检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2025年第1期33卷 97-105页

作者：陈思宇张梦洁田睿陈益刘镝钺李文良毛立程子龙杨蕾蕾孙敏张纹纹杜改梅储岳峰王金泉刘茂军新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 金陵科技学院动物科学与食品工程学院南京211169 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF... 详细信息

绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原,危害严重;快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法,利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达,纯化出高纯度重组rEF-Tu蛋白,以纯化的rEF-Tu为包被抗原,建立Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示,原核表达的EF-Tu蛋白分子质量约为45.4 kDa,与预期相符;Western blot证实具有良好的反应原性;建立的间接ELISA方法最佳优化条件显示,包被抗原浓度为1.25 mg/L,37℃孵育2 h;封闭条件为30 g/L BSA,37℃孵育1 h;待检血清1∶100稀释,37℃孵育45 min;酶标二抗1∶20000稀释,37℃孵育30 min;底物TMB 37℃避光反应15 min;样品OD450值≥0.296时判定为阳性,OD450值≤0.265时判定为阴性,OD 450值0.265~0.296则判为可疑;组内和组间变异系数均低于10%;用该方法与实验室所建Mo全菌蛋白间接ELISA检测方法对233份血清进行检测,两者特异性为90.70%,敏感性为82.69%,符合率约为87.12%。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、重复性及特异性,为Mo的临床诊断、抗体监测等提供简单快速的血清学诊断方法,也为Mo抗体检测试剂盒的开发奠定了基础。

关键词：绵羊肺炎支原体 EF-Tu蛋白原核表达间接ELISA

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宿主蛋白HERC4影响口蹄疫病毒复制的作用研究

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中国兽医科学 2025年第4期55卷 435-440页

作者：郑东东冯涛郝荣增杨彪晏子龙齐晓兰郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白... 详细信息

本研究旨在探究宿主蛋白HERC4对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术在PK15细胞中构建了HERC4基因敲除细胞系,通过DNA测序和蛋白免疫印迹试验证明构建的基因敲除细胞系成功,然后在BHK21细胞中转染不同剂量的HERC4蛋白表达质粒,制备了HERC4基因过表达细胞,随后在HERC4基因敲除细胞和过表达细胞中,分别利用蛋白免疫印迹、实时荧光定量和病毒滴度测定方法检测了HERC4蛋白对FMDV复制的影响,结果表明,HERC4蛋白对FMDV复制有影响,敲除可以抑制病毒复制,过表达可以促进病毒复制。该研究结果为后续开展HERC4蛋白调控FMDV复制机制研究奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒宿主蛋白HERC4 基因敲除基因过表达

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3~5月龄生长期湖羊母羔蛋白质需要量研究

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中国畜牧兽医 2025年第5期52卷 2128-2139页

作者：张城瑞魏学盛张明珠王杰范定坤张娟朱德志郭福锁张乃锋中国农业科学院饲料研究所农业农村部饲料生物技术重点实验室北京100081 巴彦淖尔市农牧业科学研究所巴彦淖尔015000 磴口县畜牧工作站巴彦淖尔015200

【目的】试验旨在确定生长期湖羊母羔的蛋白质需要量。【方法】试验选取生长期湖羊母羔36只,其中3、4、5月龄各12只,将不同月龄母羔随机分为3组,各组饲喂水平分别为自由采食(AL)、70%采食(AL70)、40%采食(AL40),每组4个重复,单栏饲养,... 详细信息

【目的】试验旨在确定生长期湖羊母羔的蛋白质需要量。【方法】试验选取生长期湖羊母羔36只,其中3、4、5月龄各12只,将不同月龄母羔随机分为3组,各组饲喂水平分别为自由采食(AL)、70%采食(AL70)、40%采食(AL40),每组4个重复,单栏饲养,试验期为45 d。试验期31~35 d采用全收粪尿法进行消化代谢试验,以探究生长期湖羊母羔蛋白质需要量。【结果】3、4、5月龄母羔的干物质采食量(DMI)和平均日增重(ADG)均随饲喂水平的下降而显著降低(P<0.05),因饲喂水平的降低,各月龄母羔的终末体重呈现下降趋势,但均无显著差异(P>0.05);饲喂水平的降低致使各月龄母羔的氮摄入量显著下降(P<0.05),进而各组母羔的粪氮和可消化氮含量亦显著降低(P<0.05)。在以上试验结果的基础上通过拟合多元回归方程,获得3、4、5月龄湖羊母羔的采食量、蛋白质需要量预测方程。其中,3~5月龄湖羊母羔的粗蛋白质、可消化蛋白质、净蛋白质的维持需要量分别为9.10、5.60、2.80 g/(kg BW 0.75·d);试验母羔每增重1 g,粗蛋白质、可消化蛋白质、净蛋白质需要量分别为0.194、0.113、0.088 g。当其日增重达100~300 g/d时,3~5月龄湖羊母羔生长粗蛋白质需要量为88.76~174.85 g/d,可消化蛋白质需要量为53.98~105.68 g/d,净蛋白质需要量为30.14~62.29 g/d。【结论】本试验条件下,生长期湖羊母羔蛋白质需要量与目前的绵羊推荐量有所差异,与羔羊品种、年龄、环境和营养水平等有关;本试验得到的预测方程可用于估算3~5月龄生长期湖羊母羔蛋白质需要量。

