检索结果-内蒙古大学图书馆

实验动物与比较医学 2024年

作者：刘园园辛文水晁哲曹宗喜蔡艺菲李强李凌伟刘光亮新疆农业大学动物医学学院海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所

目的获得五指山猪MHC II类分子基因序列并分析其相关遗传信息，探究五指山猪MHC复合体的生物学功能。方法采集3头成年雄性五指山猪的脾脏样本，根据MHC II类分子基因序列设计引物，采用RT-PCR扩增五指山猪MHC II类分子基因序列，通过S... 详细信息

目的获得五指山猪MHC II类分子基因序列并分析其相关遗传信息，探究五指山猪MHC复合体的生物学功能。方法采集3头成年雄性五指山猪的脾脏样本，根据MHC II类分子基因序列设计引物，采用RT-PCR扩增五指山猪MHC II类分子基因序列，通过Sanger测序确定MHC II类分子基因序列，利用生物信息学软件分析五指山猪MHC II类分子基因的理化性质、系统进化关系、保守结构域、Motif以及染色体位置。结果共鉴定出8个五指山猪MHC II类分子基因，分别为SLA-DRA、SLA-DQA、SLA-DQB、SLA-DRB、SLA-DOB、SLA-DMB、SLA-DMA和SLA-DOA。采用Sanger测序确定MHC II类分子基因序列并将序列上传至GenBank获得登录号，分别为PQ182796、PQ182797、PQ182798、PQ182799、PQ182800、PQ182801、PQ182802和PQ164779。8个MHC II类分子基因不均匀地分布在五指山猪的7号染色体上。生物信息学分析表明，MHC II类分子大部分为疏水性蛋白，其相对分子量范围在27 700～30 000之间，归于同一类的基因含有相似的保守Motif，其中4个MHC II类分子包含MHC＿II＿beta保守结构域，4个MHC II类分子包含MHC＿II＿alpha保守结构域。系统进化分析表明，五指山猪6个MHC II类分子基因与杜洛克猪、梅山猪、大白猪、巴马猪等不同品种猪的MHC II类分子基因不在同一个分支上，五指山猪MHC II类分子基因可能具有一定的多样性。结论成功获得五指山猪MHC II类分子基因序列信息，并全面分析了MHC II类分子基因的理化性质。为五指山猪的免疫研究提供了基础数据，为疫苗开发和疾病防治提供了新思路，为构建疾病模型，探索基因编辑技术在提高五指山猪健康和生产性能中的应用提供基础理论依据。

关键词：五指山猪主要组织相容性复合体生物信息学

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猪嵴病毒结构蛋白VP0与VP1原核表达及间接ELISA方法的建立

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生物技术通报 2022年第10期38卷 243-253页

作者：沈俊强张莉萍于瑞明王永录潘丽刘霞刘新生甘肃农业大学生命科学技术学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730064

分别建立基于猪嵴病毒(PKV)结构蛋白VP0与VP1的间接ELISA检测方法。对PKV结构蛋白VP0与VP1的基因进行合成并连接至原核表达载体pET-32a后,转入感受态细胞BL21中,用IPTG诱导表达的重组蛋白经Ni柱纯化后,分别以重组蛋白pET-32a-VP0与pET-3... 详细信息

分别建立基于猪嵴病毒(PKV)结构蛋白VP0与VP1的间接ELISA检测方法。对PKV结构蛋白VP0与VP1的基因进行合成并连接至原核表达载体pET-32a后,转入感受态细胞BL21中,用IPTG诱导表达的重组蛋白经Ni柱纯化后,分别以重组蛋白pET-32a-VP0与pET-32a-VP1作为包被抗原,采用棋盘滴定法建立两种间接ELISA检测方法,并进行重复性、敏感性、特异性实验和临床检测。结果显示重组蛋白pET-32a-VP0与pET-32a-VP1抗原的最佳包被浓度分别为2 mg/mL和2.5 mg/mL,反应条件均为37℃、1 h;封闭液最佳条件为5%脱脂乳,37℃、2 h;血清最佳孵育条件为1∶200,37℃、1 h;二抗最佳孵育条件分别为1∶20000和1∶15000,37℃、1 h;最佳显色时间为10 min,两种间接ELISA检测方法临界值分别为0.306和0.277。试验结果表明本研究成功建立了能够有效检测PKV血清特异性抗体的间接ELISA方法,且方法具有重复性好、敏感性高、特异性强、稳定性好等特点,对今后PKV的临床诊断及抗体检测试剂盒的开发奠定了重要基础。

