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中国畜牧杂志 2024年第12期60卷 354-359页

作者：孙超群王辉贺越余志雪梁兴伟熊本海唐湘方广西大学动物科学技术学院广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室广西南宁530004 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽营养与饲养全国重点实验室北京100193

铜离子作为奶牛生长发育阶段的必需金属元素发挥着极为重要作用,其缺乏或过量都会影响奶牛生理健康及养殖场经济效益,因此实时快速检测铜离子对于调节饲料中含铜添加剂具有重要意义。荧光生物传感器具有高灵敏度、高选择性、实时监测、... 详细信息

铜离子作为奶牛生长发育阶段的必需金属元素发挥着极为重要作用,其缺乏或过量都会影响奶牛生理健康及养殖场经济效益,因此实时快速检测铜离子对于调节饲料中含铜添加剂具有重要意义。荧光生物传感器具有高灵敏度、高选择性、实时监测、易操作、低成本、大规模生产等优点,非常适合奶牛养殖场现场快速检测。本试验旨在将对铜离子选择性和灵敏性高的脱氧核酶作为生物敏感材料,设计在脱氧核酶的5'端和特异性底物链的3'端分别标记标荧光染料Cy5和猝灭剂BHQ3,制备荧光生物传感器,对生物敏感材料浓度与pH环境进行优化,并对钙、镁、锌等金属离子进行特异性检测。当铜离子存在时,铜离子与脱氧核酶特异性结合,进而切割特异性底物链的rA位点,导致Cy5重新暴露,荧光信号增强。通过试验表明,该方法构建的荧光生物传感器可以在pH 6.0~6.5对1~1000 nmol/L的铜离子具有良好的线性关系,最低检测限为0.67 nmol/L,该方法可快速检测奶牛血清铜离子。

关键词：血清铜脱氧核酶分子信标荧光奶牛

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H9N2亚型禽流感病毒NP蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

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中国兽医科学 2023年第10期53卷 1216-1222页

作者：梁世蕊吉艳红王丹朱启运中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046

以H9N2亚型禽流感病毒(AIV)为研究对象,将病毒灭活纯化后免疫羊驼,测得其血清抗体效价为1∶128000;提取羊驼外周血淋巴细胞RNA,获得单个重链可变区(VHH)基因,成功构建H9N2亚型AIV的纳米抗体噬菌体展示文库,文库库容量为1.3×10^(9)c... 详细信息

以H9N2亚型禽流感病毒(AIV)为研究对象,将病毒灭活纯化后免疫羊驼,测得其血清抗体效价为1∶128000;提取羊驼外周血淋巴细胞RNA,获得单个重链可变区(VHH)基因,成功构建H9N2亚型AIV的纳米抗体噬菌体展示文库,文库库容量为1.3×10^(9)cfu/mL,阳性率为100%;以H9N2亚型AIV-NP蛋白为靶向抗原,利用噬菌体展示技术进行筛选,获得3株靶向H9N2亚型AIV-NP蛋白的纳米抗体;构建纳米抗体真核表达重组质粒,表达纯化后收获3株纳米抗体;通过间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光试验对纳米抗体的亲和力、特异性等生物活性进行鉴定,最终得到1株广谱性高亲和力的H9N2亚型AIV-NP蛋白纳米抗体,可为检测方法的建立提供新的生物材料。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型核蛋白纳米抗体特性鉴定

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非洲猪瘟病毒MGF360-14L靶向MAVS抑制Ⅰ型干扰素的产生

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畜牧兽医学报 2022年第9期53卷 3272-3278页

作者：王洋崔帅鑫婷王西西于海男陈世钰蒋亚君高新桃庞忠宝姜一曈郭晓宇贾红朱鸿飞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国科学院微生物研究所北京100080 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

本研究旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)多基因家族成员MGF360-14L对Ⅰ型干扰素(IFN)的抑制作用及其作用机制。通过双荧光素酶试验检测MGF360-14L对线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)诱导的干扰素β(IFN-β)启动子活性... 详细信息

本研究旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)多基因家族成员MGF360-14L对Ⅰ型干扰素(IFN)的抑制作用及其作用机制。通过双荧光素酶试验检测MGF360-14L对线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)诱导的干扰素β(IFN-β)启动子活性的影响,免疫共沉淀和激光共聚焦检测MGF360-14L与MAVS的互作关系,及Western blot分析MGF360-14L对MAVS和TRIM21诱导的TBK1和IRF3磷酸化的影响。结果表明,ASFV非结构蛋白MGF360-14L抑制MAVS诱导的IFN-β启动子活性。MGF360-14L能够与MAVS互作,并且对MAVS和TRIM21诱导的TBK1和IRF3磷酸化具有抑制作用。此外,当过表达MGF360-14L时,MGF360-14L蛋白与TRIM21竞争结合MAVS,抑制TRIM21对MAVS的泛素化作用,从而降低IFN-β的水平。综上所述,MGF360-14L可能通过竞争性结合MAVS,抑制TRIM21对MAVS的泛素化,从而下调Ⅰ型IFN的产生。研究结果为探究ASFV的免疫逃逸机制提供了新线索。

