检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2010年第11期40卷 1194-1199页

作者：胡锦松陈豪泰张杰刘永生徐志文朱玲徐凯年阳阳古峰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046 四川农业大学动物生物技术中心四川雅安625014

概述了生物被膜鉴定方法(包括试管法、银染法、扫描电镜和透射电镜法、激光共聚焦扫描显微镜法和微量板定量检测法)的主要操作步骤和注意事项,以及在生物被膜研究中取得的成果。阐明了以上鉴定方法在生物被膜研究中的优缺点,并提出了弥... 详细信息

概述了生物被膜鉴定方法(包括试管法、银染法、扫描电镜和透射电镜法、激光共聚焦扫描显微镜法和微量板定量检测法)的主要操作步骤和注意事项,以及在生物被膜研究中取得的成果。阐明了以上鉴定方法在生物被膜研究中的优缺点,并提出了弥补上述鉴定方法缺点的建议。

关键词：生物被膜鉴定方法扫描电镜透射电镜

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狂犬病病毒Vero ERA株G蛋白333位点精氨酸突变株的构建

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中国畜牧兽医 2009年第9期36卷 79-82页

作者：郭利王喜军冯娜葛金英杨松涛夏咸柱步志高吉林农业大学研究生院长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

狂犬病病毒糖蛋白(G)在病毒的致病性中起着主要作用,其第333位点精氨酸(Arg)是决定病毒神经细胞侵嗜性的重要分子基础之一。为研制更加安全有效的狂犬病减毒活疫苗,本试验采用负链RNA病毒反向遗传学方法,在体外将狂犬病病毒Vero细胞适应... 详细信息

狂犬病病毒糖蛋白(G)在病毒的致病性中起着主要作用,其第333位点精氨酸(Arg)是决定病毒神经细胞侵嗜性的重要分子基础之一。为研制更加安全有效的狂犬病减毒活疫苗,本试验采用负链RNA病毒反向遗传学方法,在体外将狂犬病病毒Vero细胞适应株ERA糖蛋白G333位点精氨酸突变为谷氨酸,构建减毒株ERAGΔ,减弱了其潜在的毒力返强的危险。救获的ERAGΔ突变株在Vero细胞上表现出与ERA株亲本病毒相似的生长动力学特性。本研究成功构建并拯救出了狂犬病病毒ERA减毒疫苗株,为研制开发狂犬病病毒无毒疫苗提供了候选株。

关键词：狂犬病病毒反向遗传操作糖蛋白G 人工突变

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抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 412-414页

作者：魏鹏孙恩成刘霓红杨涛徐青元秦永丽赵晶冯瑜菲王文世张翠云吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 湖南农业大学动物医学学院湖南长沙410128

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb),本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB/c鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并用BTV1包被ELISA板,通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表... 详细信息

为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb),本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB/c鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并用BTV1包被ELISA板,通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表达BTV1主要蛋白的真核表达重组质粒转染BHK-21后,对所制备的杂交瘤细胞株上清进行间接免疫荧光(IFA)以及western blot鉴定,结果显示:2B10和4H8与VP7蛋白反应,而3D4与VP6蛋白反应。同时,IFA鉴定结果进一步表明,3株MAb与24个血清型的BTV均可以发生反应。本研究制备的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体 VP6蛋白 VP7蛋白

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表达羧基端融合HA表位N蛋白的重组小反刍兽疫病毒的拯救及鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 456-459页

作者：殷倩倩陈伟业胡倩倩温志远葛金英王喜军步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 安徽科技学院动物科学学院安徽凤阳233100 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为构建小反刍兽疫(PPR)标记疫苗,本研究以PPR病毒(PPRV)反向遗传操作系统为基础,将编码H A表位(YPYD VPDYA)的序列融合连接于PPRV感染性全长cD N A N基因的3'末端构建感染性克隆质粒pN g75/1-GFP/NHA,将其与辅助质粒pCAGGS-N、pCAGG... 详细信息

为构建小反刍兽疫(PPR)标记疫苗,本研究以PPR病毒(PPRV)反向遗传操作系统为基础,将编码H A表位(YPYD VPDYA)的序列融合连接于PPRV感染性全长cD N A N基因的3'末端构建感染性克隆质粒pN g75/1-GFP/NHA,将其与辅助质粒pCAGGS-N、pCAGGS-P、pCAGGS-L共转染V ero细胞救获表达融合H A表位N蛋白的重组病毒rPPRV/GFP/NHA。W estern blot和间接免疫荧光试验表明融合H A表位的N蛋白获得正确表达;体外生长动力学试验分析表明rPPRV/G FP/N H A的生长最高滴度可达106.2TCID50/m L,能够满足标记疫苗的使用要求。本研究结果为进一步研制PPRV标记疫苗奠定基础。

关键词：小反刍兽疫病毒 N蛋白 HA表位标记疫苗

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5种脑炎人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2011年第2期33卷 118-121页

作者：蔡绪禹康晓平刘洪李裕昌孙恩成王凌凤杨涛刘霓红步志高李文京杨银辉吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物/生物安全国家重点实验室北京100071 中国动物疫病预防控制中心北京100125

为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特异引物,通过... 详细信息

为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特异引物,通过优化引物组合及PCR反应条件,建立可同时检测5种病毒的方法,扩增片段长度分别为411 bp(JEV)、945 bp(TBEV)、193 bp(EEEV)、545 bp(WEEV)和769 bp(CHIKV);该方法具有良好的特异性,对病毒核酸最低检测拷贝数分别为7.1×103、3.6×103、2.2×103、5.6×103和5.1×103。该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,为以上5种人兽共患脑炎病病毒提供快速检测手段。