关键词：猪嵴病毒 VP0 VP1 原核表达间接ELISA

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重组表达凋亡素的减毒单增李斯特菌的构建及其对B16F10肿瘤细胞活力的影响

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中国兽医科学 2023年第7期53卷 911-918页

作者：张昊恺孙奇娟许凤茹张春杰余祖华廖成水李静丁轲王少辉贾艳艳洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南洛阳471003 河南科技大学功能微生物与畜禽健康实验室河南洛阳471003 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

构建1株能够表达凋亡素的重组减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM),并探究其对B16F10小鼠黑色素瘤细胞增殖活力的影响。利用同源重组技术将凋亡素编码序列定点整合至单增李斯特菌hly基因信号肽下游,用RT-PCR及Western-blot方... 详细信息

构建1株能够表达凋亡素的重组减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM),并探究其对B16F10小鼠黑色素瘤细胞增殖活力的影响。利用同源重组技术将凋亡素编码序列定点整合至单增李斯特菌hly基因信号肽下游,用RT-PCR及Western-blot方法验证重组菌株LMΔhly::apoptin中凋亡素的转录与表达,最后测定重组菌株的生物学特性,并通过CCK-8及荧光显微镜探究了重组菌株对B16F10细胞增殖活力及凋亡水平的影响。RT-PCR及Western-blot结果表明,该重组菌株能够转录并分泌表达具有免疫反应性的凋亡素。重组菌株对B16F10细胞的侵袭率为5.11%±0.56%,显著低于野生株对B16F10细胞的侵袭率(19.17%±4.83%)(P<0.05),但具有较好的胞内增殖能力,且在B16F10细胞内能检测到凋亡素的表达。CCK-8结果表明重组菌株能够显著抑制B16F10细胞的增殖,经荧光染色观察到重组菌株可诱导B16F10肿瘤细胞凋亡。本研究成功构建了表达凋亡素的重组减毒单增李斯特菌,其能够侵袭B16F10细胞并在细胞内增殖,且能在B16F10细胞中有效表达凋亡素。该重组菌株通过促进B16F10细胞凋亡而抑制B16F10细胞的增殖。以上研究为开发新型单增李斯特菌活载体肿瘤疫苗奠定了基础。

关键词：凋亡素单增李斯特菌同源重组凋亡抗肿瘤

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西藏桑桑牦牛CXCR2基因克隆及生物信息学分析

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中国草食动物科学 2024年第5期44卷 57-63页

作者：申金伟洛桑顿珠平措占堆卓玛次仁尼玛加措成述儒梁春年中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省牦牛繁育工程重点实验室兰州730050 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730050 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所拉萨850004 日喀则市昂仁县农业农村局昂仁857001 农业农村部青藏高原畜禽遗传育种重点实验室兰州730050

为了研究牦牛CXCR2基因的结构、生物学功能及影响牦牛生长发育的机制,以西藏桑桑牦牛脂肪组织cDNA为模板,利用RT-PCR克隆牦牛CXCR2基因的编码区序列(Coding sequence,CDS),并对其进行生物信息学分析、结构域预测及蛋白理化性质预测,利用... 详细信息

为了研究牦牛CXCR2基因的结构、生物学功能及影响牦牛生长发育的机制,以西藏桑桑牦牛脂肪组织cDNA为模板,利用RT-PCR克隆牦牛CXCR2基因的编码区序列(Coding sequence,CDS),并对其进行生物信息学分析、结构域预测及蛋白理化性质预测,利用RT-qPCR技术进行组织表达分析。结果表明,桑桑牦牛CXCR2基因的CDS区全长876 bp,共编码291个氨基酸;结构域预测结果显示,在CXCR2氨基酸序列的1~245位有1个Pfam家族的7tm_1结构域;CXCR2蛋白分析预测结果显示,该蛋白有5个跨膜结构,无信号肽区域,分子量32855.55 Da,原子总数4726个,分子式为C_(1524)H_(2416)N_(392)O_(374)S_(20),不稳定性指数29.45,表明该蛋白质为稳定蛋白,理论等电点9.86,脂肪系数120.27,总平均亲水系数-0.657,为疏水性蛋白,共有21个磷酸化位点;亚细胞定位预测结果显示,桑桑牦牛CXCR2基因主要分布于内质网(55.6%)、线粒体(22.2%)和细胞核(22.2%)中;系统进化树结果显示,桑桑牦牛与瘤牛亲缘关系最近,与水牛亲缘关系最远。