关键词：非洲猪瘟病毒 Ⅰ型干扰素线粒体抗病毒信号蛋白泛素化免疫逃逸

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白介素15蛋白的抗体制备及其在猪繁殖与呼吸综合征病毒活载体中的表达

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中国动物传染病学报 2024年

作者：郭子强李佳乐罗梦唐银保帅文娜李丽薇周艳君童武姜一峰童光志高飞中国农业科学院上海兽医研究所广西大学动物科学技术学院南京农业大学动物医学院扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心上海市兽医生物技术重点实验室

本研究旨在制备IL15多克隆抗体，并使用质粒pCDNA3.1-IL15和重组病毒rPRRSV-IL15进行验证。首先构建原核表达质粒pET-IL15，经IPTG诱导后，利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析，利用纯化后得到的IL15重组蛋白三次免疫兔... 详细信息

本研究旨在制备IL15多克隆抗体，并使用质粒pCDNA3.1-IL15和重组病毒rPRRSV-IL15进行验证。首先构建原核表达质粒pET-IL15，经IPTG诱导后，利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析，利用纯化后得到的IL15重组蛋白三次免疫兔后制备多克隆抗体。同时，利用反向遗传操作技术将IL15基因插入高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株vHuN4-F112的感染性克隆中，拯救获得能够稳定表达IL15蛋白的重组病毒rPRRSV-IL15。接着，将表达IL15蛋白的质粒pCDNA3.1-IL15转染HEK 293T细胞，rPRRSV-IL15感染MARC-145细胞和PAMs后，用上述制备的抗体进行验证。结果显示，制备的IL15多克隆抗体具有良好的反应性和特异性，能够识别和结合转染了pCDNA3.1-IL15质粒和感染了rPRRSV-IL15重组病毒的细胞中的IL15蛋白，为进一步研究IL15蛋白的生物学功能以及其在免疫调节中的作用奠定了重要基础，重组病毒rPRRSV-IL15也是新型免疫增强型PRRSV弱毒疫苗研制的一种尝试。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒活载体 IL15蛋白多克隆抗体

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CHO细胞表达重组猪干扰素-γ及其抗病毒活性

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4784-4795页

作者：王凌云郝荣增杨洋李亚军卢炳州毛玉涵张越龚真莉刘艳红齐萌茹毅郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300

为利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovarian,CHO)细胞表达系统制备重组猪干扰素-γ(recombinant porcine interferon gamma,rPoIFN-γ),并分析其体外抗病毒活性,本研究首先构建rPoIFN-γ真核表达质粒pc DNA3.1-PoIFN-γ,转染悬浮培养的CHO细胞,进行上清分泌表达,利用亲和层析纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;通过CCK-8实验分析rPoIFN-γ对细胞的毒性,用VSV/PK-15系统检测其抗病毒活性效价;最后分析rPoIFN-γ对塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的抗病毒活性及其对细胞内干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)和细胞因子的诱导作用。结果显示,本研究利用CHO悬浮细胞表达系统成功制备了纯化的rPoIFN-γ,该rPoIFN-γ对细胞无毒性,VSV/PK-15系统检测其活性效价为5.59×10^(7) U/mg;此外,rPoIFN-γ可诱导细胞内多种ISGs和细胞因子的表达,并显著抑制SVA的复制。总之,本研究成功利用CHO表达系统制备了高活性的rPoIFN-γ,并在体外完成其对SVA的抗病毒作用分析,为rPoIFN-γ的功能及抗病毒制剂的研究提供了实验材料和基础。

关键词：猪干扰素-γ 塞内卡病毒A 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞蛋白表达与纯化抗病毒活性

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生物钟作用机制及其对动物年节律产生的影响

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遗传 2023年第5期45卷 409-424页

作者：杨阳储明星刘秋月中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部动物遗传育种与繁殖重点实验室北京100193 中国科学院遗传与发育生物学研究所种子创新研究院北京100101

生物钟几乎存在于所有生命体,是生物适应外界环境的每日周期性变化而产生的内部活动。生物钟在体内受转录-翻译-负反馈环路调控,能调节组织、器官的活动,其正常维持对生物的健康、生长、繁殖等具有重要意义。与之相对,由于环境的四季变... 详细信息

