检索结果-内蒙古大学图书馆

畜禽业 2023年第5期34卷 1-5,9页

作者：谭小雨杨洋郭紫晶李彦敏张志东西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

目的合理选择病毒快速核酸提取方法。方法分别采用2种商品化核酸快提取法——Cell-to-cDNA裂解液(A法)和基于磁珠核酸提取方法(InnuPREP MP Basic Kit A,B法),提取羊临床样品中的羊口疮病毒(ORFV)和羊痘病毒(CaPV)核酸,使用实时荧光定... 详细信息

目的合理选择病毒快速核酸提取方法。方法分别采用2种商品化核酸快提取法——Cell-to-cDNA裂解液(A法)和基于磁珠核酸提取方法(InnuPREP MP Basic Kit A,B法),提取羊临床样品中的羊口疮病毒(ORFV)和羊痘病毒(CaPV)核酸,使用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)和重组酶聚合酶扩增结合侧流层析技术(RPA-LFD)方法进行平行检测,并与常规核酸提取方法(宝生物病毒DNA/RNA提取试剂盒,C法)比较。结果与C法相比,在A法和B法提取的46份疑似orf拭子中,qPCR的ORFV核酸检出率分别为70.8%和87.5%,RPA-LFD的检出率分别为69.5%和82.6%;在A法和B法提取的52份疑似CaP的拭子样品中,qPCR的CaPV核酸检出率分别为77%和90%,RPA-LFD的检出率分别为65.5%和89.7%。对组织样品分析发现:A法不能用于组织样品的核酸提取;在B法提取的52份疑似orf组织样品核酸中,与C法相比,qPCR的ORFV核酸检出率为93.7%,RPA-LFD的检出率93.3%;对B法提取的61份疑似CaP组织样品核酸中,qPCR的CaPV核酸检出率为94.5%,RPA-LFD的检出率为88.7%。结论磁珠核酸提取方法(B法)可适用于不同样品中的ORFV和CaPV核酸的快速提取。

关键词：快速核酸提取试剂羊口疮羊痘 qPCR RPA-LFD

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泌乳奶牛血浆嘌呤衍生物含量与产奶性能、瘤胃发酵参数及血浆生化指标的相关性

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动物营养学报 2021年第9期33卷 5046-5053页

作者：李敏赵圣国郑楠王加启华中农业大学动物科技学院动物医学院武汉430070 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193

本试验通过分析泌乳奶牛血浆嘌呤衍生物含量与产奶性能、瘤胃发酵参数及血浆生化指标的相关性,揭示影响血浆嘌呤衍生物含量的因素。试验选取284头泌乳日龄为24~77 d、胎次为2胎的健康荷斯坦奶牛,记录产奶量并分别采集奶样、瘤胃液和血液... 详细信息

本试验通过分析泌乳奶牛血浆嘌呤衍生物含量与产奶性能、瘤胃发酵参数及血浆生化指标的相关性,揭示影响血浆嘌呤衍生物含量的因素。试验选取284头泌乳日龄为24~77 d、胎次为2胎的健康荷斯坦奶牛,记录产奶量并分别采集奶样、瘤胃液和血液,检测血浆嘌呤衍生物含量、产奶性能、瘤胃发酵参数及血浆生化指标。结果表明:1)泌乳日龄、乳蛋白产量、产奶量与血浆嘌呤衍生物含量呈显著或极显著正相关(P<0.05或P<0.01)。2)瘤胃异戊酸、戊酸含量与血浆嘌呤衍生物含量呈极显著负相关(P<0.01),瘤胃丁酸含量与血浆嘌呤衍生物含量呈显著正相关(P<0.05)。3)血浆Δ15 N和肌酐含量与血浆嘌呤衍生物含量呈显著或极显著负相关(P<0.05或P<0.01),血浆游离脂肪酸、葡萄糖含量与血浆嘌呤衍生物含量呈极显著正相关(P<0.01)。由此可见,影响血浆嘌呤衍生物含量的因素主要包括:泌乳日龄、乳蛋白产量、产奶量,瘤胃异戊酸、戊酸、丁酸含量,血浆Δ15 N和肌酐、游离脂肪酸、葡萄糖含量。

