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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静左青山夏俊陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨黑龙江150001

本研究将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡的最小免疫剂量进行了测定.分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5一次免疫,50μg和10μg剂量一次免疫可对免疫鸡形成100％的保护(不发病、不致死),5μg和1μg pCAGGopti... 详细信息

本研究将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡的最小免疫剂量进行了测定.分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5一次免疫,50μg和10μg剂量一次免疫可对免疫鸡形成100％的保护(不发病、不致死),5μg和1μg pCAGGoptiHA5一次免疫可对免疫鸡形成62.5％(5/8)和87.5(7/8)的死亡保护;分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5两次免疫后,50μg和10μg剂量两次免疫后可对免疫鸡形成100％完全保护(不发病、不致死、不排毒),5μg和1μg pCAGGoptiHA5两次免疫可对免疫鸡形成100％的保护(不发病、不致死).结果表明,DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5能使免疫鸡获得保护的最小免疫剂量为1μg,具有很高的开发应用前景.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗最小免疫剂量

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两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

两湖地区H6亚型禽流感病毒HA及NA的基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：丁睛微齐瑛琳李印施建忠崔鹏飞于杨崔佳莹陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

08年～2009年间，哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒，其中H6N2亚型有12株，H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA，NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其...

08年～2009年间，哈尔滨兽医研究所动物流感实验室在两湖地区的市场检测过程中分离到了14株H6亚型禽流感病毒，其中H6N2亚型有12株，H6N6亚型有2株。我们对这14株病毒的HA，NA进行序列测定和进化分析。结果发现DK/HN/284/09的HA片段与其他13株的HA差异很大，达到19.4％～20.2％,其余13株毒同源性在94.2％～99.9％。H6N2亚型间的NA片段的同源性在91.1％～99.9％，差异性比较大。两株H6N6的NA片段同源性为89.5％，差异显著;这些数据表明：不同毒株呈现出明显的时间和地域性差异。与我国周边地区的H6亚型禽流感毒株进行比较发现，只有DK/HN/284/09的HA片段与香港早期的毒株可能有着共同的来源，其余都和香港和韩国等的毒株有着较大的差异性，HA基因的糖基化位点也有所不同。表现出明显的异源性。

关键词：

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H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立

H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：陈艳孔维乔传玲杨焕良辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨 150001

为了检测H3N2亚型猪流感病毒，将一株H3亚型猪流感病毒特异性单克隆抗体(4E8)进行纯化，建立了以多抗作为包被抗体，单抗作为检测抗体的H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA方法。通过对反应条件的优化。确定多抗1：800倍稀释，单抗0．51μg... 详细信息

为了检测H3N2亚型猪流感病毒，将一株H3亚型猪流感病毒特异性单克隆抗体(4E8)进行纯化，建立了以多抗作为包被抗体，单抗作为检测抗体的H3亚型猪流感病毒抗原捕捉ELISA方法。通过对反应条件的优化。确定多抗1：800倍稀释，单抗0．51μg／孔，酶标抗体1：5000稀释;单抗37 4℃作用***，酶标抗体37℃作用1.0h。并对此方法的特异性和敏感性进行了分析。同时，应用建立的抗原捕捉ELISA方法对84份H3亚型SIV实验室感染猪的拭子和肺脏样品进行检测。结果显示该方法具有良好的特异性和敏感性，可用于H3亚型SIV的临床检测。

关键词：猪流感病毒单克隆抗体病毒检测性能评价

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重组核蛋白检测鸭血清禽流感抗体间接ELISA方法的建立

重组核蛋白检测鸭血清禽流感抗体间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：邓国华曲站红熊蕊黎玉梅田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本实验利用禽流感重组核蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭血清禽流感抗体的间接ELISA方法,通过对各个工作组份反应条件的优化,确定的最佳工作条件为:包被抗原1∶300稀释(蛋白含量为8μg/mL);待检血清1∶200稀释;酶标抗体1∶7000稀释;封闭... 详细信息

本实验利用禽流感重组核蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭血清禽流感抗体的间接ELISA方法,通过对各个工作组份反应条件的优化,确定的最佳工作条件为:包被抗原1∶300稀释(蛋白含量为8μg/mL);待检血清1∶200稀释;酶标抗体1∶7000稀释;封闭时间、待检血清和酶标二抗最佳作用时间均为1.5h.通过对907份鸭血清样本(包括141份免疫血清和766份现地血清)进行检测,经符合实验(AGP和HI)验证,同接ELISA方法与AGP的符合率为74.4％,与HI的符合率为95.0％,说明该检测方法具有很高的灵敏性和特异性.

