检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2025年第3期52卷 1013-1031页

作者：张明叶赵远东孙将吴国芳王磊王彦伟胡国全农业农村部成都沼气科学研究所四川成都610041 中国农业科学院研究生院北京100081 青海大学畜牧兽医科学院、青海省高原家畜遗传资源保护与创新利用重点实验室、农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室青海西宁810016

【背景】好氧堆肥是处理农业固体废弃物常用的资源化利用方式,但在此过程中会产生恶臭气体(NH3和H2S),对人类和畜禽的健康造成威胁。微生物除臭技术成本低、效果好,但单菌株的环境适应性差、作用单一。【目的】开发高效微生物除臭菌株组... 详细信息

【背景】好氧堆肥是处理农业固体废弃物常用的资源化利用方式,但在此过程中会产生恶臭气体(NH3和H2S),对人类和畜禽的健康造成威胁。微生物除臭技术成本低、效果好,但单菌株的环境适应性差、作用单一。【目的】开发高效微生物除臭菌株组合,优化微生物除臭技术,解决堆肥恶臭问题。【方法】通过筛选除臭微生物、控温模拟堆肥研究微生物除臭菌株组合对堆肥过程中细菌群落结构变化的影响,并对相关功能基因进行分析和注释。【结果】添加微生物除臭菌株组合E的堆肥中,NH3和H2S的最高释放量仅有添加商用菌剂X组的40%左右。物种分类结果表明,堆肥过程中相对丰度较高的门包括变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinomycetota)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidota)等,相较于X组和CK组,变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinomycetota)在E组的样本中具有更高的相对丰度;优势菌属包括假单胞菌属(Pseudomonas)、棒杆菌属(Corynebacterium)、假纤细芽孢杆菌属(Pseudogracilibacillus)等,其中棒杆菌属在E组样本中一直占据优势。KEGG数据库注释结果表明,微生物除臭菌株组合E的添加促进了堆肥中微生物群落的氨基酸代谢水平;功能基因注释结果也表明氨同化相关基因(gs,gdh,asn,gln)和含硫氨基酸合成相关基因(cysC)的丰度较高,因此,组合E减少NH3和H2S排放的主要机制是促进了氮和硫元素转化为氨基酸等有机物。【结论】微生物除臭菌株组合E能够在粪污堆肥过程中有效抑制NH3和H2S的释放,为粪污资源化利用过程中产生的臭气处理提供了微生物资源基础。

关键词：除臭菌株组合好氧堆肥氨气硫化氢细菌群落

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阪崎克罗诺杆菌双抗夹心酶联免疫吸附检测方法的建立

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畜牧与兽医 2024年第4期56卷 66-71页

作者：张欣王福成韩先干祁克宗宋祥军董雨豪蒋蔚中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 安徽农业大学兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室安徽合肥230036

为建立阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的免疫学快速检测方法,分别制备了阪崎克罗诺杆菌的特异性单抗和多抗,建立阪崎克罗诺杆菌的双抗夹心酶联免疫吸附DAS-ELISA检测方法。结果:获得4株抗阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体阳性细胞株,... 详细信息

为建立阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的免疫学快速检测方法,分别制备了阪崎克罗诺杆菌的特异性单抗和多抗,建立阪崎克罗诺杆菌的双抗夹心酶联免疫吸附DAS-ELISA检测方法。结果:获得4株抗阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体阳性细胞株,分泌抗体效价分别是1∶128000、1∶32000、1∶256000和1∶256000,抗阪崎克罗诺杆菌兔多克隆抗体效价是1∶128000。建立的阪崎克罗诺杆菌DAS-ELISA检测方法,分别以抗阪崎克罗诺杆菌兔多抗和单抗作为捕获抗体和检测抗体,兔多抗的最佳稀释度为1∶4000,单克隆抗体最佳稀释度为1∶1000,灵敏性可达1×106 CFU/mL;该检测方法具有良好的特异性,与常见的6种食源性病原菌都没有交叉反应,且能够同时检测6种克罗诺杆菌属细菌;重复性结果显示,该检测方法的批内批间变异系数均小于15%,具有良好的重复性。综上,利用抗阪崎克罗诺杆菌的单抗和兔多抗成功建立了DAS-ELISA方法,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可为阪崎克罗诺杆菌的快速检测提供技术支撑。