关键词：桑桑牦牛 CXCR2基因克隆生物信息学分析

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井冈山地区莲鱼复合种养模式效益评价

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水生生物学报 2022年第7期46卷 983-994页

作者：米湘媛张朝硕张晓娟王海华郭小泽李思明赵大显洪一江段明中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072 中国科学院大学北京100049 江西省水产科学研究所南昌330039 江西省农业科学院畜牧兽医研究所南昌330200 南昌大学南昌330047

为研究莲鱼复合种养生态系统中的浮游植物群落特征,及该养殖模式的经济和生态效益,2019年春季至秋季,对江西井冈山地区莲鱼种养、莲单种和鱼单养3种种养模式的水质及浮游生物开展了季节调查,结合当地生产经营,分析了不同种养模式的经济... 详细信息

为研究莲鱼复合种养生态系统中的浮游植物群落特征,及该养殖模式的经济和生态效益,2019年春季至秋季,对江西井冈山地区莲鱼种养、莲单种和鱼单养3种种养模式的水质及浮游生物开展了季节调查,结合当地生产经营,分析了不同种养模式的经济效益及生态足迹。研究表明,(1)共鉴定出浮游植物7门103种,其中绿藻56种,蓝藻21种,硅藻16种,裸藻3种,隐藻4种,金藻2种,黄藻1种。复合种养模式水体的水质均处于轻污染-无污染状态,优于单种和单养模式,且优势种存在季节性差异。(2)冗余分析表明,水温和溶解氧是影响莲鱼复合种养生态系统浮游植物群落结构的关键环境因子,总磷(鱼单养模式的主要影响因子)和硝酸氮(莲单养模式的主要影响因子)并不是影响该复合种养模式中浮游植物群落的主要环境因子。(3)莲鱼复合种养经济效益为25200元/公顷,介于鱼单养和莲单种模式之间,但其产生每万元利润的生态足迹最低,为4.48 hm2,是鱼单养模式的80.9%,莲单种的33.2%。江西井冈山地区的莲鱼复合种养模式是一种高效益、低生态负荷的综合种养模式,适宜在当地大面积推广。

关键词：莲鱼复合种养浮游植物群落特征营养状态生态足迹

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弓形虫sod3基因缺失株的构建及其基本生物学功能研究

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中国兽医科学 2022年第7期52卷 882-891页

作者：赵丹钰李婷婷王萌祁淑芸梁勤立张芝玮朱兴全王金磊中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 山西农业大学动物医学学院山西太谷030801

超氧化物歧化酶(SOD)是一种重要的抗氧化酶,参与一系列重要的细胞过程,可保护机体免受氧化损伤,在寄生虫氧化还原平衡调节中发挥重要作用。本研究利用CRISPR-Cas9介导的同源重组技术,分别构建了弓形虫Ⅰ型RH虫株和Ⅱ型Pru虫株的sod3基... 详细信息

超氧化物歧化酶(SOD)是一种重要的抗氧化酶,参与一系列重要的细胞过程,可保护机体免受氧化损伤,在寄生虫氧化还原平衡调节中发挥重要作用。本研究利用CRISPR-Cas9介导的同源重组技术,分别构建了弓形虫Ⅰ型RH虫株和Ⅱ型Pru虫株的sod3基因缺失株(RHΔsod3;PruΔsod3);通过体内和体外试验,探究了sod3基因的基本生物学功能及其在小鼠体内的毒力作用。噬斑试验分析表明,RHΔsod3和PruΔsod3所形成噬斑的大小和数量与野生株相比无显著差异(P>0.05)。研究发现缺失sod3基因不影响弓形虫RH速殖子在体外的入侵效率、细胞内复制能力、逸出能力、活性氧(ROS)水平、总抗氧化能力(T-AOC)。缓殖子转化试验发现,缺失sod3基因不影响弓形虫Pru虫株由速殖子向缓殖子转化。小鼠毒力试验表明,分别单独感染100个RHΔsod3和RH野生株速殖子的昆明鼠均在感染后第8~10天发生死亡;分别单独感染5×105个PruΔsod3和Pru野生株速殖子的昆明鼠均在感染后10 d内发生死亡;分别单独感染5×103个PruΔsod3和Pru野生株速殖子的昆明鼠所形成的脑包囊数量无显著差异(P>0.05)。对弓形虫转录组数据库现有数据分析表明,SOD3在弓形虫孢子化卵囊阶段的表达量显著高于其他时期,说明SOD3可能参与卵囊孢子化过程。本研究成功构建了弓形虫sod3基因缺失株(RHΔsod3;PruΔsod3),为进一步研究sod3基因在Ⅰ型和Ⅱ型虫株的其他生物学功能奠定了基础。

