检索结果-内蒙古大学图书馆

草地学报 2025年

作者：陈彩锦马琳包明芳蒋庆雪张国辉张尚沛高婷王学敏刘文辉中国农业科学院北京畜牧兽医研究所青海大学畜牧兽医科学院宁夏农林科学院固原分院宁夏农林科学院动物科学研究所

WRKY蛋白是植物中发现的最大转录因子（Transcription factors，TFs）家族之一。该家族成员在植物的生长发育、生物量形成、次生代谢物合成、响应生物或非生物胁迫中发挥着重要的双向调控作用。本文主要从WRKY TFs的结构特征、分类，以... 详细信息

WRKY蛋白是植物中发现的最大转录因子（Transcription factors，TFs）家族之一。该家族成员在植物的生长发育、生物量形成、次生代谢物合成、响应生物或非生物胁迫中发挥着重要的双向调控作用。本文主要从WRKY TFs的结构特征、分类，以及近5年挖掘出的在植物生长发育、次生代谢物合成、生物和非生物胁迫下的生物学功能进行全面综述，并对WRKY家族成员后续的相关研究进行了展望，旨在为植物WRKY基因家族成员的进一步挖掘及其生物学功能的研究提供参考依据。

关键词： WRKY 生长发育次生代谢生物胁迫非生物胁迫

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应用于基因编辑的核糖核蛋白复合体的构建与活性验证

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生物技术通报 2022年第8期38卷 60-68页

作者：高伟欣黄火清赵晶张鑫杨宁杨浩萌中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

CRISPR/Cas9基因编辑技术具有操作简单、成本低廉和编辑效率高等优点,已经被广泛应用于动物、植物、微生物的基因编辑研究。在该技术体系中,发挥核酸剪切功能的是Cas9蛋白和guideRNA(gRNA)组装而成的核糖核蛋白复合体,即RNP(ribonucleop... 详细信息

CRISPR/Cas9基因编辑技术具有操作简单、成本低廉和编辑效率高等优点,已经被广泛应用于动物、植物、微生物的基因编辑研究。在该技术体系中,发挥核酸剪切功能的是Cas9蛋白和guideRNA(gRNA)组装而成的核糖核蛋白复合体,即RNP(ribonucleoprotein)复合体。目前,应用体外组装的RNP复合体直接递送进入受体细胞进行基因编辑的研究越来越多,成为提高编辑效率、降低脱靶率的有效手段。本研究以获得具有高效剪切活性的RNP复合体为试验目的,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了Cas9蛋白,并通过His-tag亲和树脂对重组Cas9蛋白进行了纯化;同时,通过T7转录试剂盒对gRNA进行体外转录和纯化,使纯化的Cas9蛋白和gRNA自发组装成RNP复合体,经体外活性检测,RNP复合体具有很好的DNA双链剪切活性;将其与donor DNA共同转化到黑曲霉菌株,成功敲除了目标蛋白,编辑效率达到90%以上。本研究获得的RNP复合体,可以应用于丝状真菌的基因编辑,节约了试验时间与成本,并推动RNP介导的基因编辑技术在更多领域的应用。

关键词： Cas9蛋白 RNP复合体大肠杆菌活性验证

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基于宏基因组测序对中国北方地区生乳中嗜冷菌的群落结构研究

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3659-3668页

作者：许文君郑楠王加启孟璐青岛农业大学食品科学与工程学院青岛266109 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部奶及奶制品质量安全控制重点实验室北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部奶产品质量安全风险评估实验室(北京) 北京100193

本研究旨在利用宏基因组测序探究中国北方地区生乳中嗜冷菌群落结构的多样性。在冬季从中国内蒙古地区和北京地区的14个牧场共采集14份生乳样品,分离纯化可培养嗜冷菌和提取生乳中微生物总DNA,并利用16S rDNA测序和宏基因组测序结合的... 详细信息

本研究旨在利用宏基因组测序探究中国北方地区生乳中嗜冷菌群落结构的多样性。在冬季从中国内蒙古地区和北京地区的14个牧场共采集14份生乳样品,分离纯化可培养嗜冷菌和提取生乳中微生物总DNA,并利用16S rDNA测序和宏基因组测序结合的方法对生乳中嗜冷菌进行分析。结果发现,北京地区和内蒙古地区生乳中嗜冷菌的群落结构无显著性差异。两个地区生乳中优势嗜冷菌属均是假单胞杆菌属、寡养单胞菌属和短波单胞杆菌属。全局和概述图谱、氨基酸代谢和碳水化合物代谢是最主要的功能代谢途径,且嗜冷菌中含有多种抗生素抗性基因。综上,本研究利用传统培养和宏基因组测序准确测定了生乳中嗜冷菌群落的物种和功能信息,有助于了解生乳中嗜冷菌的生命活动及为嗜冷菌风险评估提供基础信息,促进中国北京及内蒙古牧场开展防控。

