检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2011年第2期6卷 97-100,F0003页

作者：阮洋秦峻岭高玉伟黄海楠孙玮杨松涛王承宇王铁成黄耕王志亮夏咸柱吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林大学畜牧兽医学院中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心

目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因真核表达载体,并对其表达能力及免疫活性进行鉴定,为后期疫苗的研制提供基础。方法根据GenBank上公布的PPRV(China/Tib/Gej/07-30株)H基因的序列进行引物设计并进行扩增,纯化回收后将其克隆到pMD-18T... 详细信息

目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因真核表达载体,并对其表达能力及免疫活性进行鉴定,为后期疫苗的研制提供基础。方法根据GenBank上公布的PPRV(China/Tib/Gej/07-30株)H基因的序列进行引物设计并进行扩增,纯化回收后将其克隆到pMD-18T载体中,将测序鉴定正确的目的基因克隆到真核表达载体pCAGGS上。结果成功构建了含有PPRV H基因的真核表达载体pCAGGS-H。通过脂质体介导质粒pCAGGS-H转染DK细胞,经间接免疫荧光及Western blot证实,表达蛋白分子质量单位为68.8 ku,能与PPRV阳性血清发生特异性反应。结论 pCAGGS-H在真核细胞内可有效表达。

关键词：小反刍兽疫 H基因 pCAGGS真核表达载体转染 Western blot

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阿苯达唑控释塑囊的研制

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中国兽医科学 2010年第9期40卷 959-963页

作者：骆学农景志忠黄振家王佩雅窦永喜陈涓才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

以阿苯达唑为主料,选择药用淀粉、十八酸、羧甲基纤维素钠等作为辅料或疏性剂,以一定比例配制并压制成缓释药片,组装成以弹簧作为动力装置的控释塑囊。经实验室及野外扩大试验证实,该塑囊不仅能100%驱除羊胃肠道线虫,而且能预防再感染达... 详细信息

以阿苯达唑为主料,选择药用淀粉、十八酸、羧甲基纤维素钠等作为辅料或疏性剂,以一定比例配制并压制成缓释药片,组装成以弹簧作为动力装置的控释塑囊。经实验室及野外扩大试验证实,该塑囊不仅能100%驱除羊胃肠道线虫,而且能预防再感染达90d以上。与普通阿苯达唑片剂相比,一次用药的药效持续期延长2个月以上,在甘肃环县实施的以控释和缓释技术为核心的综合防控模式研究中,每只羊能提高经济效益分别达30.75元和25.50元,完全达到了预期的设计要求。

关键词：阿苯达唑控释塑囊胃肠道线虫驱虫效果

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鸭肠炎病毒囊膜蛋白gB和gC主要抗原域的原核表达与鉴定

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中国家禽 2011年第2期34卷 22-25,28页

作者：张小荣董广阔成大荣朱善元吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏省畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300

根据GenBank中已经发表的鸭肠炎病毒(DEV)基因组序列,在抗原性分析的基础上,设计5对引物,以DEV标准强毒株DPV-F37基因组DNA作为模板分别扩增DEVgB基因主要抗原域编码区(328～552nt、667～1164nt和1519～1797nt)和gC基因主要抗原域编码区... 详细信息

根据GenBank中已经发表的鸭肠炎病毒(DEV)基因组序列,在抗原性分析的基础上,设计5对引物,以DEV标准强毒株DPV-F37基因组DNA作为模板分别扩增DEVgB基因主要抗原域编码区(328～552nt、667～1164nt和1519～1797nt)和gC基因主要抗原域编码区(67～402nt和472～837nt)。将目的片段克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-gB1、pGEX-6P1-gB2、pGEX-6P1-gB3、pGEX-6P1-gC1和pGEX-6P1-gC2。将重组表达载体转化至BL21宿主菌,经IPTG诱导,外源基因获得了良好表达,融合蛋白大小分别为35、45、37、38和40ku左右。以兔抗DEV多抗血清进行Western blot分析,抗血清与表达的5种融合蛋白均能发生特异性反应。结果提示所有表达出的目的蛋白均具有与天然蛋白相似的反应原性。

关键词：鸭肠炎病毒 gB基因 gC基因原核表达

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小反刍兽疫病毒N基因重组杆状病毒的构建及间接ELISA抗体检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2010年第9期41卷 1147-1153页

