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中国饲料 2023年第21期 189-194页

作者：孔静郑楠赵圣国中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193

为揭示橘皮提取物对奶牛瘤胃体外发酵参数的影响,本试验采用体外批次培养法,选用3头健康、装有瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛用于瘤胃液的采集。试验分为2组,每组3个重复。对照组添加0.6 mL 80%甲醇,试验组添加0.6 mL橘皮提取液。分别在体外培养... 详细信息

为揭示橘皮提取物对奶牛瘤胃体外发酵参数的影响,本试验采用体外批次培养法,选用3头健康、装有瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛用于瘤胃液的采集。试验分为2组,每组3个重复。对照组添加0.6 mL 80%甲醇,试验组添加0.6 mL橘皮提取液。分别在体外培养6、12、24 h和48 h记录产气量,发酵48 h后,测定瘤胃发酵参数。结果表明:(1)试验组发酵液pH较对照组降低1.51%(P<0.05)。(2)试验组产气量较对照组提高55.99%(P<0.05),试验组发酵液尿素氮浓度较对照组提高83.97%(P<0.05),试验组发酵液丙酸浓度较对照组提高21.44%(P<0.05),试验组发酵液戊酸浓度较对照组提高37.14%(P<0.05)。综上,添加橘皮提取物可有效调控瘤胃微生物发酵状态。

关键词：橘皮提取物黄酮瘤胃发酵

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不同发情阶段水牛唾液的DIA定量蛋白组学分析

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畜牧兽医学报 2024年第11期55卷 5072-5084页

作者：余洲杨柏高李崇阳张培培曹建华牛一凡覃广胜赵学明中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业科学院广西壮族自治区水牛研究所南宁530001

旨在利用高通量DIA定量蛋白组学分析不同发情阶段水牛唾液中蛋白的差异。本研究将15头体况相近(平均体重为650~750 kg),发情正常,健康状态良好的2~5胎次的尼里-拉菲母水牛作为研究对象,在相同的管理条件下,对其注射氯前列醇并计为第0天... 详细信息

旨在利用高通量DIA定量蛋白组学分析不同发情阶段水牛唾液中蛋白的差异。本研究将15头体况相近(平均体重为650~750 kg),发情正常,健康状态良好的2~5胎次的尼里-拉菲母水牛作为研究对象,在相同的管理条件下,对其注射氯前列醇并计为第0天,分别在发情前期(第1天)、发情期(第3天)、发情后期(第6天)早上饲喂之前(08:00-11:00)进行唾液的采集,唾液样本每个发情时期分组相同,每3头牛分为一组,共分为5组,样品处理后进行DIA定量蛋白组学检测。结果显示,不同发情阶段水牛的唾液中共定量到1982个蛋白质,分别在发情期/发情前期和发情期/发情后期比较组中鉴定到59和38个差异丰度蛋白。功能分析发现,CBL、SOD1、SPP1和ARPC1B等蛋白质可能在细胞调控和抗氧化、维持细胞间相互作用等方面发挥作用。KEGG通路分析显示,发情前期、发情期和发情后期水牛唾液差异丰度蛋白被富集到mTOR信号通路、孕酮介导的卵母细胞成熟等通路上。综上,通过不同发情阶段的对比,获得与繁殖相关的差异蛋白4个,CBL、ARPC1B、SOD1和SPP1。这些唾液中的差异丰度蛋白可能作为水牛发情生物标志物的关键蛋白,进而为开发水牛发情检测诊断试剂盒提供数据支撑。

关键词：水牛发情鉴定唾液蛋白组学

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肉鸭对糖渣和酱油渣养分利用率评定

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中国畜牧兽医 2024年第11期51卷 4833-4841页

作者：吴占月郭艳红庄蕾王宁鹿震涛任雯雯徐彤王岐蒙牛志力曹俊婷吴永保吴森闻治国青海大学畜牧兽医科学院西宁810016 中国农业科学院饲料研究所农业农村部饲料生物技术重点实验室北京100081

【目的】试验旨在对糖渣和酱油渣进行营养价值评定,测定其在肉鸭中的营养物质消化率、代谢能和回肠氨基酸消化率。【方法】代谢能及养分消化率采用排空-强饲法测定,共选取24只肉鸭,随机分为糖渣组和酱油渣组,每组12个重复,每重复1只鸭,... 详细信息