关键词：弓形虫氧化应激超氧化物歧化酶(SOD) CRISPR-Cas9 生物学功能

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DNA损伤修复酶OGG1/MTH1抑制剂对非洲猪瘟病毒复制的影响

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生物工程学报 2024年第7期40卷 2136-2149页

作者：张小强樊洁杨吉飞付竞生吴梦丽邵程祥关贵全殷宏刘志杰牛庆丽中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家非洲猪瘟区域实验室(兰州) 甘肃兰州730046 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 西北民族大学基础医学院甘肃兰州730030

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种动物疫病。2018年传入我国后迅速波及国内多个省份,给我国养猪业带来了巨大的冲击。由于对ASFV致病机制了解有限,导致ASF疫苗及抗病毒药... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种动物疫病。2018年传入我国后迅速波及国内多个省份,给我国养猪业带来了巨大的冲击。由于对ASFV致病机制了解有限,导致ASF疫苗及抗病毒药物的研发遇到了极大挑战。本课题组前期研究发现,ASFV感染能引起宿主细胞内的氧化损伤应答,并且DNA氧化损伤修复酶在ASFV的感染中发挥重要作用,因此本研究采用RNA干扰、RT-q PCR、Western blotting、红细胞吸附(hemadsorption,HAD)、流式细胞技术等生物学方法,验证8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(8-oxoguanine DNA glycosylase 1,OGG1)/8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶1(8-oxoguanine nucleoside triphos-phatase,MTH1)小分子抑制剂对ASFV复制的影响,以评估靶向DNA氧化损伤修复酶的抗ASFV感染效果。本研究为抗非洲猪瘟药物的研发提供了借鉴及参考。

关键词：非洲猪瘟抗病毒药物碱基切除修复 8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1) 8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶1(MTH1)

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一株金黄色葡萄球菌噬菌体的分离鉴定与生物学特性

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微生物学通报 2021年第4期48卷 1171-1181页

作者：葛志毅韩生义曹小安周建华刘婷婷刘永生李学瑞中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

【背景】金黄色葡萄球菌作为一种条件致病菌,在临床感染中扮演着重要的角色,需要研究更多更有效的防治手段。【目的】分离金黄色葡萄球菌噬菌体,研究其生物学特性,从而为金黄色葡萄球菌的替代防治提供理论借鉴。【方法】以金黄色葡萄球... 详细信息

【背景】金黄色葡萄球菌作为一种条件致病菌,在临床感染中扮演着重要的角色,需要研究更多更有效的防治手段。【目的】分离金黄色葡萄球菌噬菌体,研究其生物学特性,从而为金黄色葡萄球菌的替代防治提供理论借鉴。【方法】以金黄色葡萄球菌D085为宿主从污水中分离得到一株噬菌体,命名为v BSau SSAP3,用PEG8000浓缩、氯化铯密度梯度离心获得高纯度的噬菌体,1%乙酸双氧铀染色噬菌体进行电镜观察。测定噬菌体宿主谱、最佳感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)、一步生长曲线、热稳定性、pH值稳定性及有机溶剂对噬菌体活性的影响。平衡酚法获取噬菌体基因组,Illumina测序技术和SPAdes软件进行基因组测序分析。【结果】电镜下,噬菌体SAP3头部直径为60±5 nm,尾部长170±5 nm。噬菌体vBSauSSAP3还能裂解5株金黄色葡萄球菌和1株产色葡萄球菌,其最佳感染复数为0.1。噬菌体vBSauSSAP3潜伏期为20 min,60 min后进入平台期,裂解量约为210 PFU/cell;对45°C以下温度有一定耐受性,超过45°C开始急剧失活;能在中性pH值时保持稳定活性,酸性环境会使其急剧失活,对碱性环境有一定的抵抗力;对氯仿和异戊醇不耐受。其基因组分析结果表明:噬菌体基因组大小为41950bp,GC含量为35.42%,预测有65个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)。进化分析表明,噬菌体vBSauSSAP3属于长尾科噬菌体,是一种新型的噬菌体。【结论】噬菌体vBSauSSAP3是一株窄谱的能够耐受一定温度和碱性环境的长尾科新型噬菌体,对其研究可为金黄色葡萄球菌噬菌体的研究提供理论材料。