关键词：阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体双抗体夹心ELISA

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细菌素防治动物细菌性疾病的研究进展

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中国预防兽医学报 2024年第9期46卷 986-996页

作者：刘东慧权衡李彩玉刘梦瑶周继章宫晓炜陈启伟中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院/动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础科学研究中心甘肃兰州730046

在进化过程中,植物、昆虫、爬行动物及人类等生物通过产生不同的防御机制来抵抗外来病原的侵入以适应复杂的环境。最常见的是产生抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMP),其可以影响病原体细胞膜的通透性、核酸的复制及蛋白质的合成。抗菌... 详细信息

在进化过程中,植物、昆虫、爬行动物及人类等生物通过产生不同的防御机制来抵抗外来病原的侵入以适应复杂的环境。最常见的是产生抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMP),其可以影响病原体细胞膜的通透性、核酸的复制及蛋白质的合成。抗菌肽是广泛存在于生物体内的一种具有生物活性的小分子多肽,包括昆虫抗菌肽、哺乳动物抗菌肽、两栖动物抗菌肽、鱼类抗菌肽、软体动物抗菌肽、甲壳类动物抗菌肽、植物抗菌肽、细菌抗菌肽(又称细菌素)。绝大多数微生物(主要是革兰氏阳性菌)和古细菌至少会产生一种抗菌肽,以保护自身并在生态环境中保持竞争优势[1]。细菌素(Bacteriocin)是细菌核糖体产生的小分子阳离子肽,具有抑菌作用。由于其强大的抑菌性能,细菌素作为益生菌的代谢物成为近年来的研究热点。例如,Whitehead在1933年发现,乳酸乳球菌乳亚种(Lactococcus lactis ***)产生的乳链球菌素(Nisin)在小鼠体内具有抗链球菌感染的活性[2]。随后,发现了越来越多的细菌素,例如片球菌素A[3]、植物乳杆菌素S/T[4]、Enterocin 1146[5]、Piscicolin 126[6]、Pneumocyclicin[7]、植物乳杆菌素JY22[8]和Gassericin M[9]。动物用替抗产品需求的增加加速了细菌素的研发进程,很多细菌素具有强大的抑菌活性,有望成为治疗重大疾病的新型绿色天然药物。

关键词：细菌性疾病甲壳类动物链球菌感染革兰氏阳性菌细菌素通透性防御机制

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4-草酰巴豆酸互变异构酶催化合成肉桂醛的条件优化及其应用潜力分析

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生物技术进展 2025年第2期15卷 296-304页

作者：陈熙黄火清柏映国王苑夏呈强罗会颖姚斌涂涛刘晓青山西农业大学动物科学学院山西晋中030801 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽营养与饲养全国重点实验室北京100193 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

肉桂醛是一种重要的天然产物,广泛应用于医药、食品及饲料添加剂领域,然而传统化学合成方法存在高能耗和环境污染等问题,限制了其工业化应用。酶催化作为一种绿色合成途径,具有专一性高、环境友好的优点,对于探索酶催化合成肉桂醛具有... 详细信息

肉桂醛是一种重要的天然产物,广泛应用于医药、食品及饲料添加剂领域,然而传统化学合成方法存在高能耗和环境污染等问题,限制了其工业化应用。酶催化作为一种绿色合成途径,具有专一性高、环境友好的优点,对于探索酶催化合成肉桂醛具有重要意义。利用4-OT构建pET-20b-4-OT表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化4-草酰巴豆酸互变异构酶(4-oxalocrotonate tautomerase,4-OT),验证以苯甲醛和乙醛为底物合成肉桂醛的能力,并在不同pH、温度、酶浓度、盐浓度及底物浓度下研究其合成性能,通过高效液相色谱检测肉桂醛产量并分析优化条件对肉桂醛生成的影响。结果表明,4-OT在最适pH 7.3,最适温度37℃,酶浓度为15 mg·mL^(-1)时肉桂醛产量较初始条件提高181%,125 mmol·L^(-1)K_(2)HPO_(4)-KH_(2)PO_(4)能显著提升酶活性;底物苯甲醛和乙醛的最优浓度分别为0.5和500 mmol·L^(-1)。扩大反应体系至400 mL后,肉桂醛产量最终提升719倍,转化率提高143倍。研究优化了4-OT催化合成肉桂醛的条件,显著提升了其催化效率和产量,为4-OT在肉桂醛绿色合成中的工业应用提供了有力支持。

