检索结果-内蒙古大学图书馆

猪链球菌LPxTG蛋白HP0197与外源蛋白的融合表达及融合蛋白抗原活性的检测

中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 532-537页

作者：朱金鲁卫东高广娟陈平刘思国张跃灵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为了从蛋白水平探究猪链球菌(S. suis)的表面LPxTG(Leu-Pro-x-Thr-Gly,x表示任何氨基酸)蛋白HP0197在S. suis表面展示外源抗原的可行性,本研究分别经PCR扩增HP0197蛋白的功能区编码基因片段hp0197(去除了HP1097全长蛋白aa1~aa40的转运... 详细信息

为了从蛋白水平探究猪链球菌(S. suis)的表面LPxTG(Leu-Pro-x-Thr-Gly,x表示任何氨基酸)蛋白HP0197在S. suis表面展示外源抗原的可行性,本研究分别经PCR扩增HP0197蛋白的功能区编码基因片段hp0197(去除了HP1097全长蛋白aa1~aa40的转运信号肽序列和aa524~aa56的CWA基序)、hp0197-18 ku基因片段(即HP0197蛋白的18 ku结构域的编码基因)、hp0197-Loop基因片段(HP0197蛋白aa201~aa523的编码基因片段),并通过融合PCR将gfp基因融合至上述两段基因即HP0197蛋白的18 ku结构域和Loop区编码基因之间,并构建表达HP-GFP融合蛋白的重组质粒及表达HP0197蛋白的重组质粒,经测序鉴定后将其分别转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导后采用SDS-PAGE鉴定。采用Ni-NTA亲和树脂方法纯化HP0197蛋白和HP-GFP融合蛋白后分别免疫小鼠,经间接ELISA检测首免后不同时间各组小鼠血清中的HP0197抗体和GFP抗体水平,评价HPGFP融合蛋白和HP0197蛋白的抗原活性。SDS-PAGE结果显示,分别经原核系统表达并纯化了HP-GFP融合蛋白和HP0197蛋白。间接ELISA结果显示,单独免疫HP0197蛋白的小鼠产生了HP0197抗体,但未产生GFP抗体;而免疫HP-GFP融合蛋白的小鼠,既产生了HP0197抗体,也产生了GFP抗体,且在首免后28 d这两种抗体效价均达1:204 800。上述结果表明在HP0197蛋白的18 ku结构域和Loop区之间插入外源蛋白,可在保留HP0197蛋白自身抗原活性的前提下,有效发挥外源蛋白的抗原活性。本研究首次在蛋白水平上证实了S. suis的LPxTG蛋白HP0197作为载体蛋白用于在S. suis表面展示外源蛋白的可行性,为进一步构建S. suis表面蛋白展示系统奠定了基础。

关键词：猪链球菌 LPxTG蛋白 HP0197 细菌表面展示载体蛋白

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结核分枝杆菌PE26蛋白调节巨噬细胞免疫反应进而促进分枝杆菌胞内定殖

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中国预防兽医学报 2023年第5期45卷 502-509页

作者：陈凡若党光辉张嘉俊鹿萍崔宁崔莹莹崔子寅刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

结核分枝杆菌(MTB)PE/PPE家族蛋白介导MTB与宿主间的相互作用,调节宿主炎症反应,有助于其的存活和疾病发展。为研究PE/PPE家族中PE26蛋白的作用,本实验利用PCR扩增pe26基因片段,构建重组载体p AIN-PE26,转化耻垢分枝杆菌(Ms)构建重组菌p... 详细信息

