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SUN2调控稳定表达绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的OAR-L1细胞的恶性转化能力的研究

中国兽医科学 2025年第5期55卷 669-677页

作者：鲍安玉杜晓悦陈思旭段续接张培刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物临床诊疗技术重点实验室内蒙古自治区基础兽医学重点实验室

为了探究SAD1/UN84结构域蛋白-2(SAD1/UNC84 domain protein-2,SUN2）在绵羊肺腺瘤病（ovine pulmonary adenocarcnoma,OPA）肿瘤细胞恶性转化中的功能，本试验利用实验室保存的JSRV env慢病毒感染绵羊肺成纤维细胞（OAR-L1），建立了OAR-L1-Env稳转株。通过qPCR和Western-blot检测JSRV Env和SUN2的表达情况，使用CCK-8、划分愈合试验和软琼脂糖集落形成试验检测细胞的恶性转化能力。此外，分别构建SUN2过表达和干扰质粒，并转染OAR-L1-Env稳转株，利用qPCR和Western-blot检测其SUN2的表达情况，通过CCK-8和划分愈合试验检测细胞的增殖和迁移能力。结果显示，OAR-L1-Env稳转株成功建立，且SUN2表达量显著下调（P<0.05）,CCK-8、划分愈合试验和软琼脂糖集落形成试验表明OAR-L1-Env稳转株发生恶性转化。OAR-L1-Env稳转株中过表达SUN2可抑制细胞的增殖和迁移能力（P<0.05），而干扰SUN2则促进细胞的增殖和迁移能力（P<0.05）。综上所述，本研究表明SUN2参与调控JSRV Env诱导的细胞恶性转化，提示其可能对OPA肿瘤生成有抑制作用。本研究为进一步探究SUN2在OPA中的细胞增殖等生物学作用的研究提供了一定的参考资料。

关键词：稳转株囊膜蛋白 SUN2 增殖迁移

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从代谢角度看冠状病毒与宿主的相互作用

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中国人兽共患病学报 2023年第11期39卷 1072-1079页

作者：黄梓鑫周书亭王哲上海交通大学农业与生物学院动物科学系/上海市现代种业协同创新中心上海200240 上海市兽医生物技术重点实验室上海200240

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的出现引发了新型冠状病毒肺炎的全球大流行,也将“冠状病毒”拉进大众视野。目前已知,病毒快速复制的同时会引起宿主细胞代谢网络的剧烈变动... 详细信息

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的出现引发了新型冠状病毒肺炎的全球大流行,也将“冠状病毒”拉进大众视野。目前已知,病毒快速复制的同时会引起宿主细胞代谢网络的剧烈变动,而近期的研究已经从这些关键变化中寻找到相应的抗病毒靶点。本综述,我们重点关注了冠状病毒对宿主代谢(包括脂类代谢、中心碳代谢、氨基酸代谢等)影响的相关研究。阐明病毒感染诱导的宿主细胞代谢重编程,不仅有助于更透彻地理解病毒与宿主的相互作用,更提供了通过靶向代谢的策略来开发抗病毒药物的新思路。

关键词：冠状病毒细胞代谢药物靶点

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非洲马瘟病毒VP7蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗体制备

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中国兽医科学 2022年第3期52卷 317-323页

作者：户鑫兵高闪电田占成范亚亚关贵全刘光远罗建勋殷宏独军政中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了表达非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白并制备其多克隆抗体,参考GenBank中已公开的AHSV基因序列,人工合成编码AHSV-1 VP7蛋白的S7基因全长序列,利用PCR技术扩增得到S7基因片段,将其克隆到p FastBac^(TM)HTb载体上,构建重组载体p FastBac^(T... 详细信息

为了表达非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白并制备其多克隆抗体,参考GenBank中已公开的AHSV基因序列,人工合成编码AHSV-1 VP7蛋白的S7基因全长序列,利用PCR技术扩增得到S7基因片段,将其克隆到p FastBac^(TM)HTb载体上,构建重组载体p FastBac^(TM)-AHSVS7,通过蓝白斑试验筛选出重组杆粒BacmidAHSVS7,并转染昆虫细胞,拯救获得重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,AHSV-1 VP7重组蛋白在昆虫细胞中获得表达。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的VP7蛋白,将其免疫新西兰大白兔制备相应的多克隆抗体,该抗体不仅能与杆状病毒重组表达的AHSV-1 VP7蛋白反应,且能识别BHK21细胞中表达的AHSV-1 VP7蛋白,具有很好的特异性。本试验成功利用杆状病毒系统表达了AHSV-1 VP7重组蛋白,并制备了多克隆抗体,这为后续AHSVVP7蛋白功能的研究以及ELISA诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：非洲马瘟病毒 VP7蛋白昆虫细胞表达多克隆抗体

