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低碳经济与高效养殖——第六次全国饲料营养学术研讨会暨动物营养学分会成立三十周年大会

作者：马秋刚张勇张建云刘来亭计成中国农业大学大学动物科学技术学院动物营养国家重点实验室河南工业大学生物工程学院

本试验研究了肉鸡日粮中不同水平硫辛酸对1-42日龄AA肉仔鸡生产性能、胴体品质、肉品质、抗氧化性能及肌纤维生长的影响。选取240只1日龄健康公雏,随机分配成4个处理组,每个处理6个重复,每个重复10只鸡。在玉米-豆粕型日粮基础上添加硫... 详细信息

本试验研究了肉鸡日粮中不同水平硫辛酸对1-42日龄AA肉仔鸡生产性能、胴体品质、肉品质、抗氧化性能及肌纤维生长的影响。选取240只1日龄健康公雏,随机分配成4个处理组,每个处理6个重复,每个重复10只鸡。在玉米-豆粕型日粮基础上添加硫辛酸(0、300、600、900 mg/kg),以饲喂基础日粮组为<正>本试验研究了肉鸡日粮中不同水平硫辛酸对1-42日龄AA肉仔鸡生产性能、胴体品质、肉品质、抗氧化性能及肌纤维生长的影响。选取240只1日龄健康公雏,随机分配成4个处理组,每个处理6个重复,每个重复10只鸡。在玉米-豆粕型日粮基础上添加硫辛酸(0、300、600、900 mg/kg),以饲喂基础日粮组为

关键词：硫辛酸肉仔鸡生长性能肉品质抗氧化性能肌纤维发育

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传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

将引起传染性法氏囊病IBD免疫预防失败的IBD病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-... 详细信息

将引起传染性法氏囊病IBD免疫预防失败的IBD病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应,抗原效价达到1.6×10～3;用western blot分析,在53 ku处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒,在感染细胞中发现了"包涵体样"结构。用HisTrap HP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原,建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物,免疫2周龄SPF鸡,一次免疫14 d后,ELISA检测抗体效价为8×10～2,中和抗体效价为1106,攻毒实验的存活率为30%;二次免疫14 d后,ELISA抗体效价为3.2×10～3,中和抗体效价为2536,存活率为100%。在实验观察7 d内,重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化,法氏囊/体重比高于对照组(p<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒 Vp2基因病毒样颗粒包涵体样结构间接ELISA 免疫实验

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乙酰肉碱对肉仔鸡生长性能、肌纤维发育及脂质代谢的影响

乙酰肉碱对肉仔鸡生长性能、肌纤维发育及脂质代谢的影响

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低碳经济与高效养殖——第六次全国饲料营养学术研讨会暨动物营养学分会成立三十周年大会

作者：张勇马秋刚张建云刘来亭计成中国农业大学大学动物科学技术学院动物营养国家重点实验室河南工业大学生物工程学院

本试验研究了肉鸡日粮中添加不同水平乙酰肉碱对AA肉仔鸡生长性能、肉品质、肌纤维生长和脂质代谢的影响。选取240只1日龄健康公雏,随机分配成4个处理组,每个处理6个重复,每个重复10只鸡。在玉米-豆粕型日粮基础上添加乙酰肉碱(0、300、... 详细信息

本试验研究了肉鸡日粮中添加不同水平乙酰肉碱对AA肉仔鸡生长性能、肉品质、肌纤维生长和脂质代谢的影响。选取240只1日龄健康公雏,随机分配成4个处理组,每个处理6个重复,每个重复10只鸡。在玉米-豆粕型日粮基础上添加乙酰肉碱(0、300、600、900 mg/kg),以饲喂基础日粮组为对照组,<正>本试验研究了肉鸡日粮中添加不同水平乙酰肉碱对AA肉仔鸡生长性能、肉品质、肌纤维生长和脂质代谢的影响。选取240只1日龄健康公雏,随机分配成4个处理组,每个处理6个重复,每个重复10只鸡。在玉米-豆粕型日粮基础上添加乙酰肉碱(0、300、600、900 mg/kg),以饲喂基础日粮组为对照组,

关键词：乙酰肉碱肉仔鸡生长性能肉品质肌纤维生长脂质代谢

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近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

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第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛

作者：曹冰玉王永山范红结欧阳伟王忠灿唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

为制备近期IBDV毒株的重组VP2蛋白,将近期安徽IBD免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-VP2,转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,呈阳... 详细信息