作者：李伟李刚吴晓东邱文英张坤 Hermann Unger 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物分子营养学国家重点实验室北京100193 中国动物卫生与流行病学中心外来病诊断中心青岛266032 FAO/IAEA农业生物技术实验室

本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法。利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化***10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacmid-PP... 详细信息

本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法。利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化***10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacmid-PPRV-V,转染昆虫细胞Sf21,获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出60ku左右的表达蛋白,Western blot检测该蛋白具有很好的反应原性。以重组Bacmid-PPRV-N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。临床检测来自西藏疫区的37份山羊血清和来自青海省非疫区的92份山羊血清,与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心(CIRAD-EMVT)提供的竞争ELISA试剂盒相比较,特异性为96.2%,敏感性为100%,二者的符合率达到96.9%。结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。

关键词：小反刍兽疫病毒杆状病毒昆虫细胞间接ELISA

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宏基因组学方法分析奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性

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中国农业大学学报 2010年第1期15卷 55-61页

作者：赵圣国王加启刘开朗李旦于萍中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室北京100193 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070

利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物PCR扩增并测序,揭示奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性。提取本研究室前期鉴定的16个脲酶克隆的质粒,利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到pMD19-T载体... 详细信息

利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物PCR扩增并测序,揭示奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性。提取本研究室前期鉴定的16个脲酶克隆的质粒,利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到pMD19-T载体,转化***109,挑取阳性克隆测序。利用Blast程序将序列与GenBank和RDP数据库进行比对,并使用Mega 4.0软件构建系统发育树。4个脲酶克隆含有脲酶保守序列ureC,系统发育树分析表明,U1、U5、U13和U15分别属于Firmicutes、ε-Proteobacteria、β-Proteobacteria和Actinobacteria;7个脲酶克隆含有16S rDNA,经过建树分析,U1、U3、U7、U10、U11、U12和U14分别属于Staphylococcus、Shigella、Bacillus、Acinetobacter、Achromobacter、未培养微生物和Bacillales。实验结果显示,奶牛瘤胃微生物脲酶基因和尿素分解菌具有多样性的特点。

关键词：脲酶尿素分解菌多样性宏基因组学 16S rDNA ureC

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羊口疮病毒F1L基因的克隆及其B细胞表位预测

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中国兽医科学 2010年第11期40卷 1101-1105页

作者：吉艳红尚佑军王光祥尹双辉刘艳红刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家121蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为了研究羊口疮病毒(ORFV)F1L基因,以该病毒基因组DNA为模板,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增得到1011bp的F1L基因,将其插入pMD18-TEasy克隆载体,构建了F1L基因克隆重组质粒;再将该基因片段插入pGEX-6P-1表达载体,通过PCR、限制性内切酶双... 详细信息

为了研究羊口疮病毒(ORFV)F1L基因,以该病毒基因组DNA为模板,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增得到1011bp的F1L基因,将其插入pMD18-TEasy克隆载体,构建了F1L基因克隆重组质粒;再将该基因片段插入pGEX-6P-1表达载体,通过PCR、限制性内切酶双酶切和测序鉴定,得到F1L基因插入方向和读码框结构均正确的阳性质粒,表明,成功构建了羊口疮病毒F1L基因的重组表达载体。通过对F1L基因序列进行生物信息学分析,预测发现F1L蛋白亲水、无信号肽,B细胞表位主要位于第4～8位、第16～22位、第32～53位、第59～73位、第82～99位和第123～133位氨基酸。这将为建立ORFV诊断方法、制备单克隆抗体及合成肽疫苗奠定基础。

关键词：羊口疮病毒 F1L基因克隆亲水性信号肽 B细胞表位

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11个猪群体BPI基因第10外显子HpaⅡ遗传变异分析

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中国畜牧杂志 2011年第23期47卷 14-17页

作者：朱璟潘章源訾臣刘璐杜子栋黄小国吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省现代种猪分子选育工程技术研究中心江苏常州213149

本研究旨在对猪杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)基因的多态性进行系统分析,为今后探讨猪BPI基因与疾病抗性的关系提供理论依据。采用PCR-RFLP方法对野猪和国内外10个猪品种BPI基因第10外显子HpaⅡ遗传变异进行检测及序列分析。结果表明:11... 详细信息