生物钟几乎存在于所有生命体,是生物适应外界环境的每日周期性变化而产生的内部活动。生物钟在体内受转录-翻译-负反馈环路调控,能调节组织、器官的活动,其正常维持对生物的健康、生长、繁殖等具有重要意义。与之相对,由于环境的四季变化,生物也形成了体内的年周期生理变化,如季节性发情、昆虫滞育等。生物的年节律在外部主要受光周期为主的环境因素影响,在体内则与基因表达、激素含量和细胞组织形态的变化有关。褪黑素是识别外部光周期变化的重要信号,而生物钟在垂体解析褪黑素信号并调控下游信号变化中扮演着重要角色,对环境年度变化的识别和机体年节律的产生具有重要指导作用。本文通过介绍昆虫和哺乳动物的昼夜节律和年节律产生的机制,并结合鸟类的年节律,综述了生物钟对年节律产生影响的作用机制研究进展,以期为今后研究年节律的影响机制提供更广泛的思路。

关键词：生物钟年节律分子机制昆虫哺乳动物

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A型塞内卡病毒VP2蛋白多表位抗原免疫原性分析

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农业生物技术学报 2023年第6期31卷 1284-1295页

作者：陶世宇茹毅陈娇郝荣增李亚军卢炳州石正旺刘学荣郑海学魏彦明甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室中农威特生物科技股份有限公司

A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)是一种新型的小RNA病毒，严重危害我国养猪业的发展。目前尚无有效的SVA疫苗，为探究SVA新型亚单位疫苗，本研究以SVA的病毒结构蛋白2(viral structural protein 2, VP2)基因序列为基础，选取利用生... 详细信息

A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)是一种新型的小RNA病毒，严重危害我国养猪业的发展。目前尚无有效的SVA疫苗，为探究SVA新型亚单位疫苗，本研究以SVA的病毒结构蛋白2(viral structural protein 2, VP2)基因序列为基础，选取利用生物信息学方法预测的B细胞表位序列及已报道的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV) 3A蛋白的T细胞表位基因，密码子优化后通过柔性连接肽进行串联连接，分别构建重组表达质粒pET28a-rSVP2-B和pET28a-rSVP2-BT。将原核可溶性表达并纯化的重组串联表位蛋白rSVP2-B和rSVP2-BT，经SDS-PAGE和Western blot鉴定后，免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)，评价其免疫原性。结果显示，重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)，经诱导表达后，目标蛋白均正确表达，SDS-PAGE分析显示，其相对分子质量分别为34和38 kD。Western blot结果显示，rSVP2-B和rSVP2-BT与SVA阳性血清均具有良好的反应原性。纯化后rSVP2-B和rSVP2-BT免疫小鼠产生的体液免疫水平无显著差异，均诱导产生了较强的特异性IgG抗体及IgG1抗体，且主要诱导偏向于Th2型的体液免疫应答。病毒中和实验结果显示，2种重组蛋白的中和抗体效价介于1∶64～1∶128。同时，rSVP2-B和rSVP2-BT免疫小鼠也产生了较强的细胞免疫，其中rSVP2-BT免疫组的脾淋巴细胞增殖水平、细胞因子白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)和干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)水平显著高于rSVP2-B。以上结果表明，成功制备了具有良好免疫原性的重组串联多表位蛋白rSVP2-B和rSVP2-BT,rSVP2-BT的免疫原性优于rSVP2-B。本研究为SVA多表位疫苗研制提供理论依据。

关键词： A型塞内卡病毒(SVA) 病毒结构蛋白2(VP2) 重组串联表位蛋白可溶性表达免疫原性

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产后不同挤奶时间对初乳品质及不同品质初乳对新生犊牛被动免疫转移的影响

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畜牧兽医学报 2025年

作者：包小平崔俊伟赵玉龙郭成陈明毕研亮中国农业科学院饲料研究所农业部饲料生物技术重点实验室奶牛营养学北京市重点实验室东营澳亚现代牧场有限公司宁夏大学动物科技学院现代牧业(乌兰浩特)有限公司

旨在研究不同挤奶时间对初乳品质的影响及不同品质初乳对新生犊牛被动免疫和血清免疫指标的影响。试验选择体况良好、临近分娩的荷斯坦二胎奶牛329头，根据奶牛的分娩时间和挤奶时间的间隔，将奶牛分成4组，分别为分娩后2 h内挤奶、分娩... 详细信息

