检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 414-418页

作者：文雪霞包红梅孙佳善赵玉辉王云鹤姜永萍陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MA... 详细信息

为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MAb的杂交瘤细胞,亚型鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。Western blot鉴定表明,这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白。间接免疫荧光鉴定表明,这2株MAbs均能够识别真核表达的NS1蛋白。利用噬菌体展示技术得到D9对应的短肽WNLNTV,与NS1蛋白aa 182～aa 187基本匹配,提示182WNDNTV187为NS1蛋白的一个线性表位。该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。

关键词：禽流感 NS1蛋白单克隆抗体抗原表位

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H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国兽医科学 2013年第12期43卷 1224-1230页

作者：包红梅赵玉辉李一经王秀荣陈化兰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒(H7AIV)血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立了一种基于反转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)技术的H7亚型禽流感病毒诊断方法... 详细信息

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒(H7AIV)血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立了一种基于反转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)技术的H7亚型禽流感病毒诊断方法。结果显示,该方法对H7AIV RNA的最小检测限为0.1pg,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 100倍;全部反应可在1.5h内完成;在反应体系中添加Fluorescent Detection Reagent染料后,可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H7亚型禽流感病毒的快速诊断方法。

关键词： H7亚型禽流感病毒反转录环介导恒等温扩增快速检测

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H6亚型禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 142-145页

作者：谭丹邓国华施建忠刘道新陈化兰湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为快速检测临床样品中的H6亚型禽流感病毒(AIV),本研究通过分析流感数据库中H6亚型的HA基因,在HA保守区设计一对引物,建立一种用于扩增H6亚型禽流感病毒HA基因的一步法RT-PCR检测方法,扩增片段为327 bp。采用该方法对H6亚型AIV的尿囊液1... 详细信息

为快速检测临床样品中的H6亚型禽流感病毒(AIV),本研究通过分析流感数据库中H6亚型的HA基因,在HA保守区设计一对引物,建立一种用于扩增H6亚型禽流感病毒HA基因的一步法RT-PCR检测方法,扩增片段为327 bp。采用该方法对H6亚型AIV的尿囊液10倍倍比稀释样品进行检测,结果显示最低检出量为102.5EID50/mL。用该方法检测其他亚型AIV和鸡新城疫病毒等病原均为阴性,具有良好的特异性。对H6 AIV人工感染鸡的咽喉、泄殖腔棉拭子样品进行一步法RT-PCR检测,并与病毒分离进行比较,显示该方法对棉拭子的检测极限可达102.5EID50/mL,同时利用该方法及病毒分离对临床样品进行检测,两者检测结果一致。实验结果表明该RT-PCR方法具有较好的特异性、敏感性,可以应用于临床样品的实验室检测。

关键词：禽流感病毒一步法RT-PCR H6亚型

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H6N6亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 346-349页

作者：张国权王国俊罗维玉姜永萍施建忠邓国华田石杨孝朴陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立H6N6亚型禽流感病毒(AIV)A/Chicken/GuangDong/S1311/10(W-CKGD)反向遗传操作系统,本研究构建了W-CKGD的8个重组质粒,拯救出AIV A/Chicken/GuangDong/S1311/10(R-CKGD)。全基因序列测定结果表明,救获病毒R-CKGD与野生病毒W-CKGD的核苷酸序列完全相同。R-CKGD与W-CKGD具有相同的受体结合特性和对BALB/c小鼠均呈低致病性,以106EID50剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,病毒仅在小鼠的呼吸道复制,可以引起小鼠体重下降但均不造成死亡。实验结果表明,R-CKGD与W-CKGD保持了一致的生物学特性,从而为进一步研究H6亚型AIV的致病机理及跨宿主传播机制等提供了良好的平台。

关键词： H6N6 禽流感病毒反向遗传操作系统

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禽流感病毒同义NP蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 464-467页

作者：田石邓国华单继艳施建忠张国权陈普成柳金雄文雪霞姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为建立通用型禽流感病毒(AIV)快速检测方法,本研究将合成的同义NP(ConsNP)基因克隆于pET30a中,利用大肠杆菌系统进行原核表达,以纯化重组ConsN P蛋白作为包被抗原,建立了检测AIVNP抗体的间接ConsNP-ELISA方法,并优化了反应条件。结果表... 详细信息

为建立通用型禽流感病毒(AIV)快速检测方法,本研究将合成的同义NP(ConsNP)基因克隆于pET30a中,利用大肠杆菌系统进行原核表达,以纯化重组ConsN P蛋白作为包被抗原,建立了检测AIVNP抗体的间接ConsNP-ELISA方法,并优化了反应条件。结果表明:抗原包被量为1μg/孔;封闭剂为5%脱脂乳;一抗血清稀释度为1∶200;H RP标记的兔抗鸡IgG(酶标二抗)稀释度为1∶20 000;阴阳性临界值为:O D490nm值>0.239。该间接ELISA方法与其他亚型A IV阳性血清均呈阳性反应,与新城疫病毒,马力克病病毒,禽传染性囊病病毒阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性和敏感性。本研究为进一步研制通用型的禽流感ConsN P-ELISA检测试剂盒奠定了基础。

关键词：禽流感病毒同义NP蛋白 ELISA 检测

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10株H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的序列分析

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中国畜牧兽医 2013年第8期40卷 13-19页

作者：刘彦云刘春国王寿山张超林王伟吕让刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了解中国目前H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)血凝素(HA)基因的遗传变异情况,对中国不同地区分离的10株H9N2亚型AIV的HA基因进行扩增、克隆和测序,并对所获得的HA全序列进行同源性和遗传进化分析。结果表明,10个分离... 详细信息