结核分枝杆菌(MTB)PE/PPE家族蛋白介导MTB与宿主间的相互作用,调节宿主炎症反应,有助于其的存活和疾病发展。为研究PE/PPE家族中PE26蛋白的作用,本实验利用PCR扩增pe26基因片段,构建重组载体p AIN-PE26,转化耻垢分枝杆菌(Ms)构建重组菌p AIN-PE26/Ms,经western blot鉴定结果显示,p AIN-PE26/Ms正确表达重组PE26蛋白(rPE26)。利用差速离心分离p AIN-PE26/Ms亚细胞组分,经western blot鉴定结果显示,r PE26定位于p AIN-PE26/Ms细胞壁。通过p AIN-PE26/Ms的菌落形态观察和生长曲线测定,结果显示,p AIN-PE26/Ms菌体表面较p AIN/Ms对照组更粗糙,脊不规则且相对较高,褶皱不明显;p AIN-PE26/Ms生长速度较对照组极显著增加(P<0.001)。利用H37Ra感染巨噬细胞,通过q RT-PCR检测pe26转录水平,结果显示,H37Ra感染巨噬细胞后pe26转录水平极显著增加(P<0.001)。利用p AIN-PE26/Ms感染巨噬细胞,分别通过q RT-PCR、ELISA检测细胞因子转录和表达水平,采用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验、流式细胞术和胞内定殖的方法检测细胞毒性,结果显示,p AIN-PE26/Ms促进宿主细胞炎性细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α)的转录和表达(P<0.05);r PE26促进巨噬细胞死亡,且在感染48 h时促进细胞早期凋亡(P<0.05);r PE26促进p AIN-PE26/Ms在巨噬细胞内的定殖(P<0.01)。上述结果首次表明,定位于细胞壁的r PE26在感染巨噬细胞过程中促进p AIN-PE26/Ms的生长、炎性细胞因子的转录和表达、巨噬细胞凋亡和胞内定殖。本实验为解析PE26参与分枝杆菌的致病机制和MTB调节宿主免疫反应的机制提供一定参考依据。

关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞 PE/PPE家族蛋白 PE26

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基于溶菌酶释放蛋白的猪链球菌间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2020年第9期42卷 912-917页

作者：乔宏龚俊栾慧李刚刘思国王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为建立猪链球菌病的快速诊断方法,本研究以纯化的原核表达的猪链球菌溶菌酶释放蛋白(MRP)为包被抗原,通过各反应条件的优化建立了检测猪链球菌(SS)血清抗体的间接ELISA方法。实验确定了最佳抗原包被浓度为0.05μg/mL、待检血清最佳稀释... 详细信息

为建立猪链球菌病的快速诊断方法,本研究以纯化的原核表达的猪链球菌溶菌酶释放蛋白(MRP)为包被抗原,通过各反应条件的优化建立了检测猪链球菌(SS)血清抗体的间接ELISA方法。实验确定了最佳抗原包被浓度为0.05μg/mL、待检血清最佳稀释倍数为1:400、最佳封闭液为5%脱脂乳、兔抗猪HRP-IgG的最佳稀释倍数为1:15000、抗体阴阳性临界值为0.226。特异性试验结果显示,利用本研究建立的ELISA方法检测100份背景清晰的阴性血清,检出其中97份阴性血清,3份阳性血清,特异性为97%。利用该ELISA方法检测副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀巴氏杆菌、大肠杆菌、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清,结果显示均为阴性,而猪链球菌2型(SS2)、SS7、SS9以及SS12阳性血清的检测结果均为阳性,表明该方法具有较强的特异性。敏感性试验结果显示,利用本研究建立的ELISA方法检测50份背景明确的阳性血清,检出其中48份阳性血清,2份阴性血清,敏感性为96%。当SS2阳性血清稀释倍数达1:3200时仍为阳性结果,表明该方法具有较高的敏感。重复性试验结果显示,该ELISA方法批内、批间最大变异系数分别为4.70%和7.20%,表明该方法的重复性较好。对100份临床猪血清样品检测结果显示,本研究建立的ELISA方法与玻片凝集试验的符合率为85.3%,符合率较高。对440份来自东北三省部分地区猪场的血清样品检测结果显示,SS抗体阳性率为27.7%(122/440)。表明,东北三省部分地区猪场SS的感染率较高。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法可以用于SS2、SS7、SS9以及SS12血清抗体的检测,为SS病的血清流行病学调查提供了可靠的技术手段。