关键词： 4-草酰巴豆酸互变异构酶肉桂醛酶催化条件优化绿色合成

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非洲猪瘟病毒B602L基因编码蛋白多克隆抗体的制备及其在PRRSV活载体中的表达

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中国兽医科学 2025年第2期55卷 171-181页

作者：罗梦郭子强李佳乐帅文娜李丽薇周艳君姜一峰童武童光志丛雁方韦祖樟高飞广西大学动物科学技术学院南宁530004 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 青岛动保国家工程技术研究中心有限公司青岛266000

为深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的编码基因B602L,本研究根据ASFVSY18株的B602L基因序列(MH766894.3),设计引物合成1593 bp的B602L基因全长序列,构建pCold-TFB602L原核表达质粒。将鉴定正确的原核表达质粒转化... 详细信息

为深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的编码基因B602L,本研究根据ASFVSY18株的B602L基因序列(MH766894.3),设计引物合成1593 bp的B602L基因全长序列,构建pCold-TFB602L原核表达质粒。将鉴定正确的原核表达质粒转化感受态细胞,用IPTG诱导表达重组蛋白B602L并通过SDS-PAGE进行验证和分析。用纯化后的pB602L蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,测定抗体效价并经Westernblot鉴定其特异性。同时基于本实验室前期研究,构建表达B602L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)全长感染性克隆。本研究将ASFV B602L基因全长序列插入PRRSVORF1b和ORF2a之间,转染全长感染性克隆质粒后拯救获得重组病毒rPRRSV-B602L,并对其进行病毒学特性分析。利用制备的多克隆抗体与重组病毒和真核细胞表达的蛋白进行Western-blot和IFA验证。结果显示,成功构建pCold-TF-B602L原核表达质粒,诱导表达的重组蛋白pB602L可与His标签单抗和制备的抗pB602L抗体产生特异性反应,其效价为1∶16000;成功构建并拯救出重组病毒rPRRSV-B602L,它与亲本病毒具有相似的病毒学特性。本研究拯救的重组病毒可以稳定表达pB602L蛋白,该抗pB602L多克隆抗体能够特异性识别重组病毒表达的蛋白和真核细胞表达的蛋白,具有良好的特异性和反应原性,为进一步探索pB602L蛋白的功能及研制表达ASFV特异性抗原蛋白的重组PRRSV活载体疫苗提供一定的研究基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 pB602L蛋白多克隆抗体病毒活载体

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CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白及免疫原性分析

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畜牧兽医学报 2022年第12期53卷 4315-4324页

作者：李亚军茹毅郝荣增蒋成辉王伟张越张贵才刘华南卢炳州杨洋陶世宇杨锐宋向东陈娇余四九郑海学甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州730046

旨在利用悬浮培养CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2蛋白,并鉴定纯化E2蛋白的免疫原性。本研究以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建BVDV E2蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2,转染经悬浮... 详细信息

旨在利用悬浮培养CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2蛋白,并鉴定纯化E2蛋白的免疫原性。本研究以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建BVDV E2蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2,转染经悬浮培养的CHO细胞进行分泌表达,收集细胞培养上清,进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达和纯化,Western blot鉴定与His抗体和BVDV阳性血清反应性,利用纯化蛋白免疫新西兰大白兔,用细胞间接免疫荧光(IFA)和ELISA鉴定E2蛋白的反应活性。纯化E2蛋白经BCA蛋白定量试剂盒检测后表达量高达1.228 mg·mL^(-1);Western blot结果显示,利用His抗体和BVDV阳性血清均可检测到目的蛋白的特异性条带;新西兰大白兔一免后第7天利用间接ELISA可检测到血清抗体阳性,并持续至免疫后第28天,血清抗体效价水平达到1∶1024000;IFA试验结果显示,该血清抗体可检测到BVDV感染MDBK细胞中E2蛋白的表达,进一步证实纯化的E2蛋白具有良好的免疫原性和特异性。本研究成功利用CHO悬浮培养真核表达系统制备了纯化的BVDV E2蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,为BVDV的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白真核表达 CHO悬浮培养免疫原性