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非洲猪瘟病毒A104R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

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中国兽医杂志 2022年第6期58卷 29-34页

作者：蒋亚君王召阳崔帅王洋鑫婷郭晓宇刘雪婷陈世钰房立春朱鸿飞贾红中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京海淀100193 华南农业大学兽医学院广东广州510630 山东省农业科学院山东济南250100

为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)重组蛋白A104R(rA104R)及研制抗rA104R的多克隆抗体,本研究通过ExPASy等在线生物信息学软件初步预测该蛋白的理化性质、信号肽、核定位信号等信息,继而合成ASFV的A104R基因,构建基于pET-28a(+)载体的原核表达... 详细信息

为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)重组蛋白A104R(rA104R)及研制抗rA104R的多克隆抗体,本研究通过ExPASy等在线生物信息学软件初步预测该蛋白的理化性质、信号肽、核定位信号等信息,继而合成ASFV的A104R基因,构建基于pET-28a(+)载体的原核表达系统。重组蛋白用Ni亲和层析纯化后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blotting和液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术鉴定。纯化的蛋白免疫6~8周龄BALB/c小鼠,制备抗rA104R的多克隆抗体,通过Western blotting和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其反应性和免疫原性。结果显示,原核表达载体构建成功;重组菌在37℃诱导8 h后表达量最高,在包涵体和上清中均有表达,表明其呈部分可溶性表达;纯化的重组蛋白大小约16 kDa,且反应性良好;LC-MS分析结果显示,该rA104R蛋白多个肽段均与目标蛋白的氨基酸序列相匹配,匹配率为59%;制备的鼠源抗rA104R多克隆抗体效价大于1∶2048000,具有良好的免疫原性。结果表明,本研究制备的rA104R及其多克隆抗体可进一步用于生物学功能研究,并可为疫苗及相关诊断试剂研制提供基础材料。

关键词：非洲猪瘟病毒原核表达 A104R重组蛋白液相色谱-质谱

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我国牧草育种进展及存在问题

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中国科学基金 2023年第4期37卷 528-536页

作者：刘志鹏刘文献杨青川张博王增裕郭振飞付春祥林浩张志强黄琳凯刘文辉谢文刚苗彦军尹俊张吉宇景海春南志标种康兰州大学草种创新与草地农业生态系统全国重点实验室兰州730020 中国农业科学院畜牧兽医研究所北京100193 新疆农业大学草业学院乌鲁木齐830052 青岛农业大学草业学院青岛266109 南京农业大学草业学院南京210095 中国科学院青岛生物能源与过程研究所青岛266101 中国农业科学院生物技术研究所北京100081 内蒙古农业大学草原与资源环境学院呼和浩特010018 四川农业大学草业科技学院成都625014 青海大学畜牧兽医科学院西宁810016 西藏农牧学院动物科学学院林芝860000 云南省林业和草原局昆明650224 中国科学院植物研究所北京100093

高产、优质、多抗牧草品种是保证我国草牧业可持续发展的关键,关系到国家的食物安全、生态安全和乡村振兴。自1987年至2022年底,国家审定和省级审定(西部七省份)分别通过了674个和271个草类植物新品种,并制定了25个牧草种/属的DUS测试... 详细信息

高产、优质、多抗牧草品种是保证我国草牧业可持续发展的关键,关系到国家的食物安全、生态安全和乡村振兴。自1987年至2022年底,国家审定和省级审定(西部七省份)分别通过了674个和271个草类植物新品种,并制定了25个牧草种/属的DUS测试指南。但我国牧草育种在种质资源收集、育种方法、育种方向、DUS测试和资源共享等方面仍比较薄弱,严重阻碍了我国草牧业发展进程。本文综述了我国牧草品种审定进展,分析了目前我国牧草育种存在的问题并提出建议,以期促进我国培育具有自主知识产权的高产、优质、多抗牧草新品种。

关键词：牧草品种育种存在问题政策建议

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非洲猪瘟病毒分子信标荧光定量PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2025年第2期55卷 203-209页