关键词：湖羊生长母羔氮代谢蛋白质需要量预测模型

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O型口蹄疫病毒CATHAY株持续感染BHK21细胞系的建立

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中国兽医科学 2024年第10期54卷 1279-1286页

作者：彭德财刘伟高闪电马云云温升辉侯茁师铭咸邵军军常惠芸丁嘉烽广西大学动物科学技术学院临床兽医学实验室广西南宁530004 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为研究口蹄疫病毒(FMDV)持续感染形成的分子机理,本研究利用氯化铵、利巴韦林、免疫阳性血清和低剂量病毒处理O型FMDV(CATHAY株)和BHK21细胞建立持续感染细胞系,采用RT-PCR、核酸测序、IFA和Western-blot方法筛选和验证持续感染细胞模... 详细信息

为研究口蹄疫病毒(FMDV)持续感染形成的分子机理,本研究利用氯化铵、利巴韦林、免疫阳性血清和低剂量病毒处理O型FMDV(CATHAY株)和BHK21细胞建立持续感染细胞系,采用RT-PCR、核酸测序、IFA和Western-blot方法筛选和验证持续感染细胞模型。结果显示,除了低剂量病毒感染方法能连续传代,且从第5~20代次细胞中扩增到与亲代毒株高度同源的FMDV VP1基因,并能检测到VP1蛋白外,其他方法由于对细胞具有明显毒性作用,未能建立持续感染细胞模型。笔者认为化学药物可能不适合所选病毒毒株建立持续感染模型,而利用低剂量病毒法建立FMDV持续感染细胞系是一种简单可行的方法。上述结果表明,本研究成功建立了FMDV持续感染BHK21细胞模型,这为研究FMDV与宿主的互作关系,阐明FMDV持续感染机理奠定了重要的理论基础。

关键词：口蹄疫病毒持续感染细胞系 BHK21 利巴韦林氯化铵免疫阳性血清

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弓形虫4个假定蛋白基因缺失株的构建及其基本生物功能学研究

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畜牧兽医学报 2022年第10期53卷 3598-3608页

作者：王沛王萌李婷婷郑晓楠梁勤立陈小庆江西农业大学动物科学技术学院江西省动物疫病诊断与防控重点实验室南昌330045 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046

旨在探究4个与MIC相关的假定蛋白在弓形虫速殖子阶段的作用及基因缺失对毒力的影响。在线设计TGME49_222975、TGME49_275798、TGME49_238220和TGME49_238210的sgRNA序列,用PCR将pSAG1::CAS9-U6::sgUPRT模板上的sgUPRT突变为相应的sgRNA,获得目的基因的CRISPR质粒。将获得的目的基因质粒和DHFR片段混合后电转入弓形虫速殖子,经乙胺嘧啶单克隆筛选后,PCR鉴定成功即得目的基因缺失株。再用目的基因缺失株和RH野生株进行复制、逸出、噬斑和小鼠毒力试验,比较二者各项试验结果,以评定目的基因对于弓形虫速殖子功能和毒力的影响。结果显示:目的基因缺失株和野生株RH在相同时间内形成的含有1、2、4、8、16个速殖子的纳虫空泡数占比差异不显著(P>0.05),纳虫空泡内速殖子在钙离子刺激下2 min内均可全部逸出,相同条件和时间培养形成的噬斑大小和面积差异不显著(P>0.05),接种相同数目速殖子的小鼠自开始死亡到全部死亡时间差别不显著(P>0.05)。本研究成功构建了4个弓形虫MIC相关基因的缺失株(RHΔTGME49_222975、RHΔTGME49_275798、RHΔTGME49_238200和RHΔTGME49_238210),但毒力与野生株毒力均差异不显著,说明这4个基因均不是弓形虫的重要“独立”毒力因子,但可能在其他方面发挥着重要的生物学功能。本研究初步解析了4个弓形虫MIC相关蛋白的基本生物学功能,为后期全面解析弓形虫蛋白功能提供数据。