【目的】试验旨在对糖渣和酱油渣进行营养价值评定,测定其在肉鸭中的营养物质消化率、代谢能和回肠氨基酸消化率。【方法】代谢能及养分消化率采用排空-强饲法测定,共选取24只肉鸭,随机分为糖渣组和酱油渣组,每组12个重复,每重复1只鸭,强饲量为60 g,排空和集粪时间均为48 h,收集肉鸭粪便样品,测定干物质、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量和总能。使用无氮饲粮法和回肠末端法测定回肠氨基酸消化率,选取60只肉鸭,随机分为糖渣组、糖渣无氮饲粮组、酱油渣组和酱油渣无氮饲粮组,每组5个重复,每重复3只鸭,适应期3 d后分别饲喂试验饲料,4 h后统一屠宰取回肠内容物,测定氨基酸含量。【结果】糖渣中干物质含量为89.70%、粗蛋白质为21.98%、总能为26.47 MJ/kg;酱油渣中干物质含量为89.53%,粗蛋白质含量为26.65%,总能为24.06 MJ/kg。代谢试验结果表明,糖渣和酱油渣在肉鸭中的表观代谢能分别为18.09和8.59 MJ/kg,干物质消化率分别为57.46%和44.61%,粗脂肪消化率分别为84.88%和84.43%。回肠氨基酸消化率结果显示,糖渣和酱油渣试验中表观回肠消化率最高的是赖氨酸,分别为92.75%和55.60%。【结论】糖渣和酱油渣粗蛋白质含量高,氨基酸含量和组成丰富,肉鸭对粗脂肪和粗蛋白质利用率较高,可以开发作为肉鸭饲料原料应用在生产中。

关键词：糖渣酱油渣肉鸭氨基酸回肠消化率非常规饲料原料

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基于猪细小病毒6型VP1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用

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农业生物技术学报 2024年第6期32卷 1462-1470页

作者：欧云文潘琴汪洋代军飞任绍科张洋张杰开江县动物疫病预防控制中心中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室

猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6, PPV6)是一种新发现的猪细小病毒，可导致猪(Sus scrofa)出现繁殖障碍，严重威胁养猪业健康发展。为建立一种检测PPV6抗体的间接ELISA方法，本研究以PPV6流行毒株高度保守的病毒颗粒蛋白(virio... 详细信息

猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6, PPV6)是一种新发现的猪细小病毒，可导致猪(Sus scrofa)出现繁殖障碍，严重威胁养猪业健康发展。为建立一种检测PPV6抗体的间接ELISA方法，本研究以PPV6流行毒株高度保守的病毒颗粒蛋白(virion protein, VP1)(348～675 aa)的编码基因为目标片段，构建原核表达载体pET30a-PPV6-VP1，转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达，进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化，获得具有良好的反应原性的重组VP1蛋白，大小约为40 k D。基于纯化的重组VP1蛋白建立间接ELISA抗体检测方法，优化出最佳抗原包被浓度为1 ng/μL，待检血清最佳稀释比例为1∶100,HRP-兔抗猪IgG稀释比例为1∶60 000，阳性临界值OD450>0.62。该间接ELISA检测方法与猪蓝耳病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、古典猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)、PPV1阳性猪血清均不发生交叉反应，敏感度达1∶3 200，批内变异系数和批间变异系数均<10%，与病毒中和试验(virus neutralization test, VNT)结果呈正相关，与Western blot结果的阳性符合率为96.6%，表明该间接ELISA检测方法拥有良好的特异性、敏感性、重复性和符合率。采用建立的间接ELISA方法对2018～2022年中国西部地区部分省份收集的452份猪血清进行检测，结果显示样品阳性率为5.31%，表明该病在我国西部地区存在不同程度的感染。本研究成功截短表达了PPV6 VP1 (348～675 aa)蛋白，建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PPV6间接ELISA方法，为PPV6的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。

关键词：猪细小病毒6型(PPV6) VP1蛋白截短表达 ELISA

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宿主蛋白SIRT5在代谢和疾病进程中的作用

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中国兽医科学 2024年第2期54卷 261-266页

作者：陈国辉史喜绢杨行张大俊赵登率闫文倩陈玲玲别鑫恬赵美玉赵思越何路刘湘涛郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控国家重点实验室甘肃兰州730046

SIRT5作为Sirtuins家族的成员之一,是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)的赖氨酸去酰化酶,具有去乙酰化、去琥珀酰化、去丙二酰化、去戊二酰化酶活性。SIRT5是细胞稳态的重要调节因子,参与调节不... 详细信息

SIRT5作为Sirtuins家族的成员之一,是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)的赖氨酸去酰化酶,具有去乙酰化、去琥珀酰化、去丙二酰化、去戊二酰化酶活性。SIRT5是细胞稳态的重要调节因子,参与调节不同代谢过程中蛋白质的活性,例如:糖酵解、三羧酸循环(TCA循环)、脂肪酸-β氧化、活性氧(ROS)解毒等。SIRT5还可以充当肿瘤激活或抑制因子,在神经退行性疾病中发挥重要作用。此外,SIRT5亦可在抗病毒天然免疫反应中起关键作用。本文通过对SIRT5的结构、酶活性、生物学功能以及在疾病进程中发挥的作用进行综述,以全面了解SIRT5研究现状。