关键词：血浆嘌呤衍生物产奶性能瘤胃发酵参数血浆生化指标

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2023年贵州省六盘水市部分地区蜱传立克次体调查

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第2期36卷 154-158页

作者：李丹尼李娅于永慧欧阳譞熊小路金山焦俊内蒙古农业大学兽医学院、农业部动物临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 北京微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 贵州省六盘水市人民医院肾内科贵州六盘水553000

目的了解贵州省六盘水市部分地区蜱携带立克次体感染率,为当地蜱传立克次体病防控工作提供参考依据。方法 2023年4—6月在贵州省六盘水市盘州市大山镇高兴村捕捉牛、羊体表寄生蜱,采用形态学和分子生物学方法对蜱种进行鉴定。采用巢式... 详细信息

目的了解贵州省六盘水市部分地区蜱携带立克次体感染率,为当地蜱传立克次体病防控工作提供参考依据。方法 2023年4—6月在贵州省六盘水市盘州市大山镇高兴村捕捉牛、羊体表寄生蜱,采用形态学和分子生物学方法对蜱种进行鉴定。采用巢式PCR法检测蜱携带的立克次体,包括斑点热群立克次体、柯克斯体属、无形体属、埃立克体属和东方体属,扩增的阳性片段测序后与Gen Bank已知序列进行同源性比对。结果共采集200只蜱,经鉴定均为微小扇头蜱。巢式PCR联合测序鉴定出蜱携带敬信立克次体暂定种(40.50%)、贝氏柯克斯体(1.50%)和柯克斯体共生菌(27.00%),未检测出无形体、埃立克体及东方体。结论贵州省六盘水市部分地区微小扇头蜱携带敬信立克次体暂定种、贝氏柯克斯体和柯克斯体共生菌;当地有关部门需加强家畜和人群蜱传立克次体感染监测,减少蜱传立克次体病危害。

关键词：微小扇头蜱立克次体敬信立克次体暂定种贝氏柯克斯体柯克斯体共生菌六盘水市

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METTL3表达水平对口蹄疫病毒复制的影响

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1010-1018页

作者：张继燕李伟伟范许许曹雪静朱兆宇裴丹诗王一卓何路李熙忠任青峰张伟王川郑海学甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000 河南农业大学动物医学院河南郑州450046 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的... 详细信息

利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的复制。为了进一步验证METTL3的表型功能,利用慢病毒包装系统构建METTL3稳定表达细胞系。用FMDV分别感染野生型和METTL3过表达BHK-21细胞,通过q PCR和TCID50试验测定FMDV在这2株细胞中的复制情况。结果显示,过量表达METTL3促进FMDV的复制。此外,激光共聚焦显微镜试验显示,FMDV感染BHK-21细胞后,METTL3从细胞核迁移至细胞质,其细胞定位的改变表明METTL3可能参与调控FMDV基因组的转录过程。本研究中成功构建了METTL3基因敲除和过表达的BHK-21细胞系,首次发现该分子正向调控FMDV的复制。上述实验结果为进一步开展METTL3在宿主细胞中调控FMDV复制的机制研究奠定了可靠的数据基础。

关键词： METTL3 m6A修饰口蹄疫病毒

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绵羊肺炎支原体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1202-1208页

作者：王晓楠张纹纹陈思宇单依依陈益李文良程子龙杨蕾蕾王金泉刘茂军新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300

为建立绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)的抗原快速定量检测方法,本研究通过单克隆抗体筛选和条件优化,建立了一种检测MO抗原夹心ELISA检测方法,建立的ELISA方法的最优条件为:单克隆抗体1A11浓度为105μg/m L,37℃孵育1 h后... 详细信息

为建立绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)的抗原快速定量检测方法,本研究通过单克隆抗体筛选和条件优化,建立了一种检测MO抗原夹心ELISA检测方法,建立的ELISA方法的最优条件为:单克隆抗体1A11浓度为105μg/m L,37℃孵育1 h后4℃过夜包被;用10 g/L BSA 37℃封闭1 h;与超声处理的样品作用1.5 h;检测抗体浓度为3.81μg/m L,37℃作用2 h;酶标抗体1∶4000稀释,37℃反应1.5 h;加入底物37℃避光反应10 min。建立的夹心ELISA方法批间和批内变异系数均低于10%,特异性、重复性、敏感性良好,本方法检测的抗原含量与MO的CCU呈正相关。本方法的建立为绵羊肺炎支原体的定量检测提供了新技术,可用于实验室MO培养物CCU含量的替代检测和MO疫苗生产过程中抗原的检测。