关键词：猪链球菌重组MRP蛋白间接ELISA

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猪链球菌细菌素的筛选及理化特性分析

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中国预防兽医学报 2022年第4期44卷 363-368,376页

作者：王凌利杨亲祝瑶杨文琳曹俊刘思国张万江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为研究猪链球菌(SS)产生的细菌素,本研究以不同省份分离到的200株SS为研究对象,采用琼脂扩散法筛选具有抑菌作用的菌株;通过CGE网站进行ST型分型,利用PCR方法进行血清型分型;选出的菌株利用PCR方法检测细菌素相关基因;然后用BAGEL4对细... 详细信息

为研究猪链球菌(SS)产生的细菌素,本研究以不同省份分离到的200株SS为研究对象,采用琼脂扩散法筛选具有抑菌作用的菌株;通过CGE网站进行ST型分型,利用PCR方法进行血清型分型;选出的菌株利用PCR方法检测细菌素相关基因;然后用BAGEL4对细菌素相关基因进行全序列基因功能分析,同时采用PCR分段扩增其基因簇;并分析SS所产细菌素的理化特性。结果显示,从200株SS中筛选出了21株可产生抑菌物质的SS,它们分布于不同的ST型和血清型。其中菌株xj-144和38-3携带SS细菌素编码基因sss基因和suiA基因,经BAGEL4分析菌株xj-144仅存在一个与suicin 65核心肽相同的细菌素,并无其他潜在细菌素,其完整的基因簇含有10个ORFs,产生的细菌素排除有机酸、过氧化氢干扰后,其粗提取液具有一定的耐热性、酸碱耐受性和蛋白酶稳定性,并对部分病原菌具有抑菌作用。本研究为进一步研究SS细菌素奠定了一定的基础,为实现细菌素替代传统抗生素提供了科学参考。

关键词：细菌素猪链球菌羊毛硫细菌素基因簇

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猪链球菌细菌素基因膜接合转移的研究

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中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 465-470,507页

作者：王凌利杨亲祝瑶杨文琳曹俊刘思国张万江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为研究猪链球菌细菌素基因能否在同种和不同种属之间转移,本研究对供体菌xj-144的红霉素耐药基因ermB和四环素耐药基因tetO进行PCR鉴定,然后以携带猪链球菌细菌素基因的菌株xj-144为供体菌,分别以猪链球菌BAA和粪肠球菌JH2-2株为受体菌... 详细信息

为研究猪链球菌细菌素基因能否在同种和不同种属之间转移,本研究对供体菌xj-144的红霉素耐药基因ermB和四环素耐药基因tetO进行PCR鉴定,然后以携带猪链球菌细菌素基因的菌株xj-144为供体菌,分别以猪链球菌BAA和粪肠球菌JH2-2株为受体菌进行膜接合转移试验,并对接合子进行PCR检测,对经检测正确的接合子进行药敏试验,同时对接合子的细菌素基因簇和供体菌的可移动遗传元件经PCR鉴定,并对整合性接合元件进行基因序列分析。结果显示,供体菌xj-144携带红霉素耐药基因ermB和四环素耐药基因tetO,与受体菌BAA和JH2-2株分别进行滤膜接合转移试验后正确获得了接合子BM-1和JM-1,接合效率分别为8×10;和8×10^(-7)。药敏试验结果显示,供体菌xj-144对红霉素和四环素耐药,受体菌BAA和JH2-2株对红霉素和四环素均敏感,接合子BM-1和JM-1均对红霉素和四环素耐药。且接合子经PCR均扩增出了猪链球菌细菌素的suicin65基因簇;同时,从供体菌和接合子中均经PCR扩增到转座子整合酶int基因;序列分析结果显示,细菌素基因簇与耐药基因ermB、tetO共定位于一个新的整合性接合元件ICESsuxj-144中。上述结果首次证实了猪链球菌细菌素基因可以跨种属水平转移,并且该基因的水平转移与转座子有密切关系,本研究为进一步探究细菌素基因的转移提供了参考依据。