为了解中国目前H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)血凝素(HA)基因的遗传变异情况,对中国不同地区分离的10株H9N2亚型AIV的HA基因进行扩增、克隆和测序,并对所获得的HA全序列进行同源性和遗传进化分析。结果表明,10个分离株的裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;10个分离株有7～9个潜在糖基化位点,由于基因突变有些HA基因出现了新的糖基化位点;与参考株相比,发现了4个抗原表位的突变,这些表位的突变可能引起病毒致病性的改变;受体结合位点除198位有变异外,其他位点均较保守;6株病毒234位氨基酸均为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特征;10个分离株HA基因与国内疫苗株的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.4%～99.2%和92.2%～98.7%;10个分离株同属于欧亚谱系中的A/duck/Hong Kong/Y280/97群,但差异显著,为此本试验又将其分为4个不同的亚群。人工感染排毒试验结果表明,BJ15和NJ17分离株在鸡体内具有较强的复制能力,排毒周期较长且排毒量也较大,而S145N的漂变导致在145—147位氨基酸多出1个糖基化位点NGT,可能是分离株复制能力增强的原因。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型 HA基因序列分析致病力

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环洞庭湖地区主要活禽批发市场H9亚型禽流感的监测

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中国兽医科学 2013年第5期43卷 466-469页

作者：黄建龙邓国华范仲鑫王昌建何世成汪洪冰邱立新鲁杏华刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410007 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解环洞庭湖地区主要活禽批发市场H9亚型禽流感的分布和流行情况,科学制定H9亚型禽流感的防控措施,2009-2011年冬春季节,对环洞庭湖地区主要活禽批发市场H9亚型禽流感进行系统的监测。结果显示,2009年、2010年和2011年活禽批发市场... 详细信息

为了解环洞庭湖地区主要活禽批发市场H9亚型禽流感的分布和流行情况,科学制定H9亚型禽流感的防控措施,2009-2011年冬春季节,对环洞庭湖地区主要活禽批发市场H9亚型禽流感进行系统的监测。结果显示,2009年、2010年和2011年活禽批发市场中家禽H9亚型禽流感病毒分离率分别为5.2%、14.3%和15.0%,呈上升趋势。在鸡、鸭、鹅拭子中都检测到H9亚型禽流感病毒,其中鸡拭子H9亚型禽流感隐性带毒最为严重,高达23.6%。对部分分离的病毒进行测序分析,都属于CK/BJ/1/94亚系。提示环洞庭湖地区主要活禽批发市场H9亚型禽流感防控形势严峻。

关键词：活禽批发市场 H9亚型禽流感监测

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禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

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2013新型疫苗、重组蛋白及多肽药物研发注册与质量评价研讨会

作者：刘明张新涛刘春国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感参考实验室

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱... 详细信息

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导后经SDS-PAGE和Western blot鉴定得到与预期值相符的重组融合蛋白。融合蛋白得到高效可溶性表达,表达量约占菌体表达量的60%。间接ELISA表明,通过MBP树脂柱分离纯化的重组蛋白具有较好的免疫原性,该试验为M2e亚单位疫苗研究的进一步开展奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 M2e表位疫苗免疫原性

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鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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畜牧与兽医 2013年第10期45卷 6-9页

作者：林源柳金雄陈普成姜永萍华荣虹邬丽李奇蒙丁蕾蕾刘毅刘道新陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 湖南省动物疫病预防与控制中心湖南长沙410007

用原核表达并纯化的鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)E蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,筛选到1株分泌针对DTMUV的E蛋白的单抗融合细胞,并命名为LY12。Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)分析表明,所获得细... 详细信息

用原核表达并纯化的鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)E蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,筛选到1株分泌针对DTMUV的E蛋白的单抗融合细胞,并命名为LY12。Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)分析表明,所获得细胞分泌的抗体只与DTMUV的E蛋白发生特异性反应,与日本脑炎病毒(JEV)和西尼罗病毒(WNV)无交叉反应。进一步鉴定该单抗的抗体亚类为IgG1,轻链为κ链。抗E蛋白单克隆抗体的制备为DTMUV的诊断和相关基础研究奠定了基础。

关键词：鸭坦布苏病毒 E蛋白单克隆抗体鉴定

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7株H3亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析

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畜牧与兽医 2013年第12期45卷 6-10页

作者：黄建龙邓国华谭丹王昌建朱春霞范仲鑫何世成汪洪冰张菁邱立新鲁杏华刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410007 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南省动物卫生监督所湖南长沙410007

采用RT—PCR技术对近年来洞庭湖区分离的H3亚型禽流感毒株的HA基因进行扩增、克隆和测序，并对所得全序列进行同源性和遗传演化分析。结果显示：本试验分离到的7株H3亚型禽流感病毒的HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入，属于低... 详细信息

采用RT—PCR技术对近年来洞庭湖区分离的H3亚型禽流感毒株的HA基因进行扩增、克隆和测序，并对所得全序列进行同源性和遗传演化分析。结果显示：本试验分离到的7株H3亚型禽流感病毒的HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入，属于低致病性病毒；7株H3亚型毒株之间HA基因核苷酸同源性在87．6％～98．4％之间，推导氨基酸序列的同源性在93．7％～99．1％之间；从HA基因遗传演化关系来看，7株病毒毒可分为三大分支，与以往从蒙古、韩国、越南、西伯利亚及我国香港、广西、三江等地分离的H3亚型毒株关系密切，提示其HA基因来源非常复杂。

关键词： H3亚型禽流感 HA基因同源性遗传演化

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