关键词：弓形虫微线体蛋白 CRISPR/Cas9 基因敲除

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K亚群禽白血病病毒的分离鉴定及RPA-LFD快速检测方法的建立与应用

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中国家禽 2025年

作者：喻华英曾婷婷杨宗维王粲牙侯勋万丽君罗思思李孟谢芝勋于美玲谢丽基广西大学动物科学技术学院广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室桂林力源粮油食品集团有限公司

为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K）检测需求，研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条（Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD）的ALV-K快速检测方法。试验首先通过细胞培养分离鉴定出一株ALV-K，并以此分离株的前病毒DNA作为建立检测方法的模板；其次，针对ALV-K gp85基因保守位置设计引物和探针，优化反应体系的引物浓度、探针浓度和反应温度，在此基础上进行敏感性预试验并以预试验检测限优化反应时间；最后，以优化反应时间进行敏感性试验、稳定性试验及特异性试验。结果显示：建立的ALV-K RPA-LFD反应体系在引物浓度为0.45 mmol/L，探针浓度为0.14 mmol/L,39℃条件下反应21 min，其检测限为4.86×10～2 copies/反应的ALV-K DNA，并且不与其他常见禽类病原体核酸发生非特异扩增反应；30份临床病料中有14份ALV-K阳性，与单重PCR方法结果一致。研究表明，建立的ALV-K RPA-LFD检测方法具有快速、特异、操作简单，不需要复杂仪器，能够直观地观察结果的优点，适用于临床快速检测ALV-K，特别是实验室条件有限的检测场景。

关键词：家禽 K亚群禽白血病病毒重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条快速检测

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O型口蹄疫病毒3D突变毒株的构建及其生物学特性分析

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中国兽医科学 2025年

作者：朱兆宇范许许裴丹诗王一卓何路李熙忠任青峰郑海学李伟伟郜原甘肃农业大学生命科学技术学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室河南农业大学动物医学院

本研究利用反向遗传技术构建O型口蹄疫病毒（FMDV）3D蛋白突变毒株rFMDV-M403A，并分析了其生物学特征。结果表明，重组病毒在传代过程中氨基酸能稳定突变；病毒滴度显示，突变毒株生长速度较野生毒株有所降低，重组病毒毒力显著低于野... 详细信息

本研究利用反向遗传技术构建O型口蹄疫病毒（FMDV）3D蛋白突变毒株rFMDV-M403A，并分析了其生物学特征。结果表明，重组病毒在传代过程中氨基酸能稳定突变；病毒滴度显示，突变毒株生长速度较野生毒株有所降低，重组病毒毒力显著低于野生毒株；乳鼠感染试验结果显示，突变毒株会使乳鼠存活率提高，肝中病毒载量和组织病变显著降低。该研究对口蹄疫病毒致病机理的认识及制定防控措施具有重要意义，同时，也为后续开发口蹄疫基因工程疫苗奠定了坚实的理论基础。

关键词： O型口蹄疫病毒反向遗传操作 3D蛋白突变生物学特性

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植物天然产物抑制细菌脲酶活性的研究进展

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动物营养学报 2021年第3期33卷 1306-1317页

作者：张震宇赵圣国郑楠王加启中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部奶及奶制品质量安全控制重点实验室北京100193

反刍动物瘤胃中细菌脲酶活性强,导致氨的释放速率过快,影响微生物蛋白合成效率,进而影响反刍动物对微生物蛋白的利用。瘤胃中过量的氨经瘤胃壁吸收入血,造成反刍动物血液pH的改变,引起动物氨中毒。经瘤胃壁吸收的氨在肝脏中重新合成尿素... 详细信息

反刍动物瘤胃中细菌脲酶活性强,导致氨的释放速率过快,影响微生物蛋白合成效率,进而影响反刍动物对微生物蛋白的利用。瘤胃中过量的氨经瘤胃壁吸收入血,造成反刍动物血液pH的改变,引起动物氨中毒。经瘤胃壁吸收的氨在肝脏中重新合成尿素,其中一部分尿素被动物排出,对环境造成污染。因此,开发脲酶抑制剂对于饲料利用、动物生产以及环境保护均具有重要意义。植物天然产物是低生物毒性、副作用小的脲酶抑制剂的理想来源之一。近年来,研究发现了一系列具有脲酶抑制作用的植物天然产物。通过构效关系解析,这些植物天然产物化合物极大地丰富了具有脲酶抑制活性的化学骨架结构。本文对具有脲酶抑制活性的植物天然产物化合物进行了分类综述,探讨了不同类别的脲酶抑制剂的构效关系与抑制模式,旨在为开发新型脲酶抑制剂提供参考。

