检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2009年第6期49卷 799-806页

作者：张维军童铁钢白宇王群徐树兰孙庆歌田野杨涛童光志吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

【目的】获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV)M蛋白基因及其与泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合的真核表达质粒,并进一步研究Ub对M基因免疫效果的影响。【方法】利用RT-PCR技术以PRRSV C... 详细信息

【目的】获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV)M蛋白基因及其与泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合的真核表达质粒,并进一步研究Ub对M基因免疫效果的影响。【方法】利用RT-PCR技术以PRRSV CH-1a株和BALB/c小鼠脾脏组织总RNA为模板,分别扩增出PRRSVM蛋白基因与小鼠的Ub基因,利用SOE技术将PRRSVM基因与小鼠Ub基因进行融合,最终构建真核表达质粒pVAX1-M与pVAX1-U-M。以两种真核表达质粒DNA肌肉免疫BALB/c小鼠后,分别检测体液免疫反应与细胞免疫反应,比较M单基因与Ub-M融合基因DNA免疫所诱生的免疫应答强度【结果】IFA试验表明,pVAX1-M与pVAX1-U-M均能BHK-21细胞内成功表达目的基因;两种重组质粒免疫小鼠后均可诱生PRRSVELISA抗体与细胞免疫反应,但是pVAX1-U-M诱导的细胞免疫反应明显高于pVAX1-M,差异显著(P<0.05);而其诱导的抗体水平明显低于pVAX1-M,二者差异也显著(P<0.05)。【结论】泛素在一定程度上可以促进PRRSVM基因诱导细胞免疫反应,但对体液免疫未见到同样作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 M基因泛素体液免疫细胞免疫 DNA疫苗

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纳米Cu^2＋／TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的灭活效应

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功能材料 2009年第8期40卷 1403-1406页

作者：姜建芳崔海信杨涛蔡鸿昌吴东来中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所农业部农业环境与气候变化重点实验室北京100081 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

利用病毒滴度测定和MDCK细胞电镜观察法,初步探讨了在365nm的黑光灯(UV)照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的光催化灭活效应,并分别考察了UV强度、UV照射时间以及H9N2病毒量对H9N2病毒光催化灭活效应的影响。实验结果表明,... 详细信息

利用病毒滴度测定和MDCK细胞电镜观察法,初步探讨了在365nm的黑光灯(UV)照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对禽流感病毒(H9N2)的光催化灭活效应,并分别考察了UV强度、UV照射时间以及H9N2病毒量对H9N2病毒光催化灭活效应的影响。实验结果表明,在365nm黑光灯的照射下,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜对H9N2病毒具有显著的灭活效应,在UV强度为0.5mW/cm2、UV照射时间为2.5h、病毒量为0.1ml时,H9N2病毒的灭活率达到了100%。研究结果表明,纳米Cu2+/TiO2抗菌膜在抑制禽流感(H9N2)病毒在环境媒介中的扩散与传播方面有潜在的应用价值。

关键词： Cu^2+/TiO2 禽流感病毒(H9N2) 光催化灭活效应

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含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测

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农业生物技术学报 2009年第1期17卷 7-11页

作者：王群刘光亮肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰吴东来农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

为了研究禽流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞,... 详细信息

为了研究禽流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞,利用间接免疫荧光法检测目的基因的瞬时表达;采用腿部肌肉注射途径将重组子免疫SPF鸡,利用ELISA检测免疫后血清抗NP蛋白抗体效价。结果表明,该重组子无论在体外还是体内均能正确表达禽流感NP蛋白,且所表达的蛋白均具有良好的免疫原性。

关键词：禽流感核蛋白真核表达载体血清抗体

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重组马白细胞介素-18生物学活性的测定及单克隆抗体中和活性鉴定

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农业生物技术学报 2009年第3期17卷 370-374页

作者：童铁钢白宇王群张维军刘光亮徐树兰林燕孙庆歌杨涛吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

应用实时荧光定量RT-PCR方法评价了大肠杆菌表达的重组马白细胞介素-18(rEIL-18)刺激马外周血单核细胞(PBMCs)产生马IFN-γ(EIFN-γ)的活性。在重组人IL-12(rhIL-12)的协同作用下,rEIL-18在体外刺激马PBMCs产生EIFN-γ的效应是阴性对照... 详细信息