关键词：猪链球菌细菌素接合转移基因水平转移转座子

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鸡白痢沙门氏菌PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2021年第11期43卷 1178-1183页

作者：陆瑶丁仕豪曹俊刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为建立鸡白痢沙门氏菌(***)的快速PCR检测方法,本研究通过比对*** ATCC 9120株和其他14株常见沙门氏菌及部分禽大肠杆菌的全基因组序列,在*** ATCC 9120株SEEP 011400~SEEP011405处缺失一段约10 kb碱基的区域,在此区域的侧翼序列设计并... 详细信息

为建立鸡白痢沙门氏菌(***)的快速PCR检测方法,本研究通过比对*** ATCC 9120株和其他14株常见沙门氏菌及部分禽大肠杆菌的全基因组序列,在*** ATCC 9120株SEEP 011400~SEEP011405处缺失一段约10 kb碱基的区域,在此区域的侧翼序列设计并筛选了一对特异性引物,经反应条件的优化,建立了一种能够直接从鸡蛋样品中特异性检测***的PCR方法。并对该方法检测模拟鸡蛋样品的敏感性进行了评价,结果显示:该方法可以针对***特异性的扩增出576 bp的条带,而对其他常见致病性沙门氏菌血清型(31株)和非沙门氏菌(11株)均无扩增条带。该方法对***菌液检测的敏感性为10^(2)cfu/mL,利用本研究建立的方法直接检测污染***的鸡蛋样品时的最低检测限为10^(4)cfu/mL,且只需增菌8 h后,即可检测到10^(2)cfu/mL的***。利用该方法与其他PCR方法对模拟鸡蛋样品进行检测,对比检测结果,结果显示该方法敏感性为10^(4)cfu/mL,高于其他PCR方法。利用该方法对229份临床样品进行检测,结果显示阳性检出率为3.06%(7/229),与其他检测方法结果相符。本研究建立的***鉴别检测方法具有较高的特异性与敏感性,并且能够快速检测出鸡蛋中的***,为***的检测提供了一种快速、有效的方法。

关键词：鸡白痢沙门氏菌 PCR 快速检测

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利用sacB基因反向筛选法构建GFP分别融合于猪链球菌MapZ及PBP1b蛋白的融合菌株

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中国预防兽医学报 2022年第11期44卷 1149-1155页

作者：卫东陈平高广娟朱金鲁武柳君刘思国张跃灵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为在猪链球菌(***)中引入高效的反向筛选标记,本研究根据***密码子偏好性优化了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)蔗糖果聚糖酶基因sacB的密码子,并由公司合成后作为模板,采用PCR扩增sacB基因片段;采用PCR从相应模板中分别扩增***中的启... 详细信息