关键词：生乳嗜冷菌宏基因组测序地区结构

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生乳酸度分析及影响因素研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 2836-2845页

作者：杨亚新刘慧敏孟璐叶巧燕佀博学王加启郑楠中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部奶及奶制品质量安全控制重点实验室北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部奶产品质量安全风险评估实验室(北京) 北京100193 山西农业大学动物科学学院太谷030801

酸度是近年来生乳新鲜度检测的一个重要指标,酸度的高低直接影响生乳新鲜度,进而反映生乳品质的好坏。生乳酸度主要是由自然酸度和发酵酸度两部分组成。自然酸度是生乳中固有的物质成分所构成的酸度,如酪蛋白、乳清蛋白、磷酸盐、柠檬... 详细信息

酸度是近年来生乳新鲜度检测的一个重要指标,酸度的高低直接影响生乳新鲜度,进而反映生乳品质的好坏。生乳酸度主要是由自然酸度和发酵酸度两部分组成。自然酸度是生乳中固有的物质成分所构成的酸度,如酪蛋白、乳清蛋白、磷酸盐、柠檬酸盐和碳酸盐等酸性物质;发酵酸度是生乳中的微生物利用和分解乳中的营养物质,产生有机酸而使酸度升高的那部分酸度。物种、品种、泌乳阶段、泌乳胎次、挤奶次数、母体健康状况、季节、日粮水平以及生乳储藏时间和温度均会对生乳酸度产生影响,进而影响生乳品质。本文从酸度的概念及表达方式、酸度物质组成分析以及影响生乳酸度的因素进行综述,以期为研究生乳酸度产生机制及物质组成提供理论依据。

关键词：生乳酸度来源和组成影响因素

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基于天蚕素D的新型抗病毒多肽对猪繁殖呼吸综合征病毒的抑制作用

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生物工程学报 2025年

作者：臧浩月彭婕郭慧琛孙世琪曾巧英周静静甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

由猪繁殖呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus， PRRSV）引发的猪繁殖呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome， PRRS）是目前危害养猪业的主要疾病之一。本研究旨在设计优化天然抗菌肽，筛选具有显著抑制PRRSV活性的抗病毒多肽，为PRRS防控制剂的研发提供新思路。将天蚕素D（cecropin D， CD）为母肽，通过氨基酸替换策略设计了CD-2、CD-3、CD-4这3个衍生物，利用固相合成技术合成CD及其衍生物，并使用质谱（mass spectrometry， MS）和反相高效液相色谱（reversed-phase high performance liquid chromatography， RP-HPLC）进行多肽的序列鉴定、纯化和纯度分析。通过圆二色谱研究多肽二级结构，使用CellTiter 96?AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒(CellTiter 96?AQueous one solution cell proliferation assay， MTS)测定多肽细胞毒性。通过蛋白免疫印迹（Western blotting， WB）、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction， RT-qPCR）以及间接免疫荧光（indirect immunofluorescence assay， IFA）研究多肽对PRRSV的抗病毒活性及作用阶段。MS以及RP-HPLC结果表明，CD及其衍生物被成功合成，且纯度高达95%。圆二色谱分析结果显示，CD衍生物在细胞膜模拟环境中表现出更稳定且丰富的α螺旋结构。MTS结果表明，所有被测多肽在100 μg/mL的工作浓度下的细胞毒性可忽略。多肽抗PRRSV的作用阶段试验结果显示，衍生多肽在病毒侵入阶段的抗病毒活性较母肽显著增强，说明通过引入赖氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，增强了衍生肽的疏水作用和正电荷，进而增强了衍生多肽在侵入阶段的抗PRRSV活性。以上结果为抗病毒多肽的应用及结构优化提供了理论基础，可为PRRSV的防控提供新的思路。

关键词：抗菌肽抗病毒活性阳离子氨基酸疏水性氨基酸猪繁殖呼吸综合征病毒

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紫花苜蓿镰刀菌根腐病抗病种质资源筛选

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中国草地学报 2022年第4期44卷 104-112页

作者：支旭欣张帆杨青川王珍康俊梅龙瑞才中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

紫花苜蓿根腐病是我国苜蓿产区普遍发生的病害之一,其主要致病病原为尖孢镰刀菌。采用水培接菌法接种尖孢镰刀菌,测定58份供试苜蓿材料的病情指数、株高、根长、地下生物量并进行相关分析和聚类分析,评价紫花苜蓿种质材料苗期根腐病抗... 详细信息

