检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2019年第6期41卷 584-589页

作者：刘冉黄萌萌陈平朱金鲁谢芳刘思国张跃灵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队

为了筛选和鉴定用于猪链球菌(***)致病因子和致病机制研究的启动子,本研究通过质谱鉴定了来自***2型05ZYH33菌株的5个高丰度蛋白质,并通过其驱动GFP蛋白和甘露糖苷酶SSU05_1921的表达水平,评估了这5个蛋白相应的基因启动子的强弱。结果... 详细信息

为了筛选和鉴定用于猪链球菌(***)致病因子和致病机制研究的启动子,本研究通过质谱鉴定了来自***2型05ZYH33菌株的5个高丰度蛋白质,并通过其驱动GFP蛋白和甘露糖苷酶SSU05_1921的表达水平,评估了这5个蛋白相应的基因启动子的强弱。结果显示,这5种蛋白质分别为SSU05_0177、SSU05_0530、SSU05_1503、SSU05_1815和SSU05_1868,相应的5个启动子P0177、P0530、P1503、P1815和P1868均能够有效驱动GFP在***和***中的高水平表达,但是P1815、P0177和P1868不能驱动SSU05_1921在***中的表达。P0530和P1503能够驱动SSU05_1921在***中的表达,并且P1503启动子驱动GFP和SSU05_1921的表达水平均比P0530启动子驱动的高两倍以上。因此,P0530和P1503是***的强启动子,并且P1503更强于P0530。这在高水平表达GFP用于标记菌体,以及构建无启动子基因的回复突变菌株中发挥关键作用,在***遗传操作中具有很好的应用前景。

关键词：猪链球菌强启动子筛选和鉴定翻译延伸因子EF-Tu 烯醇化酶

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

沙门氏菌菌蜕佐剂增强结核分枝杆菌4种蛋白的免疫作用研究

引用

中国预防兽医学报 2019年第4期41卷 396-401页

作者：李鹤党光辉于申业程玉笛刘虹秀宋宁宁陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队

探究肠炎沙门氏菌菌蜕(ghost)佐剂对结核分枝杆菌(MTB)4种抗原的免疫增强作用,本研究以MTB中的Rv3802、Rv0394c(SEC)、Rv0199及E6c10(ESAT6与CFP10融合蛋白)蛋白为免疫原,应用小鼠模型评价沙门氏菌菌蜕对MTB4种抗原的免疫佐剂效应。结... 详细信息

探究肠炎沙门氏菌菌蜕(ghost)佐剂对结核分枝杆菌(MTB)4种抗原的免疫增强作用,本研究以MTB中的Rv3802、Rv0394c(SEC)、Rv0199及E6c10(ESAT6与CFP10融合蛋白)蛋白为免疫原,应用小鼠模型评价沙门氏菌菌蜕对MTB4种抗原的免疫佐剂效应。结果显示,蛋白加菌蜕佐剂组可以刺激小鼠产生持久高水平的抗体,并且菌蜕佐剂的免疫增强效果高于弗氏不完全佐剂;IgG1/IgG2a的比率增高,提示蛋白加菌蜕佐剂组小鼠趋向于Th2型免疫反应,同时可以诱导淋巴细胞分化为CD4+T细胞亚群并产生IFN-γ及IL-4细胞因子;病理组织学显示以菌蜕佐剂配伍蛋白制备的亚单位疫苗具有良好的安全性。本研究为结核病的预防和新型疫苗的研发奠定了一定的基础。

关键词：结核病菌蜕佐剂亚单位疫苗免疫应答

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛副结核分枝杆菌的分离及鉴定

引用

中国预防兽医学报 2018年第12期40卷 1177-1180页

作者：刘虹秀程玉笛党光辉李田田李鹤崔子寅宋宁宁陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为进一步确定新疆某奶牛场疑似感染副结核病的病原菌,本研究采集了37头疑似患病奶牛的直肠刮取物,应用卵黄琼脂培养基对其进行分枝杆菌的分离培养,经菌落形态观察、抗酸染色以及多重PCR等方法对分离菌进行病原学鉴定,并利用副结核分枝... 详细信息

为进一步确定新疆某奶牛场疑似感染副结核病的病原菌,本研究采集了37头疑似患病奶牛的直肠刮取物,应用卵黄琼脂培养基对其进行分枝杆菌的分离培养,经菌落形态观察、抗酸染色以及多重PCR等方法对分离菌进行病原学鉴定,并利用副结核分枝杆菌亚型鉴定引物进行PCR扩增及测序分析。结果显示,分离培养的7株分离菌均为抗酸染色阳性的分枝杆菌;经多重PCR鉴定,其中3株谱型与副结核分枝杆菌k10参考株一致;进一步通过基因分型的PCR扩增及测序分析,确定这3株分离菌均为牛副结核分枝杆菌。本研究为进一步开展该菌病原学和流行病学研究提供了必要的研究资料。

