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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：韩庆功乔传玲杨焕良陈艳辛晓光陈化兰赵玉军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室沈阳农业大学畜牧兽医学院

从2004年全国动物流感调查分离到的一株猪流感病毒经亚型鉴定确定为H9N2,命名为 A／Swine／Zhejiang／7／2004(H9N2),利用RT-PCR扩增HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGSk, 转染293T细胞,PAWestern-blot检测所克隆的载体pCAGGHA... 详细信息

从2004年全国动物流感调查分离到的一株猪流感病毒经亚型鉴定确定为H9N2,命名为 A／Swine／Zhejiang／7／2004(H9N2),利用RT-PCR扩增HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGSk, 转染293T细胞,PAWestern-blot检测所克隆的载体pCAGGHA在体外能够瞬时表达具有免疫学活性的HA蛋白,这将为下一步开展DNA疫苗的免疫奠定基础。

关键词：猪流感病毒 HA基因克隆表达

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H5N1禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

H5N1禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：张晓霁刘明张云刘春国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

经RT—PCR扩增了1株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA),将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体,将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒载体,经PCR... 详细信息

经RT—PCR扩增了1株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA),将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体,将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒载体,经PCR鉴定得到单一的HA条带。重组杆状病毒载体在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞。通过蛋白质电泳、免疫印迹法、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:在sf9昆虫细胞中高效表达了分子量约66Kd的血凝素蛋白,用此蛋白免疫SPF鸡可产生较高效价的抗体,说明该蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。

关键词：禽流感病毒 H5N1 血凝素杆状病毒表达

来源：评论

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重组核蛋白检测鸭血清禽流感抗体间接ELISA方法的建立

重组核蛋白检测鸭血清禽流感抗体间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：邓国华曲站红熊蕊黎玉梅田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

本实验利用禽流感重组核蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭血清禽流感抗体的间接ELISA方法,通过对各个工作组份反应条件的优化,确定的最佳工作条件为:包被抗原1:300稀释(蛋白含量为8μg/mL);待检血清1:200稀释;酶标抗体1:7000稀释;封闭时... 详细信息

本实验利用禽流感重组核蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭血清禽流感抗体的间接ELISA方法,通过对各个工作组份反应条件的优化,确定的最佳工作条件为:包被抗原1:300稀释(蛋白含量为8μg/mL);待检血清1:200稀释;酶标抗体1:7000稀释;封闭时间、待检血清和酶标二抗最佳作用时间均为1.5h。通过对907份鸭血清样本(包括141份免疫血清和766份现地血清)进行检测,经符合实验(AGP和HI)验证,间接ELISA方法与AGP的符合率为74.4%,与HI的符合率为95.0%,说明该检测方法具有很高的灵敏性和特异性。

关键词：禽流感重组核蛋白间接ELISA 抗体检测

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H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对金定鸭的免疫保护效力

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对金定鸭的免疫保护效力

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静赵有淑乔传玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对SPF鸡具有良好的免疫保护效果,为探讨其对鸭的免疫保护效果,将pCAGGoptiHA5以i00μg剂量加强免疫4周龄金定鸭,同时设油苗免疫对照组和空白对照组,加强免疫2周后用100LD的HPAIV A/Duck/ShanghaiNan... 详细信息

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对SPF鸡具有良好的免疫保护效果,为探讨其对鸭的免疫保护效果,将pCAGGoptiHA5以i00μg剂量加强免疫4周龄金定鸭,同时设油苗免疫对照组和空白对照组,加强免疫2周后用100LD的HPAIV A/Duck/ShanghaiNanhui/16/2004（H5N1）[DK/SHNH/1604（H5N1）]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7、14、21、28天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。结果表明,pCAGGoptiHA5免疫鸭后可以诱导较高水平的HI抗体,并可以保护免疫鸭不发生高致病性病毒攻击后的死亡。

关键词：禽流感 pCAGGoptiHA5 鸭 DNA疫苗免疫保护

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H5亚型禽流感DNA疫苗的最小免疫剂量测定

H5亚型禽流感DNA疫苗的最小免疫剂量测定

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静左青山夏俊陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡的最小免疫剂量进行了测定。分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5一次免疫,50μg和10μg剂量一次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),5μg和1μg pCAGGoptiHA5一... 详细信息

将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡的最小免疫剂量进行了测定。分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5一次免疫,50μg和10μg剂量一次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死),5μg和1μg pCAGGoptiHA5一次免疫可对免疫鸡形成62.5%(5/8)和87.5(7/8)的死亡保护;分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5两次免疫后,50μg和10μg剂量两次免疫后可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒),5μg和1μg pCAGGoptiHA5两次免疫可对免疫鸡形成100%的保护(不发病、不致死)。结果表明,DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5能使免疫鸡获得保护的最小免疫剂量为1μg,具有很高的开发应用前景。