紫花苜蓿根腐病是我国苜蓿产区普遍发生的病害之一,其主要致病病原为尖孢镰刀菌。采用水培接菌法接种尖孢镰刀菌,测定58份供试苜蓿材料的病情指数、株高、根长、地下生物量并进行相关分析和聚类分析,评价紫花苜蓿种质材料苗期根腐病抗性。结果表明,株高、根长、地下生物量与病情指数均呈负相关。病情指数变化范围为12.50~70.83,根据病情指数共划分出4个不同抗性等级,分别是抗病材料、耐病材料、感病材料和高感材料。其中,抗病材料共1份,耐病材料共22份,感病材料共25份,高感材料共10份。根据聚类分析结果显示,58份紫花苜蓿材料大致分为可分为三类,分别为15份耐病材料、24份感病材料和19份高感材料。虽然部分材料与病情指数划分结果不是完全一致,但抗病材料和感病材料在聚类分析结果中能够被明显区分。其中,不同分析方法都表明,PAMPA为抗病材料,阳高、甘农3号、新牧2号、龙牧1号、CF030056、狼山、北疆、敖汉、偏关、G 13608都为高感材料,没有对根腐病完全免疫的种质材料。

关键词：紫花苜蓿尖孢镰刀菌根腐病抗病性鉴定

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新城疫病毒Mukteswar株感染鸡巨噬细胞入胞及胞内转运途径研究

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中国动物传染病学报 2024年第5期32卷 1-10页

作者：黄新月谭磊宋翠萍仇旭升孙英杰刘炜玮廖瑛丁铲吴艳涛扬州大学兽医学院扬州225000 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

新城疫病毒(NDV)可以通过多种内吞途径入侵不同宿主细胞并在内体中逃逸从而避免被宿主天然免疫系统“追踪”。为探究NDV中等毒力疫苗株Mukteswar感染鸡巨噬细胞(HD11)的入胞和胞内转运途径,本研究利用Dynasore、CPZ、MβCD、Baf A1预处... 详细信息

新城疫病毒(NDV)可以通过多种内吞途径入侵不同宿主细胞并在内体中逃逸从而避免被宿主天然免疫系统“追踪”。为探究NDV中等毒力疫苗株Mukteswar感染鸡巨噬细胞(HD11)的入胞和胞内转运途径,本研究利用Dynasore、CPZ、MβCD、Baf A1预处理细胞,然后感染NDV Mukteswar株,通过Westem blot和IFA检测NDV NP蛋白的表达变化。结果显示Dynasore、MβCD和Baf A1处理后NP的表达水平降低,表明NDV入侵HD11细胞是利用小窝蛋白介导的内吞途径,且依赖动力蛋白、胆固醇和pH。通过过表达和干扰试验检测调节不同内体囊泡类型运输的Rab蛋白(Rab5、Rab7、Rab11)对NDV感染HD11细胞的影响,结果发现Rab7的表达对NDV感染无影响,而过表达Rab5和Rab11促进NDV感染,表明是由Rab5、Rab11而不是Rab7调节NDV的转运。本研究丰富了NDV入侵宿主免疫细胞的途径及胞内转运的研究,并为全面阐明NDV感染机制提供了理论基础。

关键词：新城疫病毒 HD11细胞小窝蛋白介导的内吞 Rab蛋白

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南非2型口蹄疫病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

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病毒学报 2025年第3期 856-867页

作者：石鑫泰朱昱茜石正旺罗俊聪席韬张帆何印娣李帅鹏郑海学田宏中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃农业大学动物医学院

本研究旨在开发一种用于检测南非2型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth sisease virus south African territory 2,FMDV-SAT2）抗体的简便、迅速、高特异性和灵敏性的胶体金免疫层析方法。该方法利用胶体金颗粒标记的VP1蛋白作为标记抗原，并... 详细信息

本研究旨在开发一种用于检测南非2型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth sisease virus south African territory 2,FMDV-SAT2）抗体的简便、迅速、高特异性和灵敏性的胶体金免疫层析方法。该方法利用胶体金颗粒标记的VP1蛋白作为标记抗原，并在硝酸纤维素膜上固定VP1蛋白及其单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab），分别形成检测线（T线）和质量控制线（C线）。通过一系列优化试验，胶体金标记VP1蛋白的最适p H、标记量分别为8.0和24μg/m L,C线的喷膜浓度为1.5 mg/m L,T线的喷膜浓度为0.2 mg/m L，可在12～15 min内完成检测，用于检测FMDV-SAT2抗体。结果显示，研制的胶体金试纸条与塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）、O型口蹄疫病毒（FMDV-O）、A型口蹄疫病毒（FMDV-A）的灭活血清以及南非1型口蹄疫病毒（FMDV-SAT1）、南非3型口蹄疫病毒（FMDV-SAT3)VP1蛋白免疫的兔血清均无交叉反应；与南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白（FMDV-SAT2-VP1）免疫的兔血清的反应灵敏度可达1∶64；对110份FMDV-O型和50份FMDV-A型阳性猪血清样品进行检测，所有检测结果均显示为阴性；该试纸条在室温（18℃～25℃）和冷藏（4℃）环境下可分别保持稳定6个月和9个月。结果表明，本研究研发的胶体金免疫层析试纸条展现出高度的灵敏性和特异性，同时具备检测快速、操作便捷、结果直观等特点，对FMDV-SAT2的现场检测具有实际应用价值。