旨在研究不同挤奶时间对初乳品质的影响及不同品质初乳对新生犊牛被动免疫和血清免疫指标的影响。试验选择体况良好、临近分娩的荷斯坦二胎奶牛329头，根据奶牛的分娩时间和挤奶时间的间隔，将奶牛分成4组，分别为分娩后2 h内挤奶、分娩后2～4 h挤奶、分娩后4～8 h挤奶和分娩后8～12 h挤奶，检测分娩后不同挤奶时间对初乳中免疫球蛋白G（IgG）含量的影响。选择出生日期相近，体重38 kg±2 kg的荷斯坦母犊牛45头，随机分成3组：高IgG组、中IgG组和低IgG组，每组15头母犊牛，均采用4+2饲喂模式（出生后2 h内灌服4 L初乳，出生后6 h灌服2 L初乳）分别饲喂3种不同品质的初乳，初乳IgG含量分别为63.8、37.6和15.6 mg·mL－1。所有犊牛出生后立即采集血液（0 h），2 h内灌服初乳，灌服初乳后24和48 h各采血1次，分析血清中的总蛋白（TP）、IgG、白蛋白（ALB）、C3、C4含量。结果表明：1)分娩后2 h内所挤得初乳，初乳中IgG含量极显著高于分娩后2～4 h、4～8 h和8 h以上所挤得初乳（P＜0.01）。2)犊牛出生后在灌服初乳之前，三组犊牛血清TP和IgG含量无明显差异，灌服初乳后24、48 h时，高IgG组犊牛的血清TP、IgG含量极显著高于中IgG组及低IgG组（P＜0.01）。3)高IgG组和中IgG组母犊牛24 h、48 h血清平均IgG含量均大于10 mg·mL－1（犊牛被动免疫成功的最低IgG含量），但低IgG组，有5头犊牛在24 h的血清IgG含量达不到10 mg·mL－1，被动免疫失败的犊牛占本组犊牛数量的33.3%，有4头犊牛在48 h的血清IgG含量达不到10 mg·mL－1，被动免疫失败的犊牛占本组犊牛总数的26.7%。综上所述，奶牛分娩后挤奶间隔时间越短初乳品质越高，挤奶间隔时间控制在2 h内，初乳中IgG的含量最高；品质较高的初乳有助于新生犊牛被动免疫成功并对血清免疫指标产生有利影响。

关键词：犊牛初乳品质被动免疫转移血清免疫指标

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过表达非洲猪瘟病毒D1133L蛋白的MA-104细胞系建立及其初步应用

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畜牧兽医学报 2022年第6期53卷 1877-1885页

作者：张婷杨博崔卉梅袁兴国赵登率杨金柯郝雨陈学辉闫文倩申超超史喜绢张大俊杨行刘湘涛郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730000

旨在研究非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)编码的D1133L基因功能,本文利用慢病毒表达系统构建了过表达D1133L的MA-104/D1133L细胞系,分析ASFV在MA-104/D1133L细胞系与MA-104细胞中的复制差异。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染MA-104/D1133L细胞后p30和p72基因的转录和蛋白表达水平,同时测定病毒滴度和病毒拷贝数评价ASFV的复制能力。结果表明:ASFV p30和p72基因在MA-104/D1133L细胞系的转录和蛋白表达水平高于野生型细胞系,ASFV在MA-104/D1133L细胞系的病毒增殖能力高于野生型细胞。本研究成功构建了过表达ASFV D1133L基因的MA-104/D1133L细胞系,与野生型细胞相比,D1133L能促进ASFV增殖,MA-104/D1133L细胞系更利于ASFV的复制,本结果为进一步研究ASFV D1133L基因功能积累了生物材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 D1133L基因 MA-104细胞基因功能过表达细胞系

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饲用缓释包被尿素的质量评价

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中国饲料 2023年第21期 160-166页

作者：田锦秀郑楠王加启郭艺璇赵圣国青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193

饲用缓释包被尿素相比于普通尿素,能减缓尿素释放速率、提高氮利用率、更好的促进微生物蛋白的合成。目前,市场上缓释包被尿素产品种类较多,为评价缓释包被尿素饲料的产品质量,本文从颜色气味、粒度、包被材料、平均抗压碎力进行表型测... 详细信息

饲用缓释包被尿素相比于普通尿素,能减缓尿素释放速率、提高氮利用率、更好的促进微生物蛋白的合成。目前,市场上缓释包被尿素产品种类较多,为评价缓释包被尿素饲料的产品质量,本文从颜色气味、粒度、包被材料、平均抗压碎力进行表型测定,从水分含量、尿素含量、氮含量进行理化成分的检测,选择1 h尿素释放率评估尿素缓释效果,旨在建立一套缓释包被尿素饲料评价体系,用于对饲用缓释包被尿素产品质量的评估。

关键词：饲用缓释包被尿素表型评价理化评价

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