关键词：绵羊肺炎支原体夹心ELISA 建立

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CRISPR/Cas9技术在猪、鸡中的应用研究进展

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中国畜牧兽医 2022年第12期49卷 1565-1573页

作者：李晓娇何燕华朱新宇邹娴罗成龙广东省农业科学院动物科学研究所畜禽育种国家重点实验室广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640

基因编辑是利用核酸酶在基因组的特定位点产生DNA双链断裂,从而触发细胞自身的DNA损伤修复机制,实现对靶基因序列进行位点特异性修饰。规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspersed short palindromic repeat, CRISPR... 详细信息

基因编辑是利用核酸酶在基因组的特定位点产生DNA双链断裂,从而触发细胞自身的DNA损伤修复机制,实现对靶基因序列进行位点特异性修饰。规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspersed short palindromic repeat, CRISPR)及其相关蛋白9(Cas9)系统作为第3代基因编辑技术在农业和基因治疗研究中发挥着重要作用,与传统的锌指核酶和转录激活因子样效应物核酶基因编辑方法相比,它可以靶向基因的任何位点引起DNA双链断裂,实现目标基因的精准敲除或插入外源片段,并能快速、高效地修饰基因组,包括基因敲除、敲入、抑制、激活等,是应用最广泛的基因编辑工具。CRISPR/Cas9技术的出现彻底改变了生命科学、医学和遗传学研究现状。近年来,利用CRISPR/Cas9技术对动物基因组进行修饰,开启了畜禽分子育种的新纪元,不仅极大地推动了现代畜禽养殖技术的发展,而且为人类医学研究做出了特殊贡献,特别是在猪和鸡上。作者以猪和鸡为对象,综述了CRISPR/Cas9技术在异体器官移植供体、人类疾病的生物模型、抗病育种材料、全基因组高通量筛选等方面的研究进展,以及如何利用CRISPR技术快速又简单地生产出基因编辑猪、鸡,为推动CRISPR技术制备其他基因编辑动物提供参考依据。

关键词： CRISPR/Cas9技术猪鸡基因编辑基因功能

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生物素对产蛋高峰期蛋鸭产蛋性能、蛋品质、血液生化指标、卵巢发育及胫骨性状的影响

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中国畜牧兽医 2023年第2期50卷 564-572页

作者：梁铭其陈伟张亚男夏伟光黄雪冰李凯潮郑春田王爽仲恺农业工程学院动物科技学院广州510225 广东省农业科学院动物科学研究所畜禽育种国家重点实验室农业部华南动物营养与饲料重点实验室广东省动物育种与营养公共实验室广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640

【目的】本研究旨在探讨生物素在蛋鸭生产中的应用效果及对蛋鸭卵巢发育和胫骨性状的影响。【方法】采用单因素完全随机试验设计,将432羽健康、处于产蛋高峰期的福建龙岩山麻鸭随机分为6个处理,每个处理6个重复,每个重复12羽。采用小麦... 详细信息

【目的】本研究旨在探讨生物素在蛋鸭生产中的应用效果及对蛋鸭卵巢发育和胫骨性状的影响。【方法】采用单因素完全随机试验设计,将432羽健康、处于产蛋高峰期的福建龙岩山麻鸭随机分为6个处理,每个处理6个重复,每个重复12羽。采用小麦-豆粕型基础饲粮,生物素添加水平分别为0、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25 mg/kg,试验期12周。于第12周,每个重复随机选取4枚蛋,以及2只试验鸭进行采血、屠宰取样,检测蛋品质、血液生化指标及卵巢发育和胫骨性状指标。【结果】①饲粮生物素添加水平对产蛋性能影响不显著(P>0.05)。②饲粮生物素添加水平为0.10 mg/kg时,蛋黄重量最低,显著低于0.05和0.20 mg/kg添加组(P<0.05);随饲粮生物素添加水平升高,蛋黄中胆固醇(CHO)含量呈现升高趋势(P<0.05)。与对照组相比,生物素添加水平为0.25 mg/kg时,蛋黄中丙二醛(MDA)含量显著下降(P<0.05)。③饲粮生物素添加水平对蛋鸭血浆生化指标、卵巢发育指标及胫骨发育指标均无显著影响(P>0.05)。【结论】饲粮中添加不同水平生物素对高峰期蛋鸭产蛋性能、卵巢发育和胫骨性状均无显著影响;饲粮添加生物素水平为0.25 mg/kg时可降低蛋黄脂质过氧化水平,添加水平为0.10~0.25 mg/kg时增加了胆固醇在蛋黄中的沉积。