关键词：禽流感重组核蛋白间接ELISA 抗体检测鸭血清

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H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗对商品鸡的免疫效力

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗对商品鸡的免疫效力

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：乔传玲井波于康震田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室及兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京)

将共表达禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖,制备成冻干疫苗,经翅下刺种途径接种商品鸡,免疫3周后用100LD的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)进行攻击.结果重组鸡... 详细信息

将共表达禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒rFPV-HA-NA在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖,制备成冻干疫苗,经翅下刺种途径接种商品鸡,免疫3周后用100LD<,50>的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)进行攻击.结果重组鸡痘病毒疫苗免疫鸡后诱导产生了高水平的HI抗体,能够完全抵抗H5N1亚型病毒的致死性攻击,对雏鸡禽流感母源抗体的消长情况进行了检测,结果母源抗体HI效价的峰值在7日龄时出现,而后随雏鸡日龄的增大而下降,在35日龄时趋于消失.雏鸡母源抗体对重组疫苗的免疫效力有一定的干扰.

关键词：禽流感重组鸡痘病毒疫苗免疫效力 H5亚型

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河南省部分地区猪流感血清学调查

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河南畜牧兽医（综合版） 2009年第7期30卷 23-24页

作者：韩庆功张智勇乔传玲河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

采用血凝抑制试验对河南省新乡、焦作、漯河等地采集的139份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3、H5、H9亚型抗体的检测。结果显示,在被调查的139份血清中,H1亚型SIV抗体阳性率为43.17%,H3亚型SIV抗体阳性率为0,H5亚型SIV抗体阳性率为2.1... 详细信息

采用血凝抑制试验对河南省新乡、焦作、漯河等地采集的139份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3、H5、H9亚型抗体的检测。结果显示,在被调查的139份血清中,H1亚型SIV抗体阳性率为43.17%,H3亚型SIV抗体阳性率为0,H5亚型SIV抗体阳性率为2.16%,H9亚型SIV抗体阳性率为1.44%;H1+H5亚型SIV抗体阳性率为1.44%;H1+H9亚型SIV抗体阳性率为1.44%;H1+H5+H9亚型SIV抗体阳性率为0。表明在所调查的猪群中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1亚型感染,部分猪群有多种亚型混合感染存在。

关键词：猪流感血清血凝抑制试验

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禽流感变异株灭活疫苗(H5N1,Re-4株)对鸡、鸭和鹅的免疫效果研究

禽流感变异株灭活疫苗(H5N1,Re-4株)对鸡、鸭和鹅的免疫效果研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：曾显营钟功勋李雁冰施建忠姜永萍王彦妮万晓鹏毛胜刚田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨维科生物技术开发公司

为系统评估禽流感变异株灭活疫苗（H5N1,Re-4株）对家禽的免疫效果,本研究将Re-4株油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡和商品蛋鸡、商品鸭、商品鹅。免疫后每周采集血清测定HI抗体,绘制抗体消长曲线,免疫SPF鸡在免疫后2周、3周和50周时以10～5EID... 详细信息

为系统评估禽流感变异株灭活疫苗（H5N1,Re-4株）对家禽的免疫效果,本研究将Re-4株油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡和商品蛋鸡、商品鸭、商品鹅。免疫后每周采集血清测定HI抗体,绘制抗体消长曲线,免疫SPF鸡在免疫后2周、3周和50周时以10～5EID强毒（CK/SX/2/06）的剂量进行攻毒试验。研究结果显示,该疫苗对蛋鸡、鸭、鹅家禽均具有良好的免疫效果,而且SPF免疫鸡血清HI抗体在4 log2以上时能够完全抵抗变异株CK/SX/2/06强毒的攻击。根据试验结果推荐该油乳剂灭活疫苗的对上述禽类的免疫程序:商品蛋鸡10日龄颈部皮下注射0.3 mL,60日龄和110日龄（开产前）时依次胸肌注射0.5 mL和1.0 mL进行免疫;商品鸭、鹅在2周龄均以0.5 mL首免,5周龄和4月龄左右时以1 mL的剂量肌肉注射方式进行加强免疫。