应用实时荧光定量RT-PCR方法评价了大肠杆菌表达的重组马白细胞介素-18(rEIL-18)刺激马外周血单核细胞(PBMCs)产生马IFN-γ(EIFN-γ)的活性。在重组人IL-12(rhIL-12)的协同作用下,rEIL-18在体外刺激马PBMCs产生EIFN-γ的效应是阴性对照的20倍,并且在一定rhIL-12浓度的条件下,rEIL-18在体外诱导马PBMCs产生EIFN-γ的能力呈一定的剂量依赖性。此外,评价了制备的9株抗rEIL-18单克隆抗体中和rEIL-18的生物学活性的能力,证实其中1株可中和rEIL-18的生物学活性,并且呈一定的剂量依赖性。

关键词：马白细胞介素-18 生物学活性单克隆抗体

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表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白重组新城疫病毒的构建以及密码子优化的HA免疫增强作用

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 585-589页

作者：陈曦于桂梅刘景利王金良姜永萍葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白重组新城疫病毒(NDV)及比较密码子优化的HA免疫增强作用,本研究利用NDV LaSota弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,分别构建了表达野毒型H5N1亚型AIV HA蛋白和密码子优化的HA蛋白的重组NDV,并分别命... 详细信息

为构建表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白重组新城疫病毒(NDV)及比较密码子优化的HA免疫增强作用,本研究利用NDV LaSota弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,分别构建了表达野毒型H5N1亚型AIV HA蛋白和密码子优化的HA蛋白的重组NDV,并分别命名为rL-H5HA和rL-optiH5HA。对拯救的重组病毒进行RT-PCR、间接免疫荧光和western blot鉴定,结果表明,两种重组病毒均可以在BHK-21细胞中以及鸡胚成纤维细胞稳定地表达HA蛋白。此外,rL-optiH5HA在体外增殖能力及在体内刺激产生抗体均显著高于rL-H5HA。本研究表明,密码子优化的HA重组NDV具有明显的免疫增强作用。本研究为研制安全、有效的新型禽流感疫苗提供了实验依据。

关键词：禽流感病毒 HA蛋白重组新城疫病毒密码子优化

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猪流行性乙型脑炎病毒prM-E抗原捕获ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 465-468,485页

作者：王晓磊霍红郭立平李伟步志高华荣虹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究以pr M-E结构蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5B10和5E7分别作为捕获抗体和辣根过氧化酶标记的检测抗体,对反应条件进行优化,建立了抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法。该方法与其它常见猪病病... 详细信息

为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究以pr M-E结构蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5B10和5E7分别作为捕获抗体和辣根过氧化酶标记的检测抗体,对反应条件进行优化,建立了抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法。该方法与其它常见猪病病原无交叉反应,特异性强。该方法可以检出1.25×105 pfu/m L的病毒和48.44 ng/m L pr M-E重组蛋白,最佳线性检测范围为0.05μg/m L^1.00μg/m L,线性相关系数(R2)为0.996。组装的试剂盒批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。试剂盒4℃保存12个月稳定。该研究为JEV亚单位疫苗的研制与生产提供了技术支持。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 prM-E 抗原捕获ELISA 检测

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表达马尔堡病毒囊膜糖蛋白GP重组新城疫病毒的构建及免疫原性评估

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 667-671页

作者：胡旭乐温志远宋坤王喜军陈伟业葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为研制安全、有效的抗马尔堡病毒(MARV)疫苗,本研究将人工合成的MARV GP基因利用新城疫病毒LaSota疫苗株反向遗传操作系统构建并拯救得到表达MARV糖蛋白GP的重组病毒(rLa-MARVGP),并以小鼠为动物模型对其安全性和免疫原性进行评价。West... 详细信息

为研制安全、有效的抗马尔堡病毒(MARV)疫苗,本研究将人工合成的MARV GP基因利用新城疫病毒LaSota疫苗株反向遗传操作系统构建并拯救得到表达MARV糖蛋白GP的重组病毒(rLa-MARVGP),并以小鼠为动物模型对其安全性和免疫原性进行评价。Western blot和间接免疫荧光试验表明MARV GP能够正确表达,其分子量为130 ku;动物实验结果表明rLa-MARVGP对小鼠高度安全;rLa-MARVGP免疫小鼠能够诱导产生抗MARV GP囊膜嵌合水疱性口炎病毒假病毒的特异性中和抗体。本研究表明rLa-MARVGP作为防控MARV的储备性疫苗具有潜在的应用价值。