本研究旨在对猪杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)基因的多态性进行系统分析,为今后探讨猪BPI基因与疾病抗性的关系提供理论依据。采用PCR-RFLP方法对野猪和国内外10个猪品种BPI基因第10外显子HpaⅡ遗传变异进行检测及序列分析。结果表明:11个猪品种中共检测到AA、BB和AB 3种基因型,2个等位基因,其中野猪、藏猪、荣昌猪和淮猪群体中AA基因型为优势基因型,A等位基因为优势等位基因;外来商业化猪品种中,杜洛克群体AA基因型频率较高。序列分析表明AA基因型与GenBank中的序列一致,BB基因型存在A27G同义突变位点和T118G错义突变位点。基于BPI基因的等位基因频率构建11个猪群体的系统发生树,第1类群包括野猪、淮猪、藏猪、荣昌猪、杜洛克;第2类包括约克夏、长白猪、枫泾猪、梅山猪、二花脸、苏太猪。本研究结果显示,猪群体间基于BPI基因多态性上存在的差异与体型、生产类型及地理分布等因素没有显著的联系。

关键词：杀菌性/通透性增加蛋白多态性抗病育种猪

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蛋白质芯片技术及其在病毒学研究中的应用

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中国农学通报 2010年第16期26卷 44-47页

作者：刘新生王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

蛋白芯片技术作为蛋白组学研究中的一种新的技术,日益受到人们的关注。目前这一技术已经应用于病毒学研究的各个领域。随着该技术的不断完善,它将在病毒学研究中发挥越来越重要的作用。综述了蛋白芯片技术的原理、特点、种类及其检测方... 详细信息

蛋白芯片技术作为蛋白组学研究中的一种新的技术,日益受到人们的关注。目前这一技术已经应用于病毒学研究的各个领域。随着该技术的不断完善,它将在病毒学研究中发挥越来越重要的作用。综述了蛋白芯片技术的原理、特点、种类及其检测方法,并对该技术在病毒学研究中的应用及前景进行了阐述。

关键词：蛋白质芯片病毒学应用

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应用重组PCR构建猪源膜联蛋白A2和增强型绿色荧光蛋白融合基因

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西北农业学报 2010年第1期19卷 38-43页

作者：陈江涛吉艳红王光祥尚佑军刘艳红刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

膜联蛋白A2是膜联蛋白多基因家族成员之一,在Ca2+存在时能与带负电荷的磷脂结合。最近研究显示,膜联蛋白A2在病毒感染方面发挥了重要作用。本研究应用RT-PCR和PCR方法分别获得了猪源膜联蛋白A2和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)。然后用重... 详细信息

膜联蛋白A2是膜联蛋白多基因家族成员之一,在Ca2+存在时能与带负电荷的磷脂结合。最近研究显示,膜联蛋白A2在病毒感染方面发挥了重要作用。本研究应用RT-PCR和PCR方法分别获得了猪源膜联蛋白A2和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)。然后用重组PCR技术成功构建了膜联蛋白A2-EGFP融合基因,为研究膜联蛋白A2在病毒感染细胞中的定位和表达,以及病毒和宿主细胞相互作用奠定了基础。

关键词：重组PCR 膜联蛋白A2 增强型绿色荧光蛋白融合基因

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银杏黄酮抑制脂质氧化的研究

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食品与生物技术学报 2010年第6期29卷 842-846页

作者：张静张晓鸣佟建明夏书芹食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏无锡214122 江南大学食品学院江苏无锡214122 动物营养学国家重点实验室中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

为明确银杏黄酮的有效活性形态,为银杏黄酮作为天然抗氧化剂提供实验依据,本研究将苷元型和糖苷型银杏黄酮分别添加到大豆油和鼠脑组织匀浆中,考察它们对高温下大豆油氧化的抑制效果和对由FeCl_2-H_2O_2诱导产生的丙二醛(MDA)的抑制效... 详细信息

为明确银杏黄酮的有效活性形态,为银杏黄酮作为天然抗氧化剂提供实验依据,本研究将苷元型和糖苷型银杏黄酮分别添加到大豆油和鼠脑组织匀浆中,考察它们对高温下大豆油氧化的抑制效果和对由FeCl_2-H_2O_2诱导产生的丙二醛(MDA)的抑制效果。结果表明,苷元型和糖苷型的黄酮均能有效地抑制脂质氧化,且在相同浓度下苷元型比糖苷型银杏黄酮有更强的抑制脂质氧化的能力(p<0.05);作为天然的抗氧化剂,苷元型银杏黄酮有更好的抗氧化效果。

关键词：银杏黄酮油脂抗氧化

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