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流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,经有限稀释法获得1株特异性针对JEVE蛋白的杂交瘤细胞,命名为5D4,经测定5D4单抗亚类属于IgG2a,轻链为κ链。经Westernblot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEVE蛋白结合。结果表明,所制备的抗JEVE蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：赵付荣周东辉华荣虹王斌陈娜莎阿合买提·买买提步志高华南农业大学兽医学院广东广州 510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院广东广州 510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephaIitis virus，JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒AA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原，免疫6周龄BALB/c小鼠... 详细信息

流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephaIitis virus，JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒AA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原，免疫6周龄BALB/c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合，经有限稀释法获得1株特异性针对JEVE蛋白的杂交瘤细胞，命名为5D4，经测定5D4单抗亚类属于IgG2a，轻链为K链。经Westem blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEVE蛋白结合。结果表明，所制备的抗JEVE蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性，为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会2010学术年会暨第二届中国兽医临床大会

作者：赵付荣张桂红华荣虹周东辉步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院广东广州 510642 华南农业大学兽医学院广东广州 510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

@@流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis，JE)简称乙脑，是由乙型脑炎病毒引起的一种重要蚊媒性人兽共患传染病。JEV E蛋白是病毒粒子表面最重要的结构蛋白，其表面的抗原决定簇，具有血凝活性和中和活性。E蛋白与病毒的毒力、宿主范... 详细信息

@@流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis，JE)简称乙脑，是由乙型脑炎病毒引起的一种重要蚊媒性人兽共患传染病。JEV E蛋白是病毒粒子表面最重要的结构蛋白，其表面的抗原决定簇，具有血凝活性和中和活性。E蛋白与病毒的毒力、宿主范围、组织嗜性、膜融合、保护性免疫、血凝反应和血清特异性有关。单克隆抗体纯度高、专一性强、重复性好且能在动物体外或体内产生同质性抗体，以它作为诊断抗体能克服多克隆抗血清诊断时稳定性差及非特异性强等缺点，在生命科学领域中已经得到广泛的应用。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体

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5种脑炎类人兽共患病病毒多重PCR检测方法的建立

5种脑炎类人兽共患病病毒多重PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：蔡绪禹康晓平刘洪李裕昌孙恩成王凌凤杨涛刘霓红步志高李文京杨银辉吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物/生物安全国家重点实验室中国动物疫病预防控制中心

本研究建立了能同时检测5种人兽共患脑炎类病毒的多重PCR方法,包括流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)。根据GenBank登录的病毒基因组序列设计PCR特异引物... 详细信息

本研究建立了能同时检测5种人兽共患脑炎类病毒的多重PCR方法,包括流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)。根据GenBank登录的病毒基因组序列设计PCR特异引物,通过优化引物组合及PCR反应条件,成功建立了针对

关键词：人兽共患病 PCR 检测方法

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泛素基因介导下的猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因对小鼠的免疫试验

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微生物学报 2009年第6期49卷 799-806页

作者：张维军童铁钢白宇王群徐树兰孙庆歌田野杨涛童光志吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

【目的】获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV)M蛋白基因及其与泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合的真核表达质粒,并进一步研究Ub对M基因免疫效果的影响。【方法】利用RT-PCR技术以PRRSV C... 详细信息

【目的】获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV)M蛋白基因及其与泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合的真核表达质粒,并进一步研究Ub对M基因免疫效果的影响。【方法】利用RT-PCR技术以PRRSV CH-1a株和BALB/c小鼠脾脏组织总RNA为模板,分别扩增出PRRSVM蛋白基因与小鼠的Ub基因,利用SOE技术将PRRSVM基因与小鼠Ub基因进行融合,最终构建真核表达质粒pVAX1-M与pVAX1-U-M。以两种真核表达质粒DNA肌肉免疫BALB/c小鼠后,分别检测体液免疫反应与细胞免疫反应,比较M单基因与Ub-M融合基因DNA免疫所诱生的免疫应答强度【结果】IFA试验表明,pVAX1-M与pVAX1-U-M均能BHK-21细胞内成功表达目的基因;两种重组质粒免疫小鼠后均可诱生PRRSVELISA抗体与细胞免疫反应,但是pVAX1-U-M诱导的细胞免疫反应明显高于pVAX1-M,差异显著(P<0.05);而其诱导的抗体水平明显低于pVAX1-M,二者差异也显著(P<0.05)。【结论】泛素在一定程度上可以促进PRRSVM基因诱导细胞免疫反应,但对体液免疫未见到同样作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 M基因泛素体液免疫细胞免疫 DNA疫苗

