检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2013年第3期43卷 256-260页

作者：潘佳亮高利相文华戚亭郭巍东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了建立可特异性地检测血清中非洲马瘟病毒抗体的方法,优化并合成非洲马瘟病毒VP7蛋白基因,将其插入原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,目的蛋白获得了高效表达,且有... 详细信息

为了建立可特异性地检测血清中非洲马瘟病毒抗体的方法,优化并合成非洲马瘟病毒VP7蛋白基因,将其插入原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,目的蛋白获得了高效表达,且有特异的免疫学活性。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建立了检测血清中非洲马瘟病毒抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA的抗原包被量、血清稀释度、封闭液的选择等反应条件进行了优化。所建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的非洲马瘟病毒抗体,具有良好的特异性和灵敏性,与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达100%。表明本研究建立的检测血清中非洲马瘟病毒抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性和灵敏性。

关键词：非洲马瘟病毒 VP7蛋白间接酶联免疫吸附试验

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口蹄疫病毒2C3AB基因的原核表达及ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 543-547页

作者：王幸周国辉刘云于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

口蹄疫病毒(FMDV)的2C蛋白中存在对自然感染和灭活疫苗免疫动物具有鉴别诊断意义的抗原表位。为建立一种敏感的血清学鉴别诊断方法,本研究截取FMDV 2C蛋白的C端B细胞表位较为富集的区域与全长3AB基因组合,经原核表达获得分子量约为44 k... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)的2C蛋白中存在对自然感染和灭活疫苗免疫动物具有鉴别诊断意义的抗原表位。为建立一种敏感的血清学鉴别诊断方法,本研究截取FMDV 2C蛋白的C端B细胞表位较为富集的区域与全长3AB基因组合,经原核表达获得分子量约为44 ku的目的蛋白。Western blot分析表明,表达产物2C3AB与FMDV感染动物的阳性血清呈特异性反应。以纯化的目的蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法,敏感性检测表明该方法比3ABC-ELISA具有更高的敏感性;同时检测猪圆环病毒、猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒标准阳性血清均无交叉反应。批内和批间重复性试验显示,OD450nm值的变异系数小于9%。采用该方法检测不同背景的临床样品,并与3ABC-ELISA及进口试剂盒比较,总符合率分别为98.5%和90%。结果表明,该ELISA检测方法具有更高的敏感性和良好的特异性、重复性。

关键词：口蹄疫病毒 2C3AB基因原核表达间接ELISA

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牛支原体新基因(P18)的克隆表达及活性鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 184-187页

作者：宋志强李媛孙文静刘洋邹晓辉陈维周玉梅辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001

牛支原体(***)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前***粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,***表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多... 详细信息

牛支原体(***)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前***粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,***表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多个***基因,最终获得了一个表达纤溶酶原结合蛋白的新基因,并命名为P18。该基因表达大小约为67ku的重组蛋白。通过western blot鉴定,重组表达的P18蛋白可以被***抗体识别。进一步的试验表明,P18蛋白还具有纤溶酶原结合活性,从而推测该基因表达的蛋白可能是***的一个粘附相关因子。

关键词：牛支原体亚克隆表达粘附相关因子

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SAMHD1蛋白单克隆抗体的制备及SAMHD1在不同细胞中的表达鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 242-244页

作者：戈曼吴星亮尹鑫魏萍王晓钧东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

SAMHD1是最近发现的在人髓系细胞中发挥抗艾滋病毒作用的一种天然蛋白。为制备抗人huSAMHD1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的人huSAMHD1重组蛋白为免疫原,经腹腔免疫4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行... 详细信息

SAMHD1是最近发现的在人髓系细胞中发挥抗艾滋病毒作用的一种天然蛋白。为制备抗人huSAMHD1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的人huSAMHD1重组蛋白为免疫原,经腹腔免疫4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA法筛选和4次有限稀释法克隆纯化,获得了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的MAb与人huSAMHD1的真核表达蛋白呈阳性反应,而与猴、马SAMHD1的真核表达蛋白呈阴性反应,表明其具有很好的特异性,可以用于ELISA、免疫荧光和免疫印迹检测以及对huSAMHD1的进一步研究。

