检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2012年第11期34卷 854-858页

作者：王明芳邓国华杨孝朴施建忠丁晴微罗维玉张文亮陈化兰甘肃农业大学甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究对2010年在湖北活禽市场监测分离到的两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)(HuB/495/10和HuB/513/10)进行了序列分析和致病性试验研究,以了解湖北地区H5N1亚型AIV的生物学特性差异。序列分析显示:2株病毒全基因组核苷酸同源性在97.3%... 详细信息

本研究对2010年在湖北活禽市场监测分离到的两株鸭源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)(HuB/495/10和HuB/513/10)进行了序列分析和致病性试验研究,以了解湖北地区H5N1亚型AIV的生物学特性差异。序列分析显示:2株病毒全基因组核苷酸同源性在97.3%～98.6%,2株病毒的8个节段基因均与青海和香港分离的野鸟源病毒A/great crested-grebe/Qinghai/1/2009(H5N1)和A/black-crowned night heron/Hong Kong/659/2008(H5N1)的核苷酸高度同源,HA蛋白裂解位点序列基序为341RRRKR345,呈现典型的高致病力分子特征。以105EID50/100μL病毒剂量感染4周龄SPF鸭发现:HuB/495/10和HuB/513/10对鸭的致死率分别为100%和20%,病毒在鸭体内呈全身性复制并可通过呼吸道和消化道向外排毒;不同滴度的病毒感染6周龄BALB/c小鼠,HuB/495/10和HuB/513/10的MLD50分别为1.38 log10EID50和1.68 log10EID50,对小鼠表现为高致病力,均在肺脏中高拷贝复制。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒序列分析致病性

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抗原表位鉴定方法的研究进展

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中国畜牧兽医 2012年第7期39卷 66-70页

作者：文雪霞陈化兰熊永忠王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

抗原表位是抗原分子中能与相应淋巴细胞表面的受体结合的特殊化学基团,一般由几个氨基酸残基序列或其空间结构组成。它是引起免疫应答的物质基础,其性质决定了抗原的特异性。抗原表位的鉴定方法主要有肽扫描技术、氨基酸定点突变技术、X... 详细信息

抗原表位是抗原分子中能与相应淋巴细胞表面的受体结合的特殊化学基团,一般由几个氨基酸残基序列或其空间结构组成。它是引起免疫应答的物质基础,其性质决定了抗原的特异性。抗原表位的鉴定方法主要有肽扫描技术、氨基酸定点突变技术、X-ray衍射或核磁共振技术、质谱技术、噬菌体展示肽技术及生物信息技术预测等,文章将从这几方面入手对近几年来鉴定抗原表位的方法作一综述。

关键词：抗原表位鉴定方法研究进展

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表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒的构建

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 341-344页

作者：焦同路王靖飞赵双成王世达常晓飞田石柳金雄李雁冰姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、疫病诊断与技术服务中心黑龙江哈尔滨150001

为构建表达H5亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Anhui/1/06(H5N1)(简称AH/06)HA蛋白的重组禽痘病毒,本研究利用感染-转染的方法通过转移载体pSY681-gfp-gpt将AIV株AH/06的HA基因同源重组到禽痘病毒(FPV)中,并利用gfp和gpt双重筛选标记在鸡胚... 详细信息

为构建表达H5亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Anhui/1/06(H5N1)(简称AH/06)HA蛋白的重组禽痘病毒,本研究利用感染-转染的方法通过转移载体pSY681-gfp-gpt将AIV株AH/06的HA基因同源重组到禽痘病毒(FPV)中,并利用gfp和gpt双重筛选标记在鸡胚成纤维细胞中经过多轮筛选,得到纯化的重组禽痘病毒(rFPV-gfp-gpt-AHHA)。通过PCR、序列测定和western blot的方法对rFPV-gfp-gpt-AHHA进行鉴定和抗原活性分析。结果表明AH/06的HA基因稳定的重组到rFPV-gfp-gpt-AHHA中,其表达的HA蛋白能够与AH/06的阳性血清反应,显示出了良好的抗原性。同时病毒的生长曲线也显示外源HA基因的插入并没有影响亲本病毒的复制。这些结果为进一步的免疫效力研究奠定了基础。