关键词：马尔堡病毒囊膜糖蛋白重组新城疫病毒

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尼帕病毒G和F蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第11期33卷 898-901页

作者：苏华温志远吴超王喜军胡森陈伟业葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备抗尼帕病毒(NiV)G和F蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以表达NiV G和F蛋白的真核重组表达质粒pCAGG-NiVG和pCAGG-NiVF分别免疫BALB/c小鼠,采用常规技术制备杂交瘤细胞;以表达G和F蛋白的重组牛痘病毒(rWR-NiVG、rWR-NiVF)分别感染BHK... 详细信息

为制备抗尼帕病毒(NiV)G和F蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以表达NiV G和F蛋白的真核重组表达质粒pCAGG-NiVG和pCAGG-NiVF分别免疫BALB/c小鼠,采用常规技术制备杂交瘤细胞;以表达G和F蛋白的重组牛痘病毒(rWR-NiVG、rWR-NiVF)分别感染BHK细胞,通过间接免疫荧光(IFA)筛选阳性克隆,分别得到一株抗G和抗F蛋白的MAb,命名为G3E9和F2G1。两株MAb均为IgM亚型/κ链。IFA检测G3E9和F2G1杂交瘤细胞诱导的小鼠腹水中IgM抗体效价均为1∶1 024。细胞融合抑制试验表明两株MAb均具有抑制NiV G和F蛋白共表达诱导细胞融合的功能;并且采用表达NiV G和F蛋白的水泡性口炎伪型病毒进行的中和试验表明两株MAb具有一定的中和活性。

关键词：尼帕病毒 G和F蛋白细胞融合单克隆抗体

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蓝舌病病毒反向遗传操作系统的建立

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 85-89页

作者：杨涛徐青元孙恩成冯瑜菲李俊平孙亮孙晶吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立蓝舌病病毒(BTV)的反向遗传操作系统,本研究构建了分别表达血清1型BTV SZ97/1株VP1、VP3、VP4、VP6、VP7、NS1和NS2蛋白的7个真核表达质粒,同时又构建了含有SZ97/1株BTV的全部10个基因节段的T7聚合酶体外转录重组质粒。并利用T7 ... 详细信息

为建立蓝舌病病毒(BTV)的反向遗传操作系统,本研究构建了分别表达血清1型BTV SZ97/1株VP1、VP3、VP4、VP6、VP7、NS1和NS2蛋白的7个真核表达质粒,同时又构建了含有SZ97/1株BTV的全部10个基因节段的T7聚合酶体外转录重组质粒。并利用T7 RNA聚合酶对酶切线性化的10个体外转录质粒进行体外转录,制备BTV全部10个基因的体外转录RNA。将已构建的7个真核表达质粒和体外转录获得的RNA产物依次共转染BHK-21细胞,拯救出含有分子标记的BTV。本研究首次在我国建立了BTV的反向遗传操作系统,为我国深入开展该病毒致病机理、传播机制、基因组功能的研究以及新型疫苗的研发奠定了基础。

关键词：蓝舌病蓝舌病病毒反向遗传学

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西尼罗病毒NS1基因的原核表达与抗原性鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 592-595页

作者：马健男杨涛王群张维军徐青元田野林燕宋红梅步志高吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约... 详细信息

为进行西尼罗病毒(WNV)NY99株NS1蛋白的免疫学研究,通过PCR方法扩增WNV NY99株NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c2X上,构建出重组表达质粒pc2X-NS1,经IPTG诱导得到可溶性的麦芽糖结合蛋白(MBP)-NS1融合蛋白(MBP-NS1),其分子质量约为90ku,约占可溶性菌体蛋白质量的50%。利用直链淀粉树脂柱对MBP-NS1纯化后的重组蛋白的纯度达到60%,western blot和间接ELISA检测证明纯化的MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性,为进一步开展关于WNV NS1蛋白的研究奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 NS1基因原核表达

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