关键词：流行性乙型脑炎病毒森林脑炎病毒东方马脑炎病毒西方马脑炎病毒基孔肯雅病毒多重RT-PCR

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蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 388-392页

作者：耿宏伟秦永丽李俊平杨涛孙恩成刘霓红白安斌徐青元王凌凤赵晶覃绍敏林俊郭怡璠吴东来东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院黑龙江哈尔滨150086 广西兽医研究所广西南宁530001 广西大学广西南宁530004

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与... 详细信息

为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(CV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)无交叉反应,表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明,BTV-4H7 MAb对不同血清型BTV阳性血清具有良好的阻断效果,而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品,检测结果符合率分别达100%和98%。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。

关键词：蓝舌病病毒重组VP7蛋白群特异性单克隆抗体竞争ELISA

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蓝舌病病毒VP5蛋白的原核表达及其抗原性分析

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中国预防兽医学报 2012年第8期34卷 607-610页

作者：赵大维朱彦青陈伟业胡倩倩殷倩倩黄克和步志高南京农业大学动物医学学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 南京农业大学公共管理学院江苏南京210095

为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结... 详细信息

为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的VP5重组蛋白以可溶形式表达,分子质量约为112.2 ku。利用MBP标签对重组蛋白进行纯化,并以其作为包被抗原,间接ELISA检测山羊血清样品,结果 5份羊血清P/N值均大于1,其中有1只羊检测结果 P/N值为2.396,鉴定为阳性血清,表明重组蛋白可以与VP5抗体反应,可以作为检测BTV VP5抗体的抗原,为今后进一步开展BT诊断研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒 VP5基因原核表达间接ELISA

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猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗研究进展

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中国农学通报 2010年第23期26卷 7-11页

作者：张奕强王猛刘文倩刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046 四川农业大学动物生物技术中心雅安四川625014

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是威胁世界养猪业的最主要的疾病之一,每年都给养猪业带来巨大的经济损失。目前,世界上还没有对PRRS确实有效的防控措施,免疫预防是防控的主要手段。基因工程疫苗是现在疫苗研究的重点,特别是核酸疫苗不仅能引... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是威胁世界养猪业的最主要的疾病之一,每年都给养猪业带来巨大的经济损失。目前,世界上还没有对PRRS确实有效的防控措施,免疫预防是防控的主要手段。基因工程疫苗是现在疫苗研究的重点,特别是核酸疫苗不仅能引起体液免疫和激发较强的细胞免疫,而且其生产工艺简单,稳定性好,成本低,便于贮藏,不具有感染性,不会出现毒力返强等安全问题。现在对PRRS核酸疫苗的研究已初具成效,现就核酸疫苗的研究进展进行综述。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗预防

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蓝舌病病毒VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位的初步鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 63-66页

作者：魏天徐青元耿宏伟冯瑜菲杨涛孙恩成席娜刘二战钱爱东邸英华吴东来吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林省长春皓月清真肉业股份有限公司吉林长春130000

为鉴定蓝舌病病毒（BTV）的单克隆抗体（MAb）所识别的VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，本研究采用噬菌体展示技术对BTVVP7蛋白构象抗原表位氨基酸进行筛选，通过质粒定点突变技术对编码筛选获得的氨基酸区域的基因进行突变，同... 详细信息

为鉴定蓝舌病病毒（BTV）的单克隆抗体（MAb）所识别的VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，本研究采用噬菌体展示技术对BTVVP7蛋白构象抗原表位氨基酸进行筛选，通过质粒定点突变技术对编码筛选获得的氨基酸区域的基因进行突变，同时利用ELISA法验证该氨基酸区域突变后对BTVvP7蛋白抗原性的影响。结果表明被BTVMAb4H7所识别的BTVVP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位由175FQG177、185YL186和278WH279组成，其中aal75～aal77和aal85～aal86为该抗原表位的关键性氨基酸，本研究初步阐明了BTvVP7蛋白竞争抑制特异性的分子基础，对VP7蛋白功能研究和建立BTV群特异性检测方法具有重要意义。

关键词：蓝舌病病毒 VP7蛋白构象表位

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C型口蹄疫结构蛋白VP3的原核表达及生物活性

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江苏农业科学 2011年第4期39卷 38-40页

作者：刘文倩王猛张奕强刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046 四川农业大学动物生物技术中心四川雅安625014

利用PCR扩增技术,以本实验室构建的C型口蹄疫pMD-P1重组质粒为模板扩增C型口蹄疫VP3片段,并连接到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建阳性质粒pGEX-VP3并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。使用不同IPTG浓度进行诱导,收集菌液进行SDS-PAGE。使用Mod... 详细信息

利用PCR扩增技术,以本实验室构建的C型口蹄疫pMD-P1重组质粒为模板扩增C型口蹄疫VP3片段,并连接到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建阳性质粒pGEX-VP3并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。使用不同IPTG浓度进行诱导,收集菌液进行SDS-PAGE。使用Model 422 Electro-Eluter切胶回收目的蛋白,并进行Western-Blotting分析。结果得到50 ku左右目的条带,证实融合蛋白VP3大肠杆菌中得到以包涵体形式表达,且使用切胶回收后的蛋白能被C型口蹄疫阳性血清识别,具有良好的反应原性。

关键词： C型口蹄疫结构蛋白VP3 原核表达生物活性

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