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗最小免疫剂量

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重组H5N3禽流感疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖条件研究

重组H5N3禽流感疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖条件研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：杨涛刘明张云刘春国王洪峰蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

为研究通过反义遗传学技术构建的重组禽流感病毒rH5N3疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖规律,确定最佳增殖条件,将rH5N3疫苗株分别在500mL和10L转瓶培养的MDCK细胞中进行增殖试验,检测不同接毒量以及接毒后不同时间里的血凝价,以确定病毒的... 详细信息

为研究通过反义遗传学技术构建的重组禽流感病毒rH5N3疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖规律,确定最佳增殖条件,将rH5N3疫苗株分别在500mL和10L转瓶培养的MDCK细胞中进行增殖试验,检测不同接毒量以及接毒后不同时间里的血凝价,以确定病毒的增殖情况.结果表明,在确定的最佳病毒增殖条件下,该重组疫苗株在500mL转瓶和10L转瓶中可获得大量增殖,病毒的最高血凝价均可达到1:***5N3疫苗株可以在MDCK细胞中大规模增殖,操作方法简便,成本低廉,该方法为禽流感细胞培养型疫苗的大规模生产奠定了基础.

关键词：禽流感细胞培养 MDCK细胞增殖条件反义遗传学 rH5N3疫苗

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重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救

重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：杨涛刘明刘春国张云王笑梅童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,本研究利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2... 详细信息

为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,本研究利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株的HA、NA基因进行重组,成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株rH3N2株,该毒株接毒MDCK细胞60h,血凝价可以达到1:512,表明该毒株具有高度适应细胞繁殖特性,为H3N2亚型猪流感病毒细胞培养型疫苗的研制奠定了基础.

关键词：猪流感 H3N2亚型反向遗传技术细胞培养流感疫苗重组细胞

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A/African Startling/England-Q/983/79(H7N1)与我国H7N2亚型禽流感病毒分离株的比较

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畜牧兽医科技信息 2006年第10期22卷 24-26页

作者：刘丽玲陈化兰李雁冰李呈军魏萍王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北农业大学 150030

本研究通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增了禽流感病毒A/AfricanStartling/Eng-land-Q/983/79(A.S/E.Q)(H7N1)的8个基因片段即PA、PB1、PB2、NS、NP、M、HA、NA基因,将其分别克隆到PMD18-T载体后进行序列测定;并将克隆到的8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较分析。结果表明所克窿到的8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架;HA、NA基因的序列分析表明A.S/E.Q符合低致病力禽流感病毒的特征;与我国H7N2亚型AIV分离株A/chicken/Hebei/1/02的序列比较发现,A/chicken/Hebei/1/02的HA、M、NP、PB1、PA基因与A.S/E.Q同源性最高,说明我国北部分离的AIV起源于A.S/E.Q。

关键词：禽流感病毒 H7N1 H7N2 分离株比较

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H1N1亚型猪流感病毒HA基因的序列测定及原核表达

H1N1亚型猪流感病毒HA基因的序列测定及原核表达

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：丁选亚乔传玲韩庆功杨焕良陈艳辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增出猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,然后克隆到PMD18-T载体上,并进行测序和构建其系统进化树.根据测出的HA序列设计出带酶切位点的一对引物,并以PMD18-HA为模板进行PCR,扩增出HA的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切和测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1mM的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的抗原反应活性,为以重组HA蛋白作为抗原建立检测H1N1亚型猪流感病毒血清学抗体水平奠定了基础.

关键词：猪流感病毒 HA基因原核表达基因序列

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猪流感抗体间接ELISA检测方法的建立

猪流感抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：陈艳辛晓光杨焕良李婷李海燕乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

猪流感病毒(SIV)感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯SIV,纯化的SIV经NP-40处理并反复冻融,作为SI间接ELISA抗原,建立了间接ELISA检测方法.对29份HI检测SI为阴性血清的检测结果,经统计学分析,确定间接ELISA判定标... 详细信息

猪流感病毒(SIV)感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯SIV,纯化的SIV经NP-40处理并反复冻融,作为SI间接ELISA抗原,建立了间接ELISA检测方法.对29份HI检测SI为阴性血清的检测结果,经统计学分析,确定间接ELISA判定标准被检血清OD490值≥0.20判定为阳性,OD490值≤0.15判定为阴性.与HI的符合率达到92.8％.该实验方法敏感性高,为猪流感抗体提供快速、准确、简便的检测方法.

关键词：猪流感猪流感病毒间接ELISA HI检测

来源：评论

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