关键词： SIRT5 酶活性代谢肿瘤天然免疫

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过表达HDAC6基因的Vero细胞系建立及其对狂犬病病毒增殖效率评价

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中国兽医科学 2023年第2期53卷 150-155页

作者：殷娟斌张志雄王莎莎马小琴梁正基孙跃峰王相伟殷相平中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

为提高狂犬病病毒(rabies virus,RABV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)过表达的Vero/HDAC6细胞系,分析RABV在Vero/HDAC6细胞系与Vero细胞中的复制差异。首先以非洲绿猴... 详细信息

为提高狂犬病病毒(rabies virus,RABV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)过表达的Vero/HDAC6细胞系,分析RABV在Vero/HDAC6细胞系与Vero细胞中的复制差异。首先以非洲绿猴HDAC6基因为目标构建重组质粒plv-SV40-puro-3×flag-HDAC6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装。将包装好的慢病毒感染Vero细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达HDAC6基因的阳性细胞。利用TCID50和Western-blot技术检测RABV在Vero/HDAC6细胞系中的复制能力。结果表明,过表达HDAC6能够明显促进RABV复制,并且RABV在Vero/HDAC6细胞系中的增殖能力高于野生型细胞。本研究构建的Vero/HDAC6细胞系能显著促进RABV的增殖,为RABV疫苗候选细胞株奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒 HDAC6 Vero细胞慢病毒包装过表达细胞系

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体外法优化玉米——杂粕型饲粮的非淀粉多糖酶谱及其对育肥猪肠道微生物的影响

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中国农业科学 2022年第16期55卷 3242-3255页

作者：邓富丽申丹钟儒清张顺芬李滔孙曙东陈亮张宏福中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室湖南友联禾邦生物技术有限公司

【目的】利用体外模拟法优化玉米—杂粕型饲粮的非淀粉多糖（NSP）酶谱，并分析优化的非淀粉多糖酶谱对饲粮养分消化率和育肥猪肠道微生物组成和结构的影响，为饲粮高效利用和精准饲养提供数据支撑和理论参考。【方法】试验一在育肥猪... 详细信息

【目的】利用体外模拟法优化玉米—杂粕型饲粮的非淀粉多糖（NSP）酶谱，并分析优化的非淀粉多糖酶谱对饲粮养分消化率和育肥猪肠道微生物组成和结构的影响，为饲粮高效利用和精准饲养提供数据支撑和理论参考。【方法】试验一在育肥猪玉米—杂粕型饲粮中分别添加不同水平的木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、α-半乳糖苷酶、β-甘露聚糖酶和果胶酶6种NSP酶，采用胃—小肠体外模拟法测定体外回肠干物质消化率（IVIDMD）；取IVIDMD达到最大值时各NSP酶的添加水平为该NSP酶0编码水平，按照六元二次回归正交旋转组合设计，进行体外消化试验，建立IVIDMD与NSP酶添加量的六元二次回归方程，筛选出玉米—杂粕型饲粮最优NSP酶谱（OEC）；利用胃—小肠—大肠体外模拟消化法分析测定添加OEC前后饲粮的体外干物质消化率（IVDMD）、体外能量消化率（IVGED）和体外消化能（IVDE），以验证OEC的效果。试验二按照单因素完全随机设计，选用16头健康、体重相近去势公猪（117.8±1.66 kg），随机分为2个处理组，每个处理8头猪，对照组饲喂玉米—杂粕型基础饲粮，加酶组在基础饲粮中添加OEC；在试验开展第18天采用直肠擦拭法采集猪新鲜粪便，利用16S rRNA基因高通量测序对粪便微生物菌群的多样性及相对丰度进行分析，并进行功能预测。【结果】（1）在本试验条件下，玉米—杂粕型饲粮OEC为：纤维素酶1 003 U·kg-1、木聚糖酶18 076 U·kg-1、β-葡聚糖酶1 377 U·kg-1、β-甘露聚糖酶14 765 U·kg-1、α-半乳糖苷酶337 U·kg-1和果胶酶138 U·kg-1;（2）在玉米—杂粕型饲粮中添加OEC使IVDMD由73.44%显著提高到76.26%（P<0.01）,IVGED由74.03%显著提高到76.45%（P=0.01）,IVDE由14.97 MJ·kg-1显著提高到15.58 MJ·kg-1（P<0.01）;（3）在门水平上，共筛选出了12个相对丰度大于0.1%的菌门，其中Bacteroidota（拟杆菌门）、Firmicutes（厚壁菌门）和Spirochaetota（螺旋体门）为优势菌门，三者之和在组内占比达96%以上；（4）在属水平上，饲粮中添加OEC显著增加norank＿f＿F082,norank＿f＿Bacteroidales＿RF16＿group,Bacteroides（拟杆菌属）和Roseburia（氏菌属）的相对丰度（P<0.05）,Eubacterium＿ruminantium＿group（P=0.083）有增加的趋势，而Oscillibacter（颤杆菌克）的相对丰度显著降低（P<0.05）,Clostridium＿sensu＿stricto＿1和norank＿f＿＿norank＿o＿＿WCHB1-41（P=0.083）有降低的趋势（P=0.052）。【结论】饲粮中添加体外法优化的NSP酶谱，显著提高了育肥猪玉米—杂粕型饲粮干物质和能量的体外消化率以及体外消化能，增加了纤维分解菌和产丁酸菌等有益菌在育肥猪肠道微生物中的占比，在一定程度上减少了有害菌的数量，优化了肠道微生态。