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牦牛PID1基因克隆、生物信息学及组织表达分析

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华北农学报 2024年第6期39卷 216-223页

作者：余道宁王佟洛桑顿珠平措占堆张强卓玛次仁尼玛加措张德荣梁春年西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730124 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省牦牛繁育重点实验室甘肃兰州730050 农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室甘肃兰州730050 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850004 日喀则市昂仁县农业农村局西藏日喀则857001

为研究牦牛磷酸酪氨酸互作结构域1基因(PID1)的结构及功能,并探究其在各组织中的表达情况,以桑桑牦牛脂肪组织cDNA为模板克隆桑桑牦牛PID1基因CDS区序列,并对其进行生物信息学分析。同时,采用实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR),对牦牛的7个... 详细信息

为研究牦牛磷酸酪氨酸互作结构域1基因(PID1)的结构及功能,并探究其在各组织中的表达情况,以桑桑牦牛脂肪组织cDNA为模板克隆桑桑牦牛PID1基因CDS区序列,并对其进行生物信息学分析。同时,采用实时荧光定量PCR方法(RT-qPCR),对牦牛的7个不同组织包括心、肝、脾、肺、肾、背部肌肉及脂肪进行PID1基因表达水平的定量。结果表明,牦牛PID1基因的编码区长度是654 bp,编码217个氨基酸;通过同源性比对,结果发现,牦牛与野牦牛之间的亲缘关系最为接近,相似度达到100%;经过蛋白质分析发现,牦牛PID1蛋白的分子质量约为24.84 ku,理论等电点为6.30。根据不稳定系数计算结果显示,其不稳定性较高(47.96),属于一种不稳定蛋白质。该蛋白内含有1个N-糖基化位点和23个磷酸化位点,无信号肽和跨膜结构。RT-qPCR试验结果表明,在各个组织中都能检测到PID1基因的表达情况,其中在肺部表达量最高。该研究克隆了牦牛PID1基因,并对其蛋白结构进行了分析,同时还研究了该基因在牦牛组织中的表达情况。为进一步探究PID1基因在牦牛脂肪沉积过程中的作用提供了初步数据。

关键词：牦牛 PID1基因基因克隆生物信息学

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牛源抗金黄色葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白单链抗体的筛选及其体外抑菌的研究

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中国动物传染病学报 2023年第2期31卷 145-150页

作者：闫洁新张波张凡庆管玉王曼张蕾程曼玲朱建国上海交通大学农业与生物学院上海兽医生物技术重点实验室上海200240

由金黄色葡萄球菌(***)引发的奶牛乳腺炎是造成国内外奶牛产业经济损失的重要疾病之一。为了获得牛源抗***弹性纤维结合蛋白N端蛋白(nEbpS)的单链抗体(scFv),本研究利用噬菌体展示技术,将原核表达的nEbpS包被到固相载体酶标板上,以实验... 详细信息

由金黄色葡萄球菌(***)引发的奶牛乳腺炎是造成国内外奶牛产业经济损失的重要疾病之一。为了获得牛源抗***弹性纤维结合蛋白N端蛋白(nEbpS)的单链抗体(scFv),本研究利用噬菌体展示技术,将原核表达的nEbpS包被到固相载体酶标板上,以实验室前期构建好的抗牛源***噬菌体库为原始文库进行筛选,得到1株靶向nEbpS的高亲和力scFv,将得到的scFv构建原核质粒进行原核表达,获得了高纯度scFv蛋白,将其与*** ATCC25923在含有Zn2+的Luria-Bertani培养基中共同孵育后发现,50μg/mL scFv组菌液浓度显著小于生理盐水组(P<0.05),结果表明,针对nEbpS的牛源scFv具有良好的抑菌能力,浓度为50μg/mL时即可显著抑制*** ATCC25923的生长。本研究为***所导致的奶牛乳腺炎提供了一种新型免疫制剂,也为进一步研究nEbpS抗原的功能奠定了基础。