关键词：副结核分枝杆菌分离培养多重PCR 亚型鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛副结核分枝杆菌多组分亚单位疫苗的初步研究

引用

中国预防兽医学报 2018年第10期40卷 940-944页

作者：程玉笛党光辉李鹤李哲刘虹秀宋宁宁刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为筛选出最佳的预防副结核病的候选疫苗,本研究评价了副结核分枝杆菌(MAP)培养上清、MAP细胞壁和MAP灭活菌体的免疫保护效果。将160只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为8组,每组20只,分别为PBS组、菌影(Ghost)组、弗氏不完全佐剂(IFA)组、上... 详细信息

为筛选出最佳的预防副结核病的候选疫苗,本研究评价了副结核分枝杆菌(MAP)培养上清、MAP细胞壁和MAP灭活菌体的免疫保护效果。将160只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为8组,每组20只,分别为PBS组、菌影(Ghost)组、弗氏不完全佐剂(IFA)组、上清+Ghost组、上清+IFA组、细胞壁+Ghost组、细胞壁+IFA组和灭活苗组,分别经皮下注射免疫后在不同的时间点采集小鼠尾静脉血,利用间接ELISA检测小鼠血清中抗体效价。三免后以5×10~8cfu/只剂量进行腹腔攻毒。结果显示:细胞壁+IFA组小鼠的抗体水平明显高于其它组(p<0.001),细胞壁+Ghost组次之(p<0.001);除阴性对照组外,各组小鼠IgG1的滴度均高于IgG2a (p<0.001);细胞壁+IFA组和细胞壁+Ghost组的小鼠脾脏淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4和IL-10的含量显著高于其它实验组(p<0.001);细胞壁+IFA组IL-2的含量明显高于其它实验组(p<0.001),细胞壁+Ghost组次之(p<0.01);细胞壁+IFA组小鼠的肝脏、脾脏和小肠组织的荷菌量显著少于其它实验组(p<0.01),细胞壁+Ghost组次之(p<0.05),表明MAP细胞壁可以刺激机体产生较高水平的抗体,机体的免疫反应倾向于体液免疫,且细胞壁对攻毒小鼠的保护效果最好。本研究为反刍动物副结核病疫苗的研制提供了实验依据。

关键词：副结核分枝杆菌培养上清细胞壁灭活苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素各亚基处理PK-15细胞的基因表达谱分析

引用

中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 371-374页

作者：牛惠李艳玲周泷李大鹏张艳禾李刚谢芳王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为研究副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测... 详细信息

为研究副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测结果显示,Cdt A、Cdt B和Cdt C作用PK-15细胞后,处理细胞中分别有91个基因、126个基因及135个基因出现差异表达变化。根据芯片结果选取变化较显著的基因进行荧光定量RT-PCR验证,结果与基因芯片检测结果基本一致。基因注释(GO)分析表明,这些蛋白分别参与免疫系统调节、生物调控、代谢过程和定位等过程。本研究结果为进一步研究CDT的致病作用机制奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素表达谱基因芯片

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

结核分枝杆菌三基因融合表达的亚单位疫苗研究

引用

中国预防兽医学报 2017年第11期39卷 927-931页

作者：王磊党光辉李鹤宋宁宁陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为筛选出安全、有效的抗结核分枝杆菌感染的亚单位疫苗,本研究选择了9个结核分枝杆菌的重要抗原(Rv0199、Rv0394c、Omp A、Rv3802c、Ag85a、TB10.4、Rv2660c、Rv0125、Mpt51),利用小鼠模型评价其免疫效果。每3个抗原一组串联融合表达,... 详细信息

为筛选出安全、有效的抗结核分枝杆菌感染的亚单位疫苗,本研究选择了9个结核分枝杆菌的重要抗原(Rv0199、Rv0394c、Omp A、Rv3802c、Ag85a、TB10.4、Rv2660c、Rv0125、Mpt51),利用小鼠模型评价其免疫效果。每3个抗原一组串联融合表达,将其分别与弗氏不完全佐剂及沙门氏菌菌蜕混合,共分成7组,通过皮下注射的方式免疫小鼠,共免疫3次。每次免疫后两周检测其血清抗体分型与效价、脾脏淋巴细胞的分化及其细胞因子的分泌。结果表明,这些融合蛋白均能够刺激机体产生高滴度的抗体,具有较强的免疫原性,其中融合蛋白Rv0199-Rv0394c-Omp A在一免后2周即可以刺激机体产生较高滴度的抗体。抗体分型结果显示,除阴性对照组外,其余组小鼠血清中Ig G1的滴度均高于Ig G2a。并且机体的免疫反应倾向于体液免疫。其中,沙门氏菌菌蜕的佐剂作用与商品化的弗氏不完全佐剂免疫效果一致。本研究为研制结核分枝杆菌亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗佐剂免疫反应