关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体生物学特性基因组分析

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抗非洲猪瘟病毒单链抗体的构建、表达及活性鉴定

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畜牧兽医学报 2021年第5期52卷 1328-1336页

作者：王丽娟石正旺杨波麻园罗俊聪万颖宋锐田宏郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室兰州730046

制备抗非洲猪瘟病毒(ASFV)猪源单链抗体(ScFv),并对其生物学活性进行鉴定,筛选出具有ASFV反应活性的猪源单链抗体(ScFv),为ASFV的诊断提供新的材料。采集ASFV感染康复猪的外周血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,以此为模板通过PCR扩增... 详细信息

制备抗非洲猪瘟病毒(ASFV)猪源单链抗体(ScFv),并对其生物学活性进行鉴定,筛选出具有ASFV反应活性的猪源单链抗体(ScFv),为ASFV的诊断提供新的材料。采集ASFV感染康复猪的外周血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,以此为模板通过PCR扩增得到猪源IgG重链可变区与轻链可变区基因,利用SOE-PCR技术扩增拼接得到猪源ScFv基因;构建pET-30a-ScFv表达载体,进行蛋白的表达与纯化,用ELISA和IFA鉴定ScFv抗体的反应活性。结果显示,成功扩增出猪源ScFv(VH-VLκ、VH-VLλ)基因,鉴定到1株与ASFV存在反应活性的ScFv(VH-VLλ_(11))抗体。结果表明,成功筛选到1株与ASFV存在反应活性的ScFv(VH-VLλ_(11))抗体,为ASFV诊断和防控提供了新型原材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 SOE-PCR 单链抗体诊断与防控

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基因Ⅰ型日本脑炎病毒NS1蛋白的多克隆抗体制备及鉴定

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中国兽医科学 2025年第1期55卷 26-32页

作者：柴风雪田占成杨吉飞张鸿歌牛庆丽独军政关贵全殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由三带喙库蚊媒介传播的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染引起的,临床表现以神经症状为主。NS1蛋白作为JEV编码的非结构蛋白,能够诱导机体产生非中和作用的保护性抗体,是JE诊断... 详细信息

乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由三带喙库蚊媒介传播的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染引起的,临床表现以神经症状为主。NS1蛋白作为JEV编码的非结构蛋白,能够诱导机体产生非中和作用的保护性抗体,是JE诊断和疫苗研发的主要靶标。本研究以基因Ⅰ型JEV的NS1蛋白为靶标,将构建的重组质粒p ET30a-His-NS1转化Rosetta(DE3)表达菌,以0.5 mmol/L IPTG诱导表达。结果显示,与预期蛋白分子量大小一致的重组NS1蛋白以包涵体形式表达。经亲和层析柱纯化获得浓度为2.568 mg/mL的重组His-NS1蛋白。免疫印迹和间接免疫荧光结果表明,制备的高效价抗NS1蛋白多克隆抗体能够特异性识别蛋白分子量分别为46和55 ku的天然NS1蛋白。此外,本研究首次发现制备的抗NS1蛋白多克隆抗体与JEV预孵育能够剂量依赖性的显著降低JEV感染BHK-21细胞的病毒产量。将抗NS1蛋白多克隆抗体作为免疫沉淀抗体,用于JEV感染PK-15细胞的免疫沉淀质谱分析。结果表明,NS1蛋白能够与囊膜E蛋白相互作用。总之,本研究为深入了解NS1蛋白的生物学功能、JE诊断方法的建立和疫苗研制提供了基础材料。

关键词：日本脑炎病毒 NS1蛋白多克隆抗体制备鉴定

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