关键词：生物素蛋鸭产蛋性能蛋品质

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NADC30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒样颗粒的制备与鉴定

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微生物学通报 2022年第12期49卷 5287-5297页

作者：陶一墨解长占王鹏金宁一鲁会军广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 中国农业科学院长春兽医研究所吉林长春130122

【背景】猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)可以造成怀孕母猪的繁殖障碍及仔猪的呼吸系统疾病,近年来,NADC30-like谱系PRRSV已成为国内的优势流行毒株。【目的】研制针对NADC30-like... 详细信息

【背景】猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)可以造成怀孕母猪的繁殖障碍及仔猪的呼吸系统疾病,近年来,NADC30-like谱系PRRSV已成为国内的优势流行毒株。【目的】研制针对NADC30-like谱系PRRSV的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗。【方法】将PRRSV NADC30-like毒株编码GP5蛋白开放阅读框5(open reading frame 5,ORF5)、ORF6(编码M蛋白)分别连接至pFastBacTMDual载体P10和PH启动子下游多克隆位点,获得穿梭质粒pFB-30-ORF5及pFB-30-ORF6,酶切鉴定后,将ORF6基因插入到穿梭质粒pFB-30-ORF5 PH启动子下游,构建穿梭质粒pFB-30-ORF5-OPF6。将上述3种穿梭质粒分别转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选及PCR鉴定重组杆粒。再将获得的重组杆粒转染至SF9昆虫细胞,发现细胞病变后收获病毒液,继续盲传3代,在透射电镜下观察是否有病毒样颗粒。用第3代病毒液感染SF9细胞后,分别用GP5蛋白、His-tag、Flag-tag单克隆抗体作为一抗,通过免疫电镜、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、Western blotting鉴定重组蛋白。【结果】成功构建了3种穿梭质粒pFB-30-ORF5、pFB-30-ORF6和pFB-30-ORF5-OPF6,酶切鉴定正确。通过蓝白斑筛选及PCR验证后获得重组杆粒,分别命名为Bacmind-30-ORF5、Bacmind-30-ORF6和Bacmind-30-ORF5-ORF6。重组杆粒感染SF9细胞120 h时出现明显的细胞病变,收获病毒液后,在透射电子显微镜可观察到大小为50 nm左右呈现球形结构的VLPs。免疫电镜可以观察到胶体金颗粒结合在VLPs周围;IFA结果显示实验组均出现了明显绿色的特异性荧光灶;Western blotting结果表明,3种VLPs均出现特异性条带,并与预期大小一致。【结论】制备了3种NADC30-like谱系PRRSV的病毒样颗粒,为针对PRRSV新谱系流行株疫苗的研发奠定了基础。

关键词： NADC30-like猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV) 病毒样颗粒重组杆状病毒

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携带p57和BLID基因的重组减毒沙门菌诱导乳腺癌细胞凋亡

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中国兽医学报 2024年第12期44卷 2564-2571页

作者：包利霞顾天越刘青朱凡杰王鑫源朱晓琛刘婷婷王晶钰王雨欣金天明张东超天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津300392 天津市畜禽分子育种与生物技术重点实验室天津300381 天津市农业科学院畜牧兽医研究所天津300381 天津农学院农业农村部智慧养殖重点实验室(部省共建) 天津300392 天津市畜禽病原检测与基因工程疫苗工程技术中心天津300392