作者：钟健豪高寒杨吉飞邝麒元高校鹏李跃牛庆丽关贵全殷宏张桂红卢刚孙彦阔华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广东广州510642 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 华南农业大学非洲猪瘟防控技术研究中心国家非洲猪瘟区域实验室(广州)广东广州510642 甘肃省病原生物学基础学科研究中心国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)甘肃兰州730046 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

本试验旨在利用新型荧光探针-分子信标建立一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的分子信标实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。根据ASFVB646L基因序列的保守区域设计特异性引物和分子信标探针,通过反应体系和反应条件的优化,建立标准曲线,测定本方... 详细信息

本试验旨在利用新型荧光探针-分子信标建立一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的分子信标实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。根据ASFVB646L基因序列的保守区域设计特异性引物和分子信标探针,通过反应体系和反应条件的优化,建立标准曲线,测定本方法的敏感性、特异性和重复性;并通过检测207份临床样本,比较本方法与国家标准qPCR方法和商品化ASF检测试剂盒之间的符合率以及得出kappa系数。结果显示,该方法标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.9974,最低检出浓度为1 copies/μL,且与5种常见猪源病原体之间无交叉反应,组内与组间的变异系数均小于1.81%;临床样品检测结果显示,本方法与国家标准qPCR方法和商品化ASF检测试剂盒的总体符合率分别为97.10%和98.55%,kappa系数分别为0.9104和0.9556。结果表明,本试验建立的ASFV检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好、检测结果可靠,为ASF的检测和该病的防控提供了技术支持。

关键词：非洲猪瘟病毒分子信标实时荧光定量检测方法

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金荞麦的药理作用及在动物生产中的应用

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草业科学 2023年第9期40卷 2411-2423页

作者：杨亭陈小连胡利珍邹志恒韦启鹏文虹江西省农业科学院畜牧兽医研究所南昌江西330200 江西省农业技术推广中心南昌江西330046

金荞麦(Fagopyrumdibotrys)作为中国传统的中草药,含有酚类、黄酮类等多种生物活性成分,具有多种生物调节功能,包括调节糖脂代谢、抗氧化、抗菌和抗肿瘤等作用。金荞麦作为肉鸡饲料中批准使用的中草药,具有一定的抗生素替代性。在动物... 详细信息

金荞麦(Fagopyrumdibotrys)作为中国传统的中草药,含有酚类、黄酮类等多种生物活性成分,具有多种生物调节功能,包括调节糖脂代谢、抗氧化、抗菌和抗肿瘤等作用。金荞麦作为肉鸡饲料中批准使用的中草药,具有一定的抗生素替代性。在动物生产中,金荞麦作为饲料添加剂不仅可以提高动物的免疫和抗氧化能力,还可提高动物的生产水平,同时金荞麦的茎叶也可以开发为非常规饲料原料,缓解饲料原料短缺现状。本文就金荞麦的药理作用及在动物生产中的应用进行综述,为金荞麦的开发利用提供参考依据。

关键词：生物活性抗炎抗菌肠道健康抗氧化糖脂代谢抗肿瘤动物生产

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内源性绵羊肺腺瘤病毒LTR转录调控元件的筛选

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中国兽医科学 2025年第06期 813-819页

作者：马鑫淇杜晓悦段续接张培陈思旭刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物临床诊疗技术重点实验室内蒙古自治区基础兽医学重点实验室

为了筛选内源性绵羊肺腺瘤病毒（enJSRV）长末端重复序列（LTR）转录调控的元件，本研究利用同源重组技术以本实验室保存的pGL4.10/enJSRVLTR为模板构建enJSRVLTR截短突变质粒，利用双荧光素酶报告基因系统筛选出enJSRVLTR启动子核心区... 详细信息

为了筛选内源性绵羊肺腺瘤病毒（enJSRV）长末端重复序列（LTR）转录调控的元件，本研究利用同源重组技术以本实验室保存的pGL4.10/enJSRVLTR为模板构建enJSRVLTR截短突变质粒，利用双荧光素酶报告基因系统筛选出enJSRVLTR启动子核心区域，通过生物信息学软件预测enJSRVLTR启动子核心区域潜在转录因子结合位点并构建其真核表达质粒，利用双荧光素酶报告基因系统分别检测其对enJSRVLTR启动子活性的影响。测序结果表明，pGL4.10/enJSRVLTR截短突变质粒构建成功；荧光素酶活性检测结果表明，pGL4.10/enJSRVLTR在-118bp～-43bp区域启动子活性显著下降（P<0.001）；提示该区域存在LTR启动子正调控元件；Flag/SOX17、Flag/EZH2、Flag/FOXM1、Flag/ZNF143真核表达质粒构建成功，其中，过表达SOX17可显著提高enJSRVLTR的启动子活性(P<0.001)。上述结果表明，本研究鉴定了enJSRVLTR核心启动子区域，并确定转录因子SOX17可直接促进enJSRVLTR转录。这些发现为enJSRV转录调控的分子机制研究提供了依据，并促进了JSRV研究领域的深入研究。