为在猪链球菌(***)中引入高效的反向筛选标记,本研究根据***密码子偏好性优化了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)蔗糖果聚糖酶基因sacB的密码子,并由公司合成后作为模板,采用PCR扩增sacB基因片段;采用PCR从相应模板中分别扩增***中的启动子序列(Peno)及含壮观霉素抗性基因(spc)的片段;再经重叠延伸PCR扩增融合基因片段Peno-sacB-spc(PSS)。以相应模板及引物分别经PCR扩增*** mapZ基因待融合位点上下游序列UP1和DN1及其pbp1b基因待融合位点上下游序列UP2和DN2、含正/反向筛选标记的片段PSS1和PSS2基因片段,以及用于替换PSS片段的绿色荧光蛋白(GFP)gfp1和gfp2基因片段;再分别通过重叠延伸PCR扩增构建中间菌株的融合片段UP1-PSS1-DN1、UP2-PSS2-DN2以及构建GFP融合菌株的融合片段UP1-GFP1-DN1、UP2-GFP2-DN2。采用同源重组的方法将UP1-PSS1-DN1和UP2-PSS2-DN2分别转化*** 05ZYH33菌株,经壮观霉素筛选引入PSS的中间菌株。PCR及测序鉴定结果表明获得了引入PSS片段的中间菌株PSS-mapZ和PSS-pbp1b。将WT、PSS-mapZ和PSS-pbp1b分别培养于含不同浓度蔗糖(10%、7.5%、5%和2.5%)的TSAS平板上,确定WT生长而PSS-mapZ和PSS-pbp1b中间菌株不生长的蔗糖浓度(用于筛选及构建GFP融合菌株)。通过比较分析最终确定反向筛选GFP融合菌株的最适蔗糖浓度约为7%。通过同源重组的方法分别将UP1-GFP1-DN1片段转化PSS-mapZ菌株、UP2-GFP2-DN2片段转化PSS-pbp1b菌株,分别经含7%蔗糖(生长)及含壮观霉素(不生长)的TSAS平板筛选。随机选择经筛选获得的100个单菌落计算筛选的阳性率。各取6个单菌落经PCR及测序鉴定。结果显示,筛选菌株的阳性率在52%~75%。PCR及测序结果显示,获得的两种重组菌株中的gfp基因片段确实分别替换了PSS-mapZ和PSS-pbp1b中的相应PSS,表明正确构建了融合GFP的重组菌株GFP-mapZ和GFPpbp1b。本研究首次构建了高效的正/反向筛选标记PSS,以及无痕的*** GFP-mapZ和GFP-pbp1b融合菌株,为快速无痕的***遗传操作及深入研究***相关分子机制奠定了基础。

关键词：猪链球菌无痕突变 sacB基因反向筛选标记

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结核分枝杆菌黏附蛋白Rv0394c的结晶及其对分枝杆菌致病性的影响

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黑龙江畜牧兽医 2022年第11期 16-20,25,134页

作者：唐阳阳李华芳邵明珠藏鑫鑫崔子寅陈利苹党光辉刘思国吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队哈尔滨150069

为了研究结核分枝杆菌黏附蛋白Rv0394c的结构、黏附途径及其在分枝杆菌致病过程中的作用,试验通过亲和层析法纯化Rv0394c蛋白,然后使用蛋白结晶筛选试剂盒筛选蛋白质结晶条件,通过亚细胞定位确定Rv0394c蛋白在分枝杆菌中的定位;通过激... 详细信息

为了研究结核分枝杆菌黏附蛋白Rv0394c的结构、黏附途径及其在分枝杆菌致病过程中的作用,试验通过亲和层析法纯化Rv0394c蛋白,然后使用蛋白结晶筛选试剂盒筛选蛋白质结晶条件,通过亚细胞定位确定Rv0394c蛋白在分枝杆菌中的定位;通过激光共聚焦显微镜观察Rv0394c蛋白与A549细胞的黏附情况;随后进行重组耻垢分枝杆菌(Rv0394c_Ms和pMV262_Ms)与A549细胞的黏附和黏附阻断试验并计数肺脏荷菌数;用重组耻垢分枝杆菌(Rv0394c_Ms和pMV262_Ms)滴鼻感染小鼠,在不同感染时间分别摘取肺脏观察病理变化并进行荷菌数计数。结果表明:成功获得Rv0394c蛋白。Rv0394c蛋白浓度为8 mg/mL时,在0.15 mol/L二水氯化钙-0.1 mol/L三水醋酸钠-pH值为4.6-15%异丙醇条件下,Rv0394c蛋白出现单晶生长。Rv0394c蛋白为胞外蛋白且能通过透明质酸(HA)黏附于A549细胞表面;与pMV262_Ms相比,Rv0394c_Ms黏附于A549细胞的数量极显著增加(P<0.01),用Rv0394c蛋白、HA和兔抗Rv0394c多克隆抗体处理的Rv0394c_Ms在A549细胞中的荷菌数极显著高于Rv0394c_Ms在A549细胞中的荷菌数(P<0.01)。在感染小鼠第4,8,14天,Rv0394c_Ms组在肺脏中的荷菌数极显著高于pMV262_Ms组(P<0.01);在第8天,Rv0394c_Ms组荷菌数极显著高于Rv0394c_Ms+HA组(P<0.01)。Rv0394c蛋白能诱导小鼠肺脏的病理损伤。说明黏附蛋白Rv0394c是通过透明质酸黏附于肺脏上皮细胞参与分枝杆菌致病过程的。