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

耻垢分枝杆菌诱导中性粒细胞胞外诱捕网形成的研究

引用

中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1154-1158页

作者：臧鑫鑫党光辉王忠星刘虹秀崔子寅崔莹莹宋宁宁刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞抵御病原微生物重要的防御机制之一,NETs能够在体内外条件下捕获并杀灭病原微生物。为研究模式菌株-耻垢分枝杆菌(MS)与中性粒细胞的相互作用,本研究通过分离牛外周血中性粒细胞,将标记红色荧光... 详细信息

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞抵御病原微生物重要的防御机制之一,NETs能够在体内外条件下捕获并杀灭病原微生物。为研究模式菌株-耻垢分枝杆菌(MS)与中性粒细胞的相互作用,本研究通过分离牛外周血中性粒细胞,将标记红色荧光的MS与中性粒细胞共孵育,通过激光共聚焦观察NETs的形成;采用Pi-coGreen~?dsDNA试剂盒定量分析胞外ds DNA的释放量;并且通过菌落计数统计MS的存活情况。结果显示,MS能够诱导中性粒细胞形成NETs,胞外游离DNA的释放量随着时间的延长而逐渐增多,与对照组相比差异极显著(p<0.01或p<0.001),且NETs能够杀灭MS。本研究为后续利用MS作为模式菌研究结核分枝杆菌重要蛋白功能的研究提供参考依据。

关键词：耻垢分枝杆菌中性粒细胞中性粒细胞胞外诱捕网

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

趋化因子CCL26 C端截短肽的抗菌活性及抗生物被膜作用的研究

引用

中国预防兽医学报 2022年第6期44卷 642-647页

作者：张会会昝亚楠金明洁梁思宇刘思国谢芳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为探究趋化因子CCL26 C端截短肽(26C)的生物学活性,本研究利用倍比稀释法测定了不同浓度的26C对耐多粘菌素B(PxB)大肠杆菌K1的浓度-杀菌曲线;利用外膜通透性试验(NPN)测定26C对细菌外膜的破坏效果;利用ATP泄露试验测定26C对细菌内容物... 详细信息

为探究趋化因子CCL26 C端截短肽(26C)的生物学活性,本研究利用倍比稀释法测定了不同浓度的26C对耐多粘菌素B(PxB)大肠杆菌K1的浓度-杀菌曲线;利用外膜通透性试验(NPN)测定26C对细菌外膜的破坏效果;利用ATP泄露试验测定26C对细菌内容物泄露的影响;利用透射电镜观察26C作用于细菌细胞膜后对菌体及内容物的影响;利用结晶紫染色法和激光共聚焦试验测定26C对铜绿假单胞菌生物被膜(BF)形成的影响;利用溶血活性试验检测26C对人红细胞的溶血活性,并利用MTT法测定其对人表皮角质形成细胞HaCaT的细胞毒性。结果显示,26C在不同浓度下对K1均有良好的杀菌活性,4μmol/L时可以完全杀灭细菌,使活菌数降低4log;26C(2μmol/L)通过破坏细菌细胞膜完整性并导致细菌内容物泄露而杀死细菌;低浓度的26C(1μmol/L)即可显著降低BF的形成;其在高达128μmol/L的浓度下对Ha Ca T细胞仍无溶血活性,且在1μmol/L~16μmol/L浓度对Ha Ca T细胞无毒性,其在32μmol/L~64μmol/L时对Ha Ca T细胞的毒性较低。本研究首次证实了CCL26 C端截短肽26C具有良好的抗菌活性和抗BF形成的能力,又无溶血活性和细胞毒性,为其作为新型药物的临床研究和应用提供数据参考。

关键词：趋化因子抗菌肽耐药抗菌活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪链球菌2型05ZYH33糖苷水解酶SSU05_1921和SSU05_1922的表达纯化及功能研究

引用

中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 269-276页

作者：卫东高广娟武柳君朱金鲁刘思国刘冉张跃灵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为了研究猪链球菌2型(SS2)05ZYH33菌株高甘露糖型N-聚糖水解酶的结构域及功能,本研究通过BLAST检索,发现该菌株中存在分别与肺炎链球菌高甘露糖型N-聚糖水解酶SpGH92和EndoD同源的蛋白,分别为SSU05_1921(后简写为1921)和SSU05_1922(后... 详细信息

