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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：张文龙殷喆王君伟杨涛吴东来农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学动物医学学院

茨城病病毒(Ibaraki virus,IBAV)是呼肠孤病毒科、环状病毒属成员。其VP7蛋白保守程度高,适宜作为茨城病(Ibaraki disease,IBAD)血清学检测方法的诊断抗原。本研究克隆了VP7蛋白抗原性、亲水性较强部分的编码基因,并在原核表达系统中表... 详细信息

茨城病病毒(Ibaraki virus,IBAV)是呼肠孤病毒科、环状病毒属成员。其VP7蛋白保守程度高,适宜作为茨城病(Ibaraki disease,IBAD)血清学检测方法的诊断抗原。本研究克隆了VP7蛋白抗原性、亲水性较强部分的编码基因,并在原核表达系统中表达了可溶性截短VP7蛋白。用表达的重组蛋白初步建立了IBAD间接ELISA检测方法。

关键词：茨城病截短VP7蛋白间接ELISA

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茨城病病毒S7基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立

茨城病病毒S7基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：张文龙殷喆王君伟杨涛吴东来农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨 150030 东北农业大学动物医学学院哈尔滨 150030 农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨 150001

关键词：茨城病病毒蛋白抗原性编码基因原核表达系统

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鸡IFN-γDNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

鸡IFN-γDNA-壳聚糖纳米粒的制备及体外转染

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：殷喆张文龙刘霓红杨涛步志高王君伟吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030

构建了携带鸡干扰素(IFN-)重组真核表达质粒pCAGGS-ChIFNr-,制备成承载pCAGGS-ChlFN- 的壳聚糖纳米粒子。透射电镜观察制备的纳米粒子呈不规则球形,光子相关色谱(PCS)仪测定显示纳米粒子的平均粒径为172.6+5.1nm;Zeta电位为20.8±2.... 详细信息

构建了携带鸡干扰素(IFN-)重组真核表达质粒pCAGGS-ChIFNr-,制备成承载pCAGGS-ChlFN- 的壳聚糖纳米粒子。透射电镜观察制备的纳米粒子呈不规则球形,光子相关色谱(PCS)仪测定显示纳米粒子的平均粒径为172.6+5.1nm;Zeta电位为20.8±2.9mV;载基因纳米粒子的重组质粒DNA包埋效率和载药量分别为91.21±2.54％和31.93±0.16％。载基因壳聚糖纳米粒子可以有效地保护重组质粒DNA,防止核酸酶对其的降解作用,并能良好的从纳米粒子中释放重组质粒DNA。CEF细胞体外转染实验表明：包裹后的纳米粒子对细胞基本无毒性,使携带的外源基因能在CEF细胞中正确表达,其转染效率约为阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM2000 Reagent的1/6。

关键词：壳聚糖纳米颗粒鸡γ-干扰素基因体外转染真核表达

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新城疫病毒F蛋白碱裂解位点修饰及外源基因的插入对新城疫LaSota疫苗株致病力的影响

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微生物学报 2008年第3期48卷 362-368页

作者：王永葛金英解希帝丁玉林步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 哈尔滨医科大学公共卫生学院哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特010018

新城疫是危害养禽业发展的重要传染病。新城疫病毒(NDV)具有高度传染性和高致病性,融合蛋白(F)的F1/F2裂解位点存在多个碱性氨基酸并由此形成的泛组织嗜性一直以来被认为是NDV致病的主要决定因素。本研究利用已经构建NDV弱毒LaSota疫苗... 详细信息

新城疫是危害养禽业发展的重要传染病。新城疫病毒(NDV)具有高度传染性和高致病性,融合蛋白(F)的F1/F2裂解位点存在多个碱性氨基酸并由此形成的泛组织嗜性一直以来被认为是NDV致病的主要决定因素。本研究利用已经构建NDV弱毒LaSota疫苗株反向遗传操作平台,将LaSota病毒F蛋白的碱裂解位点由GGRQGR↓L分别突变为GRRQRR↓F和GRRQRR↓L,在未加入TPCK胰酶的情况下分别成功拯救出突变修饰LaSota疫苗病毒株rL-FmF和rL-FmL,通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)等指标对其毒力进行评估,结果rL-FmF和rL-FmL的ICPI值由LaSota的0.36分别上升为1.18和1.05,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0,表明碱裂解位点的突变可显著增强致病力。为了检测外源基因插入对病毒致病力的影响,进一步以rL-FmF为载体,分别构建并拯救出表达H5亚型禽流感病毒血凝素HA和增强绿色荧光蛋白EGFP基因的重组病毒rL-FmF-HA和rL-FmF-EGFP,经测定ICPI分别为0.67和1.10,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0。结果表明,对rLaSota病毒F蛋白裂解位点2个非碱性氨基酸突变为碱性氨基酸,无论F2蛋白氨基端为F或L,均可显著增强其脑内接种致病力,接近中发型毒株标准,但对静脉内接种致病能力均无显著影响,而对鸡胚致死能力均保持rLaSota病毒缓发型特点(MDT≥90);外源基因的重组、表达可不同程度致弱病毒,其致弱程度与外源基因及其表达产物性质有关。结果提示,影响NDV致病力不仅仅局限于F蛋白裂解位点氨基酸序列;通过F裂解位点修饰及HA基因插入可以获得致病力较高但基本接近缓发型标准的重组病毒。

关键词：新城疫病毒裂解位点突变修饰基因重组表达致病力

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新发烈性人兽共患传染病及其防控技术研究进展

新发烈性人兽共患传染病及其防控技术研究进展

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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