关键词：分枝杆菌黏附蛋白 Rv03914c 结晶致病性细胞黏附

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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4切割IKKα抑制β干扰素产生的研究

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 425-428页

作者：李长尧王胜男李江南黄丽翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

IKK复合体由IKKα、IKKβ和IKKγ3个亚基组成。早期研究结果表明催化亚基IKKα在调节β干扰素(IFNβ)产生方面发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染及其非结构蛋白4(NSP4)表达能够显著抑制宿主的天然免疫反应。本研究结果显... 详细信息

IKK复合体由IKKα、IKKβ和IKKγ3个亚基组成。早期研究结果表明催化亚基IKKα在调节β干扰素(IFNβ)产生方面发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染及其非结构蛋白4(NSP4)表达能够显著抑制宿主的天然免疫反应。本研究结果显示PRRSV NSP4可以与IKKα结合,并能够切割IKKα。而且,丝氨酸蛋白酶活性是PRRSV NSP4切割IKKα所必需的,其中NSP4中的3个蛋白酶活性位点(His^(39)、Asp^(64)和Ser^(118))中任何一个发生突变均无法切割IKKα。进一步研究证明,NSP4通过切割IKKα抑制了NF-κB和IFNβ启动子的活性。本研究结果表明,PRRSV NSP4除了通过切割NEMO和MAVS抑制NF-κB和IFNβ启动子活性以外,也可以通过切割IKKα抑制机体NF-κB的激活和IFNβ的表达。这些研究结果为阐明PRRSV逃逸宿主天然免疫提供了一个新的证据,为深入研究PRRSV的致病机理奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP4 IKKα IFNβ NF-κB信号通路

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猪脑心肌炎病毒HB10株cDNA感染性克隆的构建

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中国预防兽医学报 2015年第9期37卷 665-668页

作者：于会彬黄丽张元峰李江南蔡雪辉崔尚金翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株cDNA感染性克隆,本研究利用反向遗传操作技术,采用RT-PCR一次性扩增EMCV-HB10株全长基因组(包括5'和3'UTR)序列,并直接克隆于低拷贝载体pOK12中,构建了EMCV感染性重组质粒pOK12-EMCV-HB10。将... 详细信息

为建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株cDNA感染性克隆,本研究利用反向遗传操作技术,采用RT-PCR一次性扩增EMCV-HB10株全长基因组(包括5'和3'UTR)序列,并直接克隆于低拷贝载体pOK12中,构建了EMCV感染性重组质粒pOK12-EMCV-HB10。将重组质粒体外转录后转染BHK-21细胞进行病毒拯救。结果显示,转染细胞36 h后,出现典型的细胞病变。拯救病毒rEMCV-HB10全基因组经测序鉴定显示,与亲本病毒开放阅读框比较,其仅在1D基因出现两个核苷酸突变:即A37G(R13K)和G187C(M63I),该突变可以作为区别亲本病毒的标志。间接免疫荧光和生长曲线试验结果显示,这两个突变并不影响VP1蛋白的表达及病毒拯救,并且拯救病毒与亲本病毒具有相似的生长特性。本研究构建了感染性EMCV-HB10 cDNA克隆,为深入研究EMCV的致病分子机理提供了有效的反向遗传操作平台。

关键词：猪脑心肌炎病毒 cDNA感染性克隆转录转染病毒拯救

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