关键词： H5亚型禽流感病毒重组禽痘病毒 HA基因

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H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2012年第7期 113-115页

作者：王寿山张超林刘春国石薇琳刘彦云王伟刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室及国家禽流感参考实验室/OIE禽流感参考实验室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）是正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒。禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,被国际兽医局（OIE）列为A类传染病。H9N2亚型AIV为低致病性禽流感病毒,虽然毒力较H5N1亚型AIV弱,

关键词： H9N2亚型禽流感病毒序列分析 NA基因低致病性禽流感病毒 HA A型流感病毒 H5N1亚型 virus

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H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 514-517页

作者：张超林刘春国王寿山石薇琳李建辉王伟刘彦云刘明东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建H5亚型禽流感病毒(AIV)病毒样颗粒(VLPs),并鉴定其生物学活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,分别单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法、SDS-PAGE、western blot和血凝试验等对重... 详细信息

为构建H5亚型禽流感病毒(AIV)病毒样颗粒(VLPs),并鉴定其生物学活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,分别单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法、SDS-PAGE、western blot和血凝试验等对重组蛋白进行鉴定。实验结果表明:透射电子显微镜观察结果显示,共表达HA和M1的重组蛋白可以形成VLPs,而单独表达HA未观察到VLPs;表达的重组蛋白HA和HA-M1均能够凝集鸡红细胞,血凝效价分别为1∶27和1∶28。结果显示该方法获得的AIV结构蛋白具有良好的生物学活性和抗原活性,从而为禽流感VLPs疫苗的研究提供依据。

关键词：流感病毒血凝素基因基质蛋白基因杆状病毒表达系统

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H9N2亚型禽流感病毒细胞高产株的拯救

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中国预防兽医学报 2012年第12期34卷 937-941页

作者：刘彦云刘春国石薇琳王伟吕让刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为构建能够在MDCK细胞中高水平复制的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗株,本研究在对病毒生长特性及HA基因遗传进化分析的基础上,筛选出一株细胞高度适应的国内流行株A/chicken/Shanghai/11/2011(H9N2)(SH11),并通过反向遗传操作技术拯救出... 详细信息

为构建能够在MDCK细胞中高水平复制的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗株,本研究在对病毒生长特性及HA基因遗传进化分析的基础上,筛选出一株细胞高度适应的国内流行株A/chicken/Shanghai/11/2011(H9N2)(SH11),并通过反向遗传操作技术拯救出全部基因均来自亲本株的AIV rSH11株。生物学试验结果表明rSH11在鸡胚半数感染量(EID50)、组织培养半数感染量(TCID50)、遗传稳定性等方面均与亲本株保持一致,rSH11经MDCK细胞连续传5代后血凝价稳定在1∶1 024,表明该病毒株具有细胞高度增殖的特性。采用rSH11株制备油乳剂灭活苗免疫4周龄SPF鸡,免疫一周即可以检测出HI抗体,免疫3周后HI抗体平均效价高于1∶700,表明其具有良好的免疫原性。rSH11疫苗对不同的H9N2病毒株能够产生良好的免疫保护作用,显著抑制免疫鸡排毒。H9N2亚型AIV细胞高产株的拯救为该亚型AIV细胞苗的研制奠定了基础。

关键词：禽流感 H9N2亚型反向遗传细胞苗

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表达H5亚型禽流感同义(Consensus)HA蛋白的重组质粒构建及体外表达

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 510-513页

作者：常晓飞赵双成田石柳金雄王靖飞曾显营胡永浩姜永萍陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730007 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与技术服务中心黑龙江哈尔滨150001