为构建携带p57和BLID基因的重组减毒沙门菌,并评价其对乳腺癌细胞的体外抑制作用及其对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用,本研究构建了重组减毒沙门菌LH430/pEGFP-p57-BLID,利用RT-PCR和Western blot检测重组减毒沙门菌在癌细胞中的转录与表达... 详细信息

为构建携带p57和BLID基因的重组减毒沙门菌,并评价其对乳腺癌细胞的体外抑制作用及其对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用,本研究构建了重组减毒沙门菌LH430/pEGFP-p57-BLID,利用RT-PCR和Western blot检测重组减毒沙门菌在癌细胞中的转录与表达情况,CCK-8法评估重组减毒沙门菌安全性及对乳腺癌细胞活性的影响,细胞划痕试验分析重组减毒沙门菌对癌细胞的迁移力影响,流式细胞术和Western blot分析重组减毒沙门菌对MDAMB-231细胞凋亡的作用。结果显示,PCR能扩增出重组减毒沙门菌携带的目的基因条带,且重组减毒沙门菌携带的目的基因可在MDA-MB-231细胞中转录和表达;重组减毒沙门菌的生长特性和遗传稳定性良好。与PBS组相比,重组减毒沙门菌LH430/pEGFP-p57-BLID可极显著减弱(P<0.01)MDA-MB-231细胞的活性,并能极显著抑制(P<0.01)MDA-MB-231细胞的迁移。重组减毒沙门菌LH430/pEGFP-p57-BLID可明显增加MDA-MB-231细胞的凋亡数量,且能够极显著上调(P<0.01)促进凋亡蛋白Bax的表达,极显著下调(P<0.01)抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果表明,重组减毒沙门菌对乳腺癌细胞MDA-MB-231有抑制作用并能够诱导其发生凋亡,为后续开展体内抑瘤研究奠定基础。

关键词： p57基因 BLID基因减毒沙门菌乳腺癌凋亡

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基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp 1基因敲入小鼠

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中国畜牧兽医 2023年第11期50卷 4392-4402页

作者：沙芳芳范沛杨培长张璐李建科河南工业大学生物工程学院郑州450001 中国农业科学院蜜蜂研究所北京100193

【目的】探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1(MRJP1)基因敲入血管平滑肌细胞后,在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp 1 c... 详细信息

【目的】探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1(MRJP1)基因敲入血管平滑肌细胞后,在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp 1 cDNA的载体共显微注射小鼠受精卵,制备在血管平滑肌细胞中特异性表达的Mrjp 1基因定点敲入小鼠,并验证敲入位点的正确性。小鼠背部皮下包埋微渗透压缓释泵,持续将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导野生型(WT)和纯合子(Mrjp 1^(+/-))小鼠,比较不同时间收缩压和舒张压,以及胸主动脉中膜面积/管腔面积(Media/Lumen area)比值的差异。【结果】F0代嵌合体小鼠与野生型交配,产生杂合子(Mrjp 1^(+/-))小鼠,对Mrjp 1^(+/-)小鼠敲入位点同源重组片段的PCR扩增、测序和Southern blotting检测结果显示,Mrjp 1基因成功整合到小鼠染色体Hipp11位点。Mrjp 1^(+/-)小鼠之间交配产生WT、Mrjp 1^(+/-)和Mrjp 1^(+/-)小鼠,Mrjp 1基因在胸主动脉中能够顺利转录和翻译。持续给予AngⅡ,Mrjp 1^(+/-)小鼠收缩压和舒张压升高趋势整体低于WT小鼠,收缩压在第3、6、9、12天差异显著(P<0.05),舒张压在第3(P<0.05)、6(P<0.01)天差异显著;经AngⅡ刺激后,M rjp 1^(+/-)小鼠胸主动脉Media/Lumen area比值亦显著低于WT小鼠(P<0.05)。【结论】Mrjp 1基因特异性敲入小鼠血管平滑肌细胞,可在体内水平上抑制AngⅡ诱导的高血压,为深入了解MRJP1蛋白功能及精准开发蜂王浆提供了重要的理论依据。

关键词： CRISPR/Cas9 小鼠基因敲入蜂王浆主蛋白1 血压调节

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