为了研究猪链球菌2型(SS2)05ZYH33菌株高甘露糖型N-聚糖水解酶的结构域及功能,本研究通过BLAST检索,发现该菌株中存在分别与肺炎链球菌高甘露糖型N-聚糖水解酶SpGH92和EndoD同源的蛋白,分别为SSU05_1921(后简写为1921)和SSU05_1922(后简写为1922)。本研究通过原核表达系统和Ni-NTA柱亲和层析纯化,获得了1921和1922全长蛋白,以及1922蛋白的糖苷水解酶结构域1922-Cat。通过6个蛋白反应(不加蛋白的阴性对照、分别仅加1921和1922的蛋白反应2、3,同时加入1921和1922的蛋白反应4、5及同时加入1921和1922-Cat的蛋白反应6)的RNase B去糖基化试验,反应结束后分别通过SDS-PAGE及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析RNase B的水解(即去糖基化)产物,研究1921和1922水解高甘露糖型N-聚糖的功能。结果显示,1921为外切α-1,2-甘露糖苷酶,水解RNase B高甘露糖型N-聚糖末端的α-1,2-甘露糖苷键;1922为内切β-1,4-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶,水解RNase B高甘露糖型N-聚糖中的几丁二糖,作用位点为β-1,4-N-乙酰氨基葡萄糖苷键。且只有在1921去除所有的α-1,2-甘露糖苷键,1922才能彻底水解高甘露糖型N-聚糖。二者的联合作用(反应4)结果显示,在15 ku处出现单一条带,表明二者联合作用于RNase B的高甘露糖型N-聚糖后,将其彻底去糖基化为R-GlcNAc,且1921与1922-Cat的联合作用与上述联合作用结果一致,表明1922的主要催化结构域即为1922-Cat。因此选择1921与1922-Cat联合作用于RNase B的去糖基化反应研究不同pH、不同金属离子及EDTA和EGTA螯合物对该联合作用的影响。结果显示,该联合作用的最适pH为7.0~8.0,二价金属离子Cu^(2+)、Fe^(2+)、Ni^(2+)、Co^(2+)、Zn^(2+)均明显抑制1921与1922-Cat的联合作用,Ca;部分抑制该联合作用,而二价离子Mg;、Mn;和一价离子K^(+)、Na^(+)及二价金属离子螯合物EDTA和EGTA对该联合作用无明显抑制作用,表明1921和1922-Cat的联合作用不依赖于二价金属离子。本研究首次较详细探究了SS2高甘露糖型N-聚糖水解酶的功能和生化特性,为解析SS定植和感染过程中糖类营养物质获取的机制奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型05ZYH33 SSU05_1921 SSU05_1922 糖苷水解酶高甘露糖型N-聚糖

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

提高表达分选酶A的猪链球菌突变株的构建及初步评价

引用

中国预防兽医学报 2021年第1期43卷 7-13页

作者：朱金鲁陈平黄萌萌刘冉卫东刘思国张跃灵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为了提高猪链球菌(Streptococcus suis,SS)05ZYH33菌株中分选酶A(SrtA)的表达量,本研究利用同源重组技术,将强启动子Peno、SrtA基因与红霉素抗性基因融合并转化05ZYH33野生菌株(05ZYH33-WT),构建SS SrtA提高表达的突变株05ZYH33-srtAe,并对05ZYH33-srtAe突变株和05ZYH33-WT进行生长特性分析和SrtA蛋白的western blot检测;进一步构建SS SrtA基因缺失株05ZYH33-srtA^(Δ)作为对照,通过检测05ZYH33-WT、05ZYH33-srtAe和05ZYH33-srtAΔ菌株表面蛋白SSU05_0630的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活性,初步评价SrtA的提高表达在SS表面蛋白锚定中的作用。Western blot结果显示,正确构建了SS SrtA提高表达的突变株05ZYH33-srtAe,且该菌株的生长速度和05ZYH33-WT基本相同,但SrtA的表达量却提高了2.4倍。菌株表面蛋白SSU05_0630的NAG活性检测结果显示,05ZYH33-srtA^(Δ)菌株的NAG活性和本实验室前期构建的SSU05_0630基因缺失株ssu05_0630^(Δ)相同,检测不到SSU05_0630蛋白的NAG活性,表明SSU05_0630蛋白是SrtA的底物,通过SrtA锚定到SS的表面。05ZYH33-srtAe和05ZYH33-WT菌株表面蛋白SSU05_0630的NAG活性无明显差异,即SrtA表达量的提高并没有提高SSU05_0630蛋白在SS表面的锚定量。本研究首次构建了提高SS SrtA表达量的突变株,并对SrtA表达量的提高是否对SS表面蛋白锚定产生影响进行了初步探究,为进一步研究SrtA表达量的提高对SS其他表面蛋白锚定量的影响,以及优化SS表面蛋白展示系统奠定了基础。

关键词：猪链球菌分选酶A 提高表达强启动子胞壁锚定细菌表面展示

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：