关键词： SAMHD1 单克隆抗体 ELISA 免疫荧光免疫印迹

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牛嵴病毒VP3蛋白的原核表达及初步应用

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中国预防兽医学报 2012年第11期34卷 907-910页

作者：王茜常继涛刘云于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

牛嵴病毒(BKV)是近几年在牛消化道中新发现的病毒,其致病性尚不清楚。我们的相关研究已表明,该病毒在我国的牛群中普遍存在。为重组表达BKV VP3蛋白,本研究采用RT-PCR方法从牛腹泻粪便样品中扩增BKV VP3蛋白的编码基因,将其克隆至pET-28... 详细信息

牛嵴病毒(BKV)是近几年在牛消化道中新发现的病毒,其致病性尚不清楚。我们的相关研究已表明,该病毒在我国的牛群中普遍存在。为重组表达BKV VP3蛋白,本研究采用RT-PCR方法从牛腹泻粪便样品中扩增BKV VP3蛋白的编码基因,将其克隆至pET-28a(+)载体中构建原核重组表达质粒pET-VP3。将pET-VP3转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。经IPTG诱导表达及SDS-PAGE分析表明重组蛋白分子量约为27.8 ku,以包涵体形式存在。采用电洗脱方法纯化该重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备抗BKV VP3的多克隆抗体。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,初步建立了间接ELISA抗体检测方法。小范围调查结果显示,在检测的牛群中BKV感染率较高。

关键词：牛嵴病毒 VP3蛋白抗血清间接ELISA

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抗A型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及抗原捕获ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 146-150页

作者：孙静周国辉王幸李超斯魏萍于力东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立A型口蹄疫病毒(FMDV)病原学诊断方法,本研究应用纯化的A型FMDV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5F7。经IFA特异性鉴定,5F7为一株血清型特异性MAb。亚类为IgG1/κ。间... 详细信息

为建立A型口蹄疫病毒(FMDV)病原学诊断方法,本研究应用纯化的A型FMDV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5F7。经IFA特异性鉴定,5F7为一株血清型特异性MAb。亚类为IgG1/κ。间接ELISA检测杂交瘤细胞上清和腹水抗体效价分别为1∶12 800和1∶105。硫氰酸盐洗脱法测定其相对亲和力常数为1.5 mol/L。应用该A型特异性MAb及实验室已制备的MAb 3D9初步建立了检测A型FMDV的抗原捕获ELISA方法。该方法可以检出2.0 ng纯化FMDV和1.0×104TCID50病毒,与O型、Asia1型FMDV及牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等均无交叉反应,组内及组间重复性试验显示变异系数小于8%。本研究建立的抗原捕获ELISA方法为A型FMDV抗原检测提供了一种实用有效的技术手段。

关键词： A型口蹄疫病毒单克隆抗体抗原捕获ELISA

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O型口蹄疫病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 185-188页

作者：梁特杨德成刘蒙蒙周国辉孙超魏萍于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白的重组杆状病毒,本研究将FMDV O/YS/CHA/05株的P12A和3C基因克隆于pFastBac1载体中,构建重组转移质粒pFast-P12A3C,将其转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆粒rBacmid-P12A3C。将该重组杆粒转染Sf9... 详细信息

为构建表达O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白的重组杆状病毒,本研究将FMDV O/YS/CHA/05株的P12A和3C基因克隆于pFastBac1载体中,构建重组转移质粒pFast-P12A3C,将其转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆粒rBacmid-P12A3C。将该重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,制备重组杆状病毒rBV-P12A3C。间接免疫荧光试验(IFA)检测表明,获得的重组杆状病毒在Sf9细胞中能够表达O型FMDV衣壳蛋白。Western blot分析显示,FMDV的衣壳蛋白和3C蛋白酶均获得表达,并且3C蛋白酶对结构蛋白进行了正确切割。重组蛋白表达的动力学分析显示,表达的FMDV衣壳蛋白具有良好的反应原性,并且在重组杆状病毒感染Sf9细胞后第4 d蛋白表达量达到最大。该重组杆状病毒的构建,为研究FMDV空衣壳的体外组装以及O型FMDV空衣壳疫苗的开发建立了实验基础。