关键词：非淀粉多糖酶谱体外法育肥猪养分消化肠道微生物

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牛传染性鼻气管炎病毒gB ELISA抗体与中和抗体相关性分析

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中国动物传染病学报 2023年第3期31卷 172-177页

作者：史喜绢申超超张大俊杨博张婷郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)是牛传染性鼻气管炎(IBR)的病原体,常引起流产和呼吸道感染等综合征,给养牛业造成了巨大经济损失。gB作为IBRV中最保守的抗原蛋白,是IBRV诊断的重要靶蛋白。为探究牛gB–ELISA抗体水平与VNT效价的相关性,本... 详细信息

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)是牛传染性鼻气管炎(IBR)的病原体,常引起流产和呼吸道感染等综合征,给养牛业造成了巨大经济损失。gB作为IBRV中最保守的抗原蛋白,是IBRV诊断的重要靶蛋白。为探究牛gB–ELISA抗体水平与VNT效价的相关性,本研究采用阻断ELISA和VNT两种不同的方法对某一牛场50份血清进行IBRV gB ELISA抗体检测和中和抗体测定。gB ELISA结果显示,阳性血清19份,阴性血清31份;中和抗体结果阳性17份,阴性33份。通过统计学相关系数分析,gB抗体阻断率和中和抗体效价值的相关系数为1.0,从而说明IBRV gB ELISA抗体和中和抗体呈较强的正相关。本研究为使用IBRV gB ELISA抗体水平评估牛群中IBRV抗体保护效果提供理论依据。

关键词：传染性鼻气管炎病毒 gB ELISA抗体中和抗体相关性

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小反刍兽疫检测方法的研究进展

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中国兽医科学 2023年第3期53卷 359-365页

作者：李静刘振东孙跃峰窦永喜中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046

小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)感染绵羊、山羊等小反刍动物引起的一种高度致死性病毒病,其流行不仅给全球养羊业造成了巨大经济损失,而且严重威胁野生小反刍类动物的生存和繁衍。根除PPR已成为世界各国的共同目标,在此过程... 详细信息

小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)感染绵羊、山羊等小反刍动物引起的一种高度致死性病毒病,其流行不仅给全球养羊业造成了巨大经济损失,而且严重威胁野生小反刍类动物的生存和繁衍。根除PPR已成为世界各国的共同目标,在此过程中除了有效的疫苗作为保障外,准确、快速的检测方法也是必不可少的关键手段,是PPR根除计划的重要组成部分。目前已建立多种PPRV检测方法,在PPR防控中发挥了重要作用。本文对现有PPR检测方法进行了总结和比较,并对未来发展趋势进行了展望,以期为PPR新型检测方法尤其是新型病原和核酸检测方法的建立和试剂研制提供参考。

关键词：小反刍兽疫抗原检测抗体检测核酸检测

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抗氧化剂在家禽精液储存中的应用研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 913-923页

作者：姜丽君宗云鹤李云雷陈继兰耿照玉孙研研金四华安徽农业大学动物科技学院合肥230036 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽生物育种全国重点实验室北京100193

家禽精液储存对于种质资源的保护和维持家禽养殖业的可持续发展至关重要。家禽精子独特的结构特征,使得其在储存过程中特别容易受到氧化应激损伤,抗氧化系统失衡,导致精子活力和受精能力的下降。因此,为保证精子正常功能,可通过额外添... 详细信息

家禽精液储存对于种质资源的保护和维持家禽养殖业的可持续发展至关重要。家禽精子独特的结构特征,使得其在储存过程中特别容易受到氧化应激损伤,抗氧化系统失衡,导致精子活力和受精能力的下降。因此,为保证精子正常功能,可通过额外添加不同类型的抗氧化剂来降低损伤。本综述旨在介绍家禽精子结构特征及其抗氧化系统特点,并总结了抗氧化剂在家禽精液储存中的应用与效果,以期为家禽精液储存技术研究提供参考。

关键词：抗氧化剂氧化应激家禽精子精液储存

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