为制备近期IBDV毒株的重组VP2蛋白,将近期安徽IBD免疫预防失败的病鸡法氏囊组织中扩增的VP2基因定向克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-VP2,转化大肠杆菌Rosetta(DE3);经IPTG诱导后,用IBDV双抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应;以SDS-PAGE分析,重组VP2融合蛋白的分子量为68ku,表达量约占菌体总蛋白的16.0%,表达产物主要以包涵体形式存在于菌体内;在Western-blotting中,重组VP2蛋白与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带。本实验为研制针对近期流行IBDV毒株的新型基因工程疫苗和检测试剂奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 IBDV VP2 原核表达

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近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

近期引起免疫失败的传染性法氏囊病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

关键词：传染性法氏囊病病毒 IBDV VP2 原核表达

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传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-... 详细信息

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应,抗原效价达到1.6×103;用Western blotting分析,在53kDa处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒,在感染细胞中发现了"包涵体样"结构。用HisTrap HP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原,建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物,免疫2周龄SPF鸡,一次免疫14d后,ELISA检测抗体效价为8×102,中和抗体效价为1106,攻毒实验的存活率为30%;二次免疫14d后,ELISA抗体效价为3.2×103,中和抗体效价为2536,存活率为100%。在实验观察7d内,重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化,法氏囊/体重比高于对照组(P<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒 Vp2基因病毒样颗粒包涵体样结构间接ELISA 免疫实验

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IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达

IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达

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第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛

作者：周宇王永山范红结欧阳伟唐雨德王忠灿江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e,将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中,转化*** DH10Bac感受态细胞,经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBacHT-VP2-5e,用脂质体... 详细信息

运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e,将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中,转化*** DH10Bac感受态细胞,经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBacHT-VP2-5e,用脂质体法转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒vBacHT-VP2-5e。对vBacHT-VP2-5e感染的Sf9细胞,以间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;电镜检查,重组VP2-5e蛋白能够自组装成病毒样颗粒(VLP);用免疫印迹分析(Western-blotting),在59kD处出现一条特异性蛋白条带。本实验为组合基因型重组IBD多价疫苗的研究奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因抗原表位组合基因表达

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嗜人性PERV感染性克隆感染人源细胞后Stathmin蛋白表达差异分析

嗜人性PERV感染性克隆感染人源细胞后Stathmin蛋白表达差异分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：颜奇坡马玉媛吕茂民叶小丽郑霖吴健敏田克恭章金刚国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室军事医学科学院野战输血研究所农业部兽医诊断中心广西壮族自治区兽医研究所

猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retroviruses,PERV)是猪→人异种移植中倍受关注的病毒。PERV感染人源细胞后虽然没有细胞病变,但这种隐性感染是否会通过潜在的与宿主细胞相互作用引起肿瘤或者癌变,其感染后的潜在生理和病理效... 详细信息

猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retroviruses,PERV)是猪→人异种移植中倍受关注的病毒。PERV感染人源细胞后虽然没有细胞病变,但这种隐性感染是否会通过潜在的与宿主细胞相互作用引起肿瘤或者癌变,其感染后的潜在生理和病理效应仍有待研究。本研究旨在分析嗜人性PERV感染的人源细胞中

关键词：感染性克隆 Stathmin 差异分析

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IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达

IBDV抗原表位与VP2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：周宇王永山范红结欧阳伟唐雨德王忠灿江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e,将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中,转化E-coli DH10Bac感受态细胞,经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBacHT-VP2-5e,用脂... 详细信息

运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e,将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中,转化E-coli DH10Bac感受态细胞,经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBacHT-VP2-5e,用脂质体法转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒vBacHT-VP2-5e。对vBacHT-VP2-5e感染的Sf9细胞,以间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;电镜检查,重组VP2-5e蛋白能够自组装成病毒样颗粒(VLP);用免疫印迹分析(Western-blotting),在59kD处出现一条特异性蛋白条带。本实验为组合基因型重组IBD多价疫苗的研究奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因抗原表位组合基因表达

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微小牛蜱Bm86基因的原核表达与表达条件的优化

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第6期27卷 531-533页

作者：马米玲关贵全李有全刘爱红任巧云牛庆丽殷宏罗建勋家畜疫病病原生物国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046

根据微小牛蜱Bm86基因序列设计引物,在重组质粒pMD18-T-Bm86中克隆,并将其定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)株,用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在不同时间进行诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯... 详细信息

根据微小牛蜱Bm86基因序列设计引物,在重组质粒pMD18-T-Bm86中克隆,并将其定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)株,用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在不同时间进行诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测结果表明,37℃条件下经1mmol/LIPTG诱导8h后,目的重组蛋白表达量最大,表达相对分子质量(Mr)约为94000的包涵体蛋白,与预期大小一致,目的蛋白约占蛋白总量的29%。蛋白质印迹(Western blotting)分析表明,该重组蛋白可被兔抗微小牛蜱全蜱阳性血清所识别。

关键词：微小牛蜱 Bm86基因表达

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