关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒长末端重复序列双荧光素酶报告基因系统 SOX17

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竹叶黄酮对鸡胚接种新城疫疫苗免疫效果的影响

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中国畜牧兽医 2024年第9期51卷 4174-4181页

作者：姜鑫瑞冯贺龙杨宏春蒋立人汪宏才曾哲左波张腾飞罗青平商雨温国元华中农业大学动物科学技术学院/动物医学院武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北重点实验室武汉430064 广西大学动物科学技术学院南宁530004 湖北洪山实验室武汉430070

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫... 详细信息

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C疫苗株)和BLF+TS组(注射0.1 mL含2%BLF和103.0 EID 50/0.1 mL的NDV TS09-C疫苗株的混合液),每组36枚种蛋。试验期间,统计种蛋的孵化率和雏鸡的存活率,在雏鸡7、14、21、28日龄时,每组随机选取3只进行屠宰,采集脾脏、法氏囊、胸腺组织,统计免疫器官指数;采集雏鸡翅下静脉血液,测定血清抗体和细胞因子水平;在雏鸡28日龄时使用NDV强毒株F48E9进行攻毒保护试验,攻毒后每天观察试验雏鸡状态,记录体重变化情况,并于攻毒后第3天每组随机选取3只雏鸡进行屠宰,取十二指肠、肺脏和气管组织并检测雏鸡不同组织病毒载量。【结果】鸡胚接种后,BLF+TS组雏鸡孵化率为100%,存活率为97.22%。与TS组相比,21~28日龄时BLF+TS组雏鸡的脾脏、法氏囊和胸腺指数以及血清中白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量均显著升高(P<0.05)。攻毒试验结果显示,攻毒后BLF+TS组雏鸡存活率为100%,攻毒后2~4 d BLF+TS组雏鸡体重增长速度显著低于健康对照组(P<0.05);攻毒后3~7 d时BLF+TS雏鸡体重增长速度显著高于TS组(P<0.05)。BLF+TS组雏鸡攻毒后呼吸道和消化道组织的病毒载量显著低于TS组(P<0.05)。【结论】BLF作为免疫佐剂可安全进行鸡胚接种,而且能够帮助雏鸡建立早期免疫保护,进一步提高ND疫苗免疫效果,研究结果为开发高效鸡胚免疫疫苗佐剂提供借鉴和参考。

关键词：鸡胚接种竹叶黄酮新城疫疫苗疫苗佐剂

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非洲猪瘟诊断技术研究进展

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中国动物检疫 2022年第1期39卷 82-89页

作者：苗春李伟杨思成邵军军常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

非洲猪瘟防控目前暂无安全有效疫苗可用,因此快速、可靠的检测方法对其防控至关重要。目前应用的非洲猪瘟诊断技术主要表现在病原、核酸、抗原与抗体四个方面:病原检测主要有红细胞吸附和病毒分离方法,核酸检测目前已开发出实时荧光定量... 详细信息

非洲猪瘟防控目前暂无安全有效疫苗可用,因此快速、可靠的检测方法对其防控至关重要。目前应用的非洲猪瘟诊断技术主要表现在病原、核酸、抗原与抗体四个方面:病原检测主要有红细胞吸附和病毒分离方法,核酸检测目前已开发出实时荧光定量PCR(qPCR)、多重PCR(mPCR)、微滴数字PCR(ddPCR)、巢氏PCR(nested-PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、交叉引物扩增技术(CPA)、原位杂交技术(ISH)以及生物传感器技术等,抗原检测常用荧光抗体试验(FAT)、抗原ELISA、侧向流动免疫色谱分析(LFA)等,而抗体检测主要通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光抗体试验(IFA)、胶体金快速免疫层析法(GICA)、免疫印迹法(IBT)等方法。每种诊断技术都有其特点,从而为不同情况下的A SFV诊断提供了多种选择。未来,其他技术如CRISPR等与上述技术的结合应用,以及不同诊断技术的联合应用,将成为非洲猪瘟诊断技术发展的趋势。

关键词：非洲猪瘟病毒病原学检测血清学检测联合应用

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