关键词： O型口蹄疫病毒衣壳蛋白杆状病毒表达

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山羊支原体山羊肺炎亚种黏附相关蛋白的特性

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中国兽医科学 2014年第6期44卷 583-588页

作者：白帆李媛吴金迪汪洋刘素丽周玉梅赵权辛九庆吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室东北黑龙江哈尔滨150001 农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为鉴定山羊支原体山羊肺炎亚种的黏附相关蛋白,通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因组编码的假定的膜蛋白基因(0297)进行扩增,并连接到pET-32a(+)载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,大小约为43ku... 详细信息

为鉴定山羊支原体山羊肺炎亚种的黏附相关蛋白,通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因组编码的假定的膜蛋白基因(0297)进行扩增,并连接到pET-32a(+)载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,大小约为43ku,将该重组蛋白命名为P0297。用纯化的P0297免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体。利用激光共聚焦显微镜观察到蓝色的细胞核周围有重组蛋白的绿色荧光存在,其外形与细胞膜的红色荧光基本重合,表明P0297对山羊气管上皮细胞有明显的黏附作用。夹心ELISA结果显示,重组蛋白P0297的黏附作用与蛋白浓度成正比,并且黏附作用可被多克隆抗体阻断,说明该重组蛋白的黏附为特异性黏附。上述结果表明,P0297蛋白是山羊支原体山羊肺炎亚种的一个黏附相关蛋白。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种黏附因子特性

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马传染性贫血病毒弱毒疫苗S2基因在体内变异分析

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 415-418页

作者：王帅王雪峰林跃智姜成刚吕晓玲赵立平周建华曲娟娟东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121的S2基因在马体内的变异规律,本研究选用4匹成年马,其中2匹(#1、#2)接种EIAVDLV121,另外2匹作为对照。免疫后监测马体温、血小板含量以及病毒载量结果显示,免疫马未出现马传染... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121的S2基因在马体内的变异规律,本研究选用4匹成年马,其中2匹(#1、#2)接种EIAVDLV121,另外2匹作为对照。免疫后监测马体温、血小板含量以及病毒载量结果显示,免疫马未出现马传染性贫血体征。通过RT-PCR方法检测病毒S2基因在感染马体内不同时期的基因序列,结果显示,免疫马体内EIAVDLV121 S2蛋白的突变主要发生在氨基酸第17位、22位、39位、41位、51位和55位。另外,#1马免疫后70 d以及#2马免疫后第14 d和第28 d检测疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121亲缘关系较近,而#1马免疫后第42 d、第112 d和第140 d的疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121的致病性亲本强毒株EIAVLN40亲缘关系最近。本研究结果有助于对EIAV及EIAV疫苗株在马体内感染进程的研究。

关键词：马传染性贫血病毒 S2基因变异分析

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牛无浆体病的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2010年第9期 42-44页

作者：倪宏波姜海芳周玉龙辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

牛无浆体病主要是由边缘无浆体经脾传播的专性寄生于红细胞内的血液传染病,给养牛业带来较大的经济损失。文章对该病的病原、流行病学、临床症状、病理变化,病原诊断与检测及疾病防治等方面做了较为详细的介绍,旨在为我国开展该病的研... 详细信息

牛无浆体病主要是由边缘无浆体经脾传播的专性寄生于红细胞内的血液传染病,给养牛业带来较大的经济损失。文章对该病的病原、流行病学、临床症状、病理变化,病原诊断与检测及疾病防治等方面做了较为详细的介绍,旨在为我国开展该病的研究提供理论参考。

关键词：牛边缘无浆体病研究进展

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