关键词：脲酶抑制剂植物天然产物非蛋白氮脲酶

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放牧祁连牦牛屠宰性能及不同肌肉组织营养特性研究

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中国草食动物科学 2024年

作者：何文斌扎西塔秦玉峰马金保赵敏慧孔祥颖胡林云梁春年中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省牦牛繁育工程重点实验室农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室祁连县畜牧兽医站海北藏族自治州农牧综合服务中心中国科学院西北高原生物研究所

为揭示祁连牦牛的屠宰性能和肉质特性，选择成年祁连牦牛公、母各5头进行屠宰试验，采取祁连牦牛的股二头肌、臂三头肌、背最长肌部位的分割肉，测定营养成分、氨基酸和脂肪酸。并与文献中已报道的肃南牦牛、环湖牦牛、雪多牦牛和查吾... 详细信息

为揭示祁连牦牛的屠宰性能和肉质特性，选择成年祁连牦牛公、母各5头进行屠宰试验，采取祁连牦牛的股二头肌、臂三头肌、背最长肌部位的分割肉，测定营养成分、氨基酸和脂肪酸。并与文献中已报道的肃南牦牛、环湖牦牛、雪多牦牛和查吾拉牦牛进行了对比分析。结果表明，成年祁连牦牛公牛的胴体重为151.20 kg，母牛为112.20 kg，公牛的活重、胴体重和眼肌面积分别比母牛高29.94%、34.76% 和35.04%。祁连牦牛公、母牛的眼肌面积均高于环湖牦牛、雪多牦牛、肃南牦牛和查吾拉牦牛。祁连牦牛股二头肌、臂三头肌、背最长肌的必需氨基酸与氨基酸总量的比值（EAA/TAA）均为0.39；必需氨基酸与非必需氨基酸的比值（EAA/NEAA）分别为0.63、0.64、0.65；多不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比值（P:S）分别为1.19、1.18、0.86，符合WHO推荐值；表明祁连牦牛肉的氨基酸、脂肪酸含量均衡。呈味氨基酸占比分析显示，祁连牦牛的背最长肌鲜味氨基酸占比最高，为26.80%。综上，祁连牦牛具有优良的肉用性能及遗传选育潜力，背最长肌风味浓郁，更具食用价值。

关键词：祁连牦牛屠宰性能氨基酸脂肪酸

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CRISPR/Cas9介导的RPSA基因敲除细胞系的建立及其应用

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微生物学报 2021年第7期61卷 1945-1956页

作者：高利利王聪聪杨帆曹伟军张向乐刘湘涛朱紫祥郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

【目的】利用CRISPR/Cas9技术建立RPSA基因缺失的乳仓鼠肾细胞(baby hamster kidney cells,BHK21)细胞系,为开展RPSA调控病毒复制机制研究提供工具;同时,初步探究RPSA对塞内卡病毒复制的影响。【方法】根据GenBank中仓鼠的RPSA基因序列... 详细信息

【目的】利用CRISPR/Cas9技术建立RPSA基因缺失的乳仓鼠肾细胞(baby hamster kidney cells,BHK21)细胞系,为开展RPSA调控病毒复制机制研究提供工具;同时,初步探究RPSA对塞内卡病毒复制的影响。【方法】根据GenBank中仓鼠的RPSA基因序列找到产生不同转录本的共同外显子段,设计并合成4对引导RNA(sgRNA),分别构建至PX330载体中;经过筛选选择打靶活性较高的PX330-RPSA-sgRNA2质粒用于后续敲除细胞系构建。将PX330-RPSA-sgRNA2质粒转染BHK21细胞后,通过有限稀释法筛选单克隆细胞,通过Western blot及序列测定检测RPSA基因的敲除。通过Western blot及qPCR分析比较塞内卡病毒在野生型及RPSA基因敲除BHK21细胞中的复制差异。【结果】Western blot检测及序列测序证实了RPSA基因敲除单克隆细胞构建成功。进一步研究发现,塞内卡病毒在RPSA基因敲除细胞中的复制水平明显低于其在野生型BHK21细胞中复制的水平。【结论】成功构建了RPSA基因敲除的BHK21细胞系,首次表明RPSA对塞内卡病毒的复制具有重要作用,为进一步开展RPSA在细胞内调控病毒复制机制研究奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 RPSA 基因缺失细胞塞内卡病毒

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