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纳米Cu^2＋／TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的灭活效应

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功能材料 2009年第8期40卷 1403-1406页

作者：姜建芳崔海信杨涛蔡鸿昌吴东来中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所农业部农业环境与气候变化重点实验室北京100081 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

利用病毒滴度测定和MDCK细胞电镜观察法,初步探讨了在365nm的黑光灯(UV)照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的光催化灭活效应,并分别考察了UV强度、UV照射时间以及H9N2病毒量对H9N2病毒光催化灭活效应的影响。实验结果表明,... 详细信息

利用病毒滴度测定和MDCK细胞电镜观察法,初步探讨了在365nm的黑光灯(UV)照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的光催化灭活效应,并分别考察了UV强度、UV照射时间以及H9N2病毒量对H9N2病毒光催化灭活效应的影响。实验结果表明,在365nm黑光灯的照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对H9N2病毒具有显著的灭活效应,在UV强度为0.5mW/cm2、UV照射时间为2.5h、病毒量为0.1ml时,H9N2病毒的灭活率达到了100%。研究结果表明,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜在抑制禽流感(H9N2)病毒在环境媒介中的扩散与传播方面有潜在的应用价值。

关键词： Cu^2+/TiO2 禽流感病毒(H9N2) 光催化灭活效应

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含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测

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农业生物技术学报 2009年第1期17卷 7-11页

作者：王群刘光亮肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰吴东来农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

为了研究禽流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞,... 详细信息

为了研究禽流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞,利用间接免疫荧光法检测目的基因的瞬时表达;采用腿部肌肉注射途径将重组子免疫SPF鸡,利用ELISA检测免疫后血清抗NP蛋白抗体效价。结果表明,该重组子无论在体外还是体内均能正确表达禽流感NP蛋白,且所表达的蛋白均具有良好的免疫原性。

关键词：禽流感核蛋白真核表达载体血清抗体

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重组马白细胞介素-18生物学活性的测定及单克隆抗体中和活性鉴定

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农业生物技术学报 2009年第3期17卷 370-374页

作者：童铁钢白宇王群张维军刘光亮徐树兰林燕孙庆歌杨涛吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

应用实时荧光定量RT-PCR方法评价了大肠杆菌表达的重组马白细胞介素-18(rEIL-18)刺激马外周血单核细胞(PBMCs)产生马IFN-γ(EIFN-γ)的活性。在重组人IL-12(rhIL-12)的协同作用下,rEIL-18在体外刺激马PBMCs产生EIFN-γ的效应是阴性对照... 详细信息

应用实时荧光定量RT-PCR方法评价了大肠杆菌表达的重组马白细胞介素-18(rEIL-18)刺激马外周血单核细胞(PBMCs)产生马IFN-γ(EIFN-γ)的活性。在重组人IL-12(rhIL-12)的协同作用下,rEIL-18在体外刺激马PBMCs产生EIFN-γ的效应是阴性对照的20倍,并且在一定rhIL-12浓度的条件下,rEIL-18在体外诱导马PBMCs产生EIFN-γ的能力呈一定的剂量依赖性。此外,评价了制备的9株抗rEIL-18单克隆抗体中和rEIL-18的生物学活性的能力,证实其中1株可中和rEIL-18的生物学活性,并且呈一定的剂量依赖性。

关键词：马白细胞介素-18 生物学活性单克隆抗体

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西尼罗病毒NS1基因的原核表达与抗原性鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 592-595页

作者：马健男杨涛王群张维军徐青元田野林燕宋红梅步志高吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约... 详细信息

为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约为90ku,约占可溶性菌体蛋白质量的50%。利用直链淀粉树脂柱对MBP-NS1纯化后的重组蛋白的纯度达到60%,western blot和间接ELISA检测证明纯化的MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性,为进一步开展关于WNV NS1蛋白的研究奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 NS1基因原核表达

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