关键词：奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌弹性纤维结合蛋白单链抗体

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固原黄牛不同部位肌肉组织代谢组学分析

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1565-1578页

作者：王中波刘爽贺丽霞冯雪杨梦丽汪书哲刘源冯兰丁晓玲冀国尚杨润军张路培马云宁夏大学动物科技学院宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室银川750021 吉林大学动物科学学院长春130000 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

旨在探究与固原黄牛肉风味形成相关的关键代谢物、代谢途径和酶,为深入解析固原黄牛肉肉品组成提高肉品质量奠定基础。本研究选用同一生长条件下,24月龄的6头健康雄性固原黄牛作为研究对象,利用非靶向代谢组学技术对眼肉、肩肉和臀肉3... 详细信息

旨在探究与固原黄牛肉风味形成相关的关键代谢物、代谢途径和酶,为深入解析固原黄牛肉肉品组成提高肉品质量奠定基础。本研究选用同一生长条件下,24月龄的6头健康雄性固原黄牛作为研究对象,利用非靶向代谢组学技术对眼肉、肩肉和臀肉3个组进行代谢物分析鉴定,通过主成分分析、偏最小二乘法判别分析和聚类分析筛选差异代谢物,并对筛选结果进行富集分析。随后,利用FELLA分析调控不饱和脂肪酸合成代谢相关的途径以及潜在的关键代谢物,同时对差异代谢物进行WGCNA分析。代谢物分析结果显示,固原黄牛眼肉、肩肉和臀肉3个组共鉴定出689个代谢物,其中脂质和类脂分子占比32.08%,脂肪酸类代谢物49种,聚类分析肩肉组和臀肉组样本聚为一类,眼肉组样本单独为一类。N6,N6,N6-三甲基-L-赖氨酸(N6,N6,N6-trimethyl-L-lysine)和麦芽三糖(maltotriose)是眼肉、肩肉和臀肉组与组之间共同的差异代谢物,二者含量均在眼肉最高。KEGG通路分析显示,差异代谢物主要富集在不饱和脂肪酸生物合成、嘌呤代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等代谢通路。通过WGCNA分析筛选出与3个肌肉部位相关的模块,并鉴定出了各模块中的关键代谢物。本研究通过对固原黄牛不同部位肌肉组织进行代谢组学分析,鉴定到与肉品质差异和风味形成相关的10种关键代谢物和17种关键酶,为今后探究固原黄牛肉风味形成的分子调控机制和分子育种提供理论基础,同时也为其他肉牛的品质性状育种提供参考。

关键词：固原黄牛非靶向代谢组学风味不饱和脂肪酸分子育种

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绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白原核表达及ELISA方法建立

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中国动物传染病学报 2025年第1期33卷 97-105页

作者：陈思宇张梦洁田睿陈益刘镝钺李文良毛立程子龙杨蕾蕾孙敏张纹纹杜改梅储岳峰王金泉刘茂军新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 金陵科技学院动物科学与食品工程学院南京211169 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF... 详细信息

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF-Tu蛋白,以纯化的rEF-Tu为包被抗原,建立Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示,原核表达的EF-Tu蛋白分子质量约为45.4 kDa,与预期相符;Western blot证实具有良好的反应原性;建立的间接ELISA方法最佳优化条件显示,包被抗原浓度为1.25 mg/L,37℃孵育2 h;封闭条件为30 g/L BSA,37℃孵育1 h;待检血清1∶100稀释,37℃孵育45 min;酶标二抗1∶20000稀释,37℃孵育30 min;底物TMB 37℃避光反应15 min;样品OD450值≥0.296时判定为阳性,OD450值≤0.265时判定为阴性,OD 450值0.265~0.296则判为可疑;组内和组间变异系数均低于10%;用该方法与实验室所建Mo全菌蛋白间接ELISA检测方法对233份血清进行检测,两者特异性为90.70%,敏感性为82.69%,符合率约为87.12%。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、重复性及特异性,为Mo的临床诊断、抗体监测等提供简单快速的血清学诊断方法,也为Mo抗体检测试剂盒的开发奠定了基础。

关键词：绵羊肺炎支原体 EF-Tu蛋白原核表达间接ELISA

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