全球化与气候的改变使得新发烈性传染病原不断突破地域、生态及宿主条件的限制。类似拉沙出血热、马尔堡出血热、埃博拉出血热、裂谷热、尼帕病毒性脑炎等危害程度最高的烈性病毒性人兽共患传染病,其感染发病、致死率可达50%～90%,对我... 详细信息

全球化与气候的改变使得新发烈性传染病原不断突破地域、生态及宿主条件的限制。类似拉沙出血热、马尔堡出血热、埃博拉出血热、裂谷热、尼帕病毒性脑炎等危害程度最高的烈性病毒性人兽共患传染病,其感染发病、致死率可达50%～90%,对我国的威胁将不再遥不可及。这些烈性病原不仅可通过与病畜(人)、尸体、

关键词：人兽共患传染病防控技术烈性传染病

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拼接信号序列单碱基变异提高马传染性贫血病毒mRNA拼接效率

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病毒学报 2003年第4期19卷 336-341页

作者：刘相冬张宝山王滨有杨威孙成群周家喜王凯波孔宪刚哈尔滨医科大学公共卫生学院哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

分别以马传染性贫血(马传贫)驴强毒(D-AEIAV)RNA和马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLAEIAV)RNA为模板,利用RT-PCR的方法,克隆到马传贫强、弱毒株基因组外显子-2及其下游的核苷酸序列。然后将报告基因CAT插入到EIAV内含子2env阅读框架中,构成CA... 详细信息

分别以马传染性贫血(马传贫)驴强毒(D-AEIAV)RNA和马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLAEIAV)RNA为模板,利用RT-PCR的方法,克隆到马传贫强、弱毒株基因组外显子-2及其下游的核苷酸序列。然后将报告基因CAT插入到EIAV内含子2env阅读框架中,构成CAT拼接报告系统。同时在强毒株重组表达质粒的基础上,将其外显子-3上游拼接受体位点的核苷酸序列CAG突变为弱毒株相应位置的核苷酸序列TAG,得到强毒单核苷酸突变株重组表达质粒。用构建的3个重组表达质粒DNA转染驴血白细胞,ELISA检测转染细胞CAT浓度。结果表明:EIAV强毒株重组表达质粒中CAT蛋白表达量最高,EIAV强毒株重组表达质粒次之,EIAV强毒突变株重组表达质粒最低。由于CAT基因被插入于各重组质粒中的EIAV内含子-2里,EIAV外显子-2、3之间的拼接可导致该基因的删除,因而其拼接效率低于EIAVmRNA外显子-2、3之间的拼接效率。实验数据表明,EIAVSA2拼接信号序列单碱基变异提高了SD2-SA2拼接效率;D-AEIAVSA2-SD2拼接效率比DLAEIAV相应位点拼接效率高。

关键词：马传染性贫血病毒 mRNA拼接效率拼接信号 Rev

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马传染性贫血病毒基因组部分转录图谱

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病毒学报 2001年第3期17卷 245-249页

作者：刘相冬张宝山孔宪刚王滨有孙成群刘永刚周家喜王凯波刘建华哈尔滨医科大学公共卫生学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

以马传贫驴白细胞弱毒和驴强毒分别接种培养细胞和试验动物 ,分别在体外和体内条件下 ,对病毒的各种转录产物进行克隆和序列分析。通过与病毒基因组的序列进行比较 ,用实验的方法绘制出了两株病毒在相应试验条件下的转录图谱 ,确定了各... 详细信息

以马传贫驴白细胞弱毒和驴强毒分别接种培养细胞和试验动物 ,分别在体外和体内条件下 ,对病毒的各种转录产物进行克隆和序列分析。通过与病毒基因组的序列进行比较 ,用实验的方法绘制出了两株病毒在相应试验条件下的转录图谱 ,确定了各拼接产物的外显子构成以及拼接供体和拼接受体位点的具体位置。发现两种病毒在外显子 3的上游拼接受体位点 (SA2 )的位置与已报道的EIAV毒株均不相同。

关键词：马传染性贫血病毒转录图谱拼接位点拼接信号病毒基因组

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马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗gag基因的序列测定及分析

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病毒学报 2000年第4期16卷 361-364页

作者：杨威张宝山刘永刚刘胜旺孔宪刚曹殿军刘相冬卢景良刘宝全刘建华东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学公共卫生学院黑龙江哈尔滨150001

以马传染性贫血病毒 (EIAV)驴白细胞弱毒疫苗株 (DLA)病毒基因组RNA为材料 ,用RT PCR方法扩增出EIAVgag基因 ,经平端连接将其克隆到质粒载体 pUC19中。由于疫苗不是克隆株 ,因此通过 5次单独克隆与测序 ,推导出EIAV DLA gag基因的优势... 详细信息

以马传染性贫血病毒 (EIAV)驴白细胞弱毒疫苗株 (DLA)病毒基因组RNA为材料 ,用RT PCR方法扩增出EIAVgag基因 ,经平端连接将其克隆到质粒载体 pUC19中。由于疫苗不是克隆株 ,因此通过 5次单独克隆与测序 ,推导出EIAV DLA gag基因的优势序列。gag基因全长 145 8个碱基 ,编码一 486个氨基酸残基的前体蛋白。与美国EIAVWyoming 136 9株比较 ,核苷酸同源性为 80 % ,氨基酸同源性为 84 47%。其中 ,衣壳蛋白P2 6的主要同源区 (MHR)、核衣壳蛋白P11的两个CCHC型锌指结构及酸性蛋白P9的YXXL基元为高度保守的结构。为进一步研究马传染性贫血病毒弱毒疫苗的致弱机理提供了理论依据。

关键词：马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒核苷酸序列

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