关键词：南非2型口蹄疫病毒胶体金试纸条抗体检测方法

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H7N9亚型流感病毒特异性中和抗体的筛选及其表位的鉴定

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中国兽医科学 2023年第2期53卷 135-142页

作者：申汶涛王倩王正祥朱启运徐帅中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730000

为了获得H7N9亚型流感病毒的中和抗体以及鉴定新的中和表位,以原核表达的H7N9亚型流感病毒SZ19毒株血凝素蛋白HA1亚基作为免疫原,通过杂交瘤细胞技术,构建筛选得到4株单克隆抗体杂交瘤细胞株2B2B3、3C5D6、4E12D6、9F10G3;将杂交瘤细胞... 详细信息

为了获得H7N9亚型流感病毒的中和抗体以及鉴定新的中和表位,以原核表达的H7N9亚型流感病毒SZ19毒株血凝素蛋白HA1亚基作为免疫原,通过杂交瘤细胞技术,构建筛选得到4株单克隆抗体杂交瘤细胞株2B2B3、3C5D6、4E12D6、9F10G3;将杂交瘤细胞扩大培养后,注射免疫6周龄雌性BALB/c小鼠腹腔,制备获得4株单克隆抗体;对制备的4株单克隆抗体的特异性、ELISA效价、中和活性等生物活性进行鉴定与筛选。结果表明,筛选获得1株能够特异性识别H7N9亚型流感病毒HA蛋白的中和单克隆抗体2B2B3,其半数抑制浓度(IC_(50))为67.8 ng/μL,ELISA效价为4 096,为具有κ轻链的Ig G2b亚类,并通过肽扫描技术鉴定出H7N9亚型流感病毒HA蛋白高度保守的中和表位^(115)ALRQILRESGGIDKEA^(130)。

关键词： H7N9亚型流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体中和抗体抗原表位

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偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒制备及免疫原性评价

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生物工程学报 2024年第12期40卷 4509-4520页

作者：张越茹毅郝荣增杨洋赵陇和李亚军杨锐卢炳州郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

本研究旨在利用铁蛋白制备携带非洲猪瘟病毒p30蛋白的纳米颗粒抗原,并对其免疫原性进行评价,为非洲猪瘟纳米疫苗研究提供实验基础。首先,将编码p30蛋白和SpyTag标签的基因序列融合后插入pCold-I载体,得到pCold-p30质粒。将编码SpyCatche... 详细信息

本研究旨在利用铁蛋白制备携带非洲猪瘟病毒p30蛋白的纳米颗粒抗原,并对其免疫原性进行评价,为非洲猪瘟纳米疫苗研究提供实验基础。首先,将编码p30蛋白和SpyTag标签的基因序列融合后插入pCold-I载体,得到pCold-p30质粒。将编码SpyCatcher与铁蛋白的基因序列融合后插入pET-28a(+)载体得到pET-F-np质粒,并分别在大肠杆菌中诱导表达。然后,将亲和层析纯化后的p30蛋白与铁蛋白在体外偶联结合,用分子筛纯化后得到偶联p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒F-p30,利用粒径仪、透射电镜观察形态结构。将F-p30纳米颗粒蛋白免疫小鼠,评估其体液和细胞免疫应答。结果表明,本研究成功制备出偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒,颗粒结构约20nm。F-p30在体外能被小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)高效摄取,与p30蛋白相比,F-p30纳米颗粒免疫小鼠诱导产生更高水平的特异性抗体和细胞因子,更有利于刺激淋巴结滤泡辅助T细胞(follicular helper T cell,T_(FH))、生发中心B细胞(germinal center B cell,GCB)和脾脏CD4^(+)及CD8^(+)T淋巴细胞的增殖。综上,本研究成功制备了偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒,能显著增强p30蛋白的免疫原性,为非洲猪瘟疫苗的研究奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟 p30蛋白铁蛋白纳米颗粒免疫原性

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