为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜... 详细信息

为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜性密码子优化,人工合成Cons-HA5基因并克隆于真核表达载体pCAGGS中构建重组表达质粒pCACons-HA5。将重组质粒转染293-T细胞,在激光共聚焦显微镜下观察转染后不同时间HA蛋白的表达情况,同时在转染后24 h、48 h后分别进行表达蛋白的western blot检测。结果表明,pCACons-HA5转染293-T细胞后,其表达的HA蛋白先分布于细胞质中,而后转移至细胞膜表面;westernblot鉴定结果表明,Cons-HA5重组蛋白可以与AIV多克隆血清反应分子量约为70 ku。该重组质粒的构建将为进一步Cons-HA5核酸免疫对H5亚型不同抗原群AIV的交叉保护免疫效力研究奠定基础。

关键词： H5亚型禽流感病毒同义HA基因表达

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H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定

H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：张超林刘春国王寿山石薇琳李建辉王伟刘彦云刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室

为研究禽流感病毒(AIV)结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其生物活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法,SDS-PAGE,westem blot和血凝实验等对重组蛋白进行... 详细信息

为研究禽流感病毒(AIV)结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其生物活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法,SDS-PAGE,westem blot和血凝实验等对重组蛋白进行鉴定及分析。实验结果表明:透射电子显微镜观察结果显示,共表达HA和M1的重组蛋白可以形成病毒样颗粒(VLPs),而单独表达HA未观察到VLPs;表达的重组蛋白HA和HA-M1都能够凝集鸡红细胞,血凝效价分别为1:27和1:28。结果显示该方法获得的AIV结构蛋白,具有良好的生物学活性和抗原活性,从而为禽流感VLPs疫苗的研究提供依据。

关键词：流感病毒血凝素基因基质蛋白基因杆状病毒表达系统

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2009年～2011年中国南方H4亚型禽流感病毒生物学特性研究

2009年～2011年中国南方H4亚型禽流感病毒生物学特性研究

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：张文亮张曦朱占松谭丹崔鹏飞施建忠邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

我国南方地区一直以来是禽流感的易发地,目前该区域已分离到的禽流感病毒除高致病性禽流感(HPAIV)外,也存在多种低致病性禽流感(IPAIV)并存现象,尤其是近年来H6和H9等LPAIV呈现广泛流行态势。2009年以来,在中国南方地区的正常禽流感疫... 详细信息

我国南方地区一直以来是禽流感的易发地,目前该区域已分离到的禽流感病毒除高致病性禽流感(HPAIV)外,也存在多种低致病性禽流感(IPAIV)并存现象,尤其是近年来H6和H9等LPAIV呈现广泛流行态势。2009年以来,在中国南方地区的正常禽流感疫情监测过程中分离到多株H4亚型禽流感病毒(AIV),发现H4亚型禽流感病毒的分离率逐渐提高。本研究对2009年至2011年间分离的55株病毒进行RNA提取、基因组扩增、序列分析、相关抗原性分析以及对小鼠的感染能力评估,以了解我国当前南方地区H4亚型AIV的遗传进化关系,抗原

关键词：禽流感病毒生物学特性研究中国南方

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禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：包红梅王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001

根据GenBank中登录的A型禽流感病毒(AIr)的M基因序列，设计了一套特异识别M基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物，并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP(逆转录环介导等温核酸扩增)技术的A型禽流感病毒诊断方法。结果表明... 详细信息

根据GenBank中登录的A型禽流感病毒(AIr)的M基因序列，设计了一套特异识别M基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物，并以此套引物建立了一种基于RT-LAMP(逆转录环介导等温核酸扩增)技术的A型禽流感病毒诊断方法。结果表明，该方法对M-AIV RNA的最小检测限为10．6，灵敏度高于普通一步法RT-PCR 10倍；全部反应可在1．5h内完成；在反应体系中添加Fluorescent Detection Reagent染料后，可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明，该方法灵敏度高、特异性好，能够作为A型禽流感病毒的快速诊断方法。

关键词：禽流感病毒逆转录环介导恒等温扩增病毒检测性能评价

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