关键词：禽流感 H5N1 变异株灭活疫苗免疫效果

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猪流感病毒神经氨酸酶基因(N1和N2)在昆虫细胞中的表达

猪流感病毒神经氨酸酶基因(N1和N2)在昆虫细胞中的表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：万春和刘明刘春国杨涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室福建省农业科学院畜牧兽医研究所

根据GenBank发表的N1和N2亚型猪流感NA基因序列设计引物,扩增出NA基因片段,将其克隆到pFastBacGP67A和pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67A-N1和pFastBacGP67C-N2,转化含有杆状病毒穿梭载体(Bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体获得重组转座子rBacmid-N1和rBacmid-N2,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBv-N1和rBv-N2,再感染细胞,收获目的蛋白。通过SDS-PAGE蛋白电泳、免疫印迹法、免疫组化分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物学活性。

关键词：猪流感病毒神经氨酸酶基因昆虫细胞杆状病毒表达

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洞庭湖区H10亚型禽流感监测及其遗传进化分析

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中国农学通报 2014年第32期30卷 15-20页

作者：黄建龙王昌建谭丹邓国华范仲鑫朱春霞张朝阳刘道新湖南省动物疫病预防控制中心长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解洞庭湖区H10亚型禽流感病毒的流行分布及遗传进化情况,为该地区H10亚型禽流感的防控及该亚型病毒在禽流感病毒进化中所起的作用提供一些参考。在环洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场上采集家禽和环境拭子,对其进行病原分离、鉴定和... 详细信息

为了解洞庭湖区H10亚型禽流感病毒的流行分布及遗传进化情况,为该地区H10亚型禽流感的防控及该亚型病毒在禽流感病毒进化中所起的作用提供一些参考。在环洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场上采集家禽和环境拭子,对其进行病原分离、鉴定和测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。结果显示:在活禽批发市场上总共分离到11株H10亚型禽流感病毒,分离的H10亚型禽流感阳性样品全来源于鸭拭子;在1个鸭场分离到2株H10亚型禽流感病毒;其中2株分离毒株序列分析显示其HA蛋白的裂解位点为PELMQGR/GLF,属于低致病性病毒,与以往在其他国家(蒙古、瑞典、荷兰、泰国、日本等)野鸟中分离的H10亚型病毒处于同一分支。

关键词： H10亚型禽流感病毒洞庭湖区监测遗传进化

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通过载体表达siRNAs抑制禽流感病毒复制的研究

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科技导报 2006年第3期24卷 9-13页

作者：操胜刘光亮孟庆文杨增岐亓文宝于康震吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 农业部畜牧兽医总站北京100026 西北农林科技大学动物科技学院

禽流感病毒是养禽业危害最严重的病原微生物之一。为探讨小干涉RNA(siRNA)对A型禽流感病毒复制的干扰作用,以H5亚型AIV PB2基因为靶序列,设计合成了4对编码siRNAs的DNA序列,将其克隆到psiRNA-hH1neo载体中,构建siRNAs表达载体,鉴定正确... 详细信息

禽流感病毒是养禽业危害最严重的病原微生物之一。为探讨小干涉RNA(siRNA)对A型禽流感病毒复制的干扰作用,以H5亚型AIV PB2基因为靶序列,设计合成了4对编码siRNAs的DNA序列,将其克隆到psiRNA-hH1neo载体中,构建siRNAs表达载体,鉴定正确后将重组质粒转染MDCK细胞,采用G418筛选建立抗性细胞系,用血凝(HA)试验和real time RT-PCR试验检测抑制效果, 在细胞水平筛选出具有高效抑制AIV复制的2个靶位点PB2-1154、PB2-342、为AIV的基因功能研究,抗病毒药物的开发和转基因动物的研究奠定了基础。

关键词：禽流感病毒聚合酶Ⅱ基因 RNA干扰

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