S40726病毒及其突变病毒的聚合酶复合表达质粒系统,以SH/S1053病毒为背景毒株构建聚合酶复合表达质粒系统作为对照,使用双荧光素酶法检测了PB2蛋白627位氨基酸的不同突变体在293T细胞中的聚合酶活性,进一步分析PB2蛋白627位氨基酸影响病毒毒力的内在机制。【结果】通过哺乳动物致病力对比试验以及可能导致病毒发生致病力变化的相关基因位点对比分析,推测导致HuN/S40726病毒对哺乳动物致病力改变的原因可能在于该病毒PB2蛋白E627V的改变。重组救获病毒和突变株对小鼠致病性试验结果显示,PB2蛋白E627V的改变显著的增强了HuN/S40726病毒对小鼠的致病力,使得病毒MLD50由≥6.5 log10EID50变化为3.5 log10EID50,病毒毒力增强了至少1 000倍以上。聚合酶活性试验结果表明,无论是在33℃还是37℃下,PB2蛋白E627V的改变,显著提高了HuN/S40726病毒在哺乳动物细胞中的聚合酶活性,与病毒对小鼠的致病性增强呈正相关性。【结论】PB2蛋白627位氨基酸(V)决定了HuN/S40726病毒对小鼠的高致病力。PB2蛋白E627V的改变能够显著增强HuN/S40726病毒在哺乳动物细胞中的聚合酶活性,是引起HuN/S40726病毒对哺乳动物致病力的重要因素。

关键词： H7N9 PB2 E627V 致病力聚合酶活性

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野猪粪便中乳酸菌的分离鉴定及特性研究

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中国农业科学 2020年第14期53卷 2964-2973页

作者：王翌李淼李永锋孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

【目的】筛选安全的、具有优良特性的乳酸菌菌株,进一步研发益生制剂,为饲料添加剂等动物相关产品提供资源。【方法】从我国黑龙江省大兴安岭地区采集野猪粪便样品13份,编号后置于4℃保温箱迅速运回实验室,利用MRS培养基分离纯化乳酸菌... 详细信息

【目的】筛选安全的、具有优良特性的乳酸菌菌株,进一步研发益生制剂,为饲料添加剂等动物相关产品提供资源。【方法】从我国黑龙江省大兴安岭地区采集野猪粪便样品13份,编号后置于4℃保温箱迅速运回实验室,利用MRS培养基分离纯化乳酸菌。使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取分离菌株的基因组DNA,利用细菌16S rDNA通用引物进行PCR鉴定,将扩增得到的序列测序后在NCBI上使用BLAST与GenBank数据库中序列进行对比分析,确定各菌株的分类学地位。将鉴定后的乳酸菌菌株分别接种于酸性(pH 3.0)和含胆盐(0.3%)的MRS培养基,在不同条件下评价乳酸菌菌株的耐酸、耐胆盐特性。将过夜培养的乳酸菌于室温条件下静置,在不同时间测定其OD600nm,进行自凝集能力评价;过夜培养的菌株分别与致病性埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌3种致病菌混合后于室温静置,进行共凝集能力检测。在体外,分别进行乳酸菌菌株对Caco-2细胞和IPEC-J2细胞的黏附能力测定,评价不同菌株的黏附能力。通过测定乳酸菌菌株对致病性埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌3种致病菌的抑菌环直径,评价分离菌株的抑菌活性。通过体内外试验评价乳酸菌菌株的安全性。在体外,分别以模式菌株嗜酸乳杆菌和金黄色葡萄球菌作为阴性对照和阳性对照,将3株乳酸菌菌株和对照菌株在血平板上划线,37℃厌氧孵育18—24 h,观察细菌菌落周围是否形成溶菌环,评价分离菌株的溶血特性。使用文献中已报道的毒力因子引物对分离的乳酸菌菌株进行PCR扩增,检测是否存在毒力因子的编码基因,评估分离菌株的安全性。在体内,将过夜培养的乳酸菌连续饲喂7周龄的BALB/c小鼠21 d,分别测定小鼠的初始体重和最终体重,观察计算体重变化情况;饲喂21 d后,解剖获取小鼠的脾脏、肝脏和肾脏计算器官指数,评价分离乳酸菌菌株的体内安全性。【结果】从野猪粪便中分离得到3株对酸和胆盐具备一定耐受力的乳酸菌,经鉴定分别为蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii)、耐久肠球菌(Enterococcus durans)和黏膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae)。3株乳酸菌菌株均表现出较强的自凝集能力和对致病菌的共凝集能力,同时对Caco-2细胞和IPEC-J2细胞均表现出较强的黏附能力,抑菌试验结果显示黏膜乳杆菌对3种致病菌均具备较强的抑菌活性。经体内外安全性评价,3株乳酸菌菌株无溶血性,且均未检测到毒力基因,经其连续饲喂的小鼠行为表现正常、状态良好,其中,与对照组相比,黏膜乳杆菌饲喂后小鼠增重显著。【结论】从大兴安岭野猪粪便中分离的3株乳酸菌(特别是黏膜乳杆菌)具有良好的特性和安全性,具备进一步开发益生菌制剂的潜力。

关键词：野猪乳酸菌凝集能力黏附能力安全性

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α疱疹病毒的神经传导——轴突上的“穿梭”

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生物工程学报 2019年第8期35卷 1361-1373页

作者：祁寒松吴红霞仇华吉孙元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

α疱疹病毒经过长期的进化与宿主形成了良好的相互适应关系。其中部分α疱疹病毒具有典型的嗜神经特性,受到广泛的关注和深入的研究。嗜神经性α疱疹病毒能突破宿主屏障而感染神经元,并在其胞体内大量繁殖进而完成进一步的扩散或在胞体... 详细信息

α疱疹病毒经过长期的进化与宿主形成了良好的相互适应关系。其中部分α疱疹病毒具有典型的嗜神经特性,受到广泛的关注和深入的研究。嗜神经性α疱疹病毒能突破宿主屏障而感染神经元,并在其胞体内大量繁殖进而完成进一步的扩散或在胞体中建立潜伏感染。病毒无论是感染神经元还是在进一步扩散的过程中都会经历沿轴突或树突的传导过程,所以此过程是病毒生命周期中不可或缺的一部分,同时也是影响病毒入侵神经系统的关键因素。对嗜神经性α疱疹病毒在神经元内传导过程的研究不仅能深入地了解病毒,而且还能针对性地研发相应的疫苗或靶向性治疗药物,同时还可利用其神经嗜性将病毒作为解析神经环路的有力工具。文中主要对α疱疹病毒在轴突中的传导机制进行了综述,并提出病毒在轴突中传导的研究发展方向和应用价值,可为防控α疱疹病毒感染提供参考。

关键词： α疱疹病毒神经元轴突传导

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