检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2007年第6期29卷 448-452页

作者：李万周国辉杨增岐涂亚斌于力西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

用纯化的Asia1型口蹄疫病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)筛选,有限稀释法克隆,获得了2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3H6、5G3,其细胞培养上清效价分别为... 详细信息

用纯化的Asia1型口蹄疫病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)筛选,有限稀释法克隆,获得了2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3H6、5G3,其细胞培养上清效价分别为1:64和1:128,小鼠腹水效价分别为1×10^(-4)和8×10^(-3);ELISA和IFA结果显示,2株单抗仅与Asial型口蹄疫病毒反应,不与O型口蹄疫病毒反应,表明它们均为抗Asial型口蹄疫病毒的型特异性单克隆抗体。westem blot结果显示,2株单克隆抗体均不与全病毒抗原反应,表明它们所针对的抗原表位均为构象表位。相加ELISA试验表明,两株单抗识别不同的抗原表位。经硫氰酸盐洗脱法测定,3H6和5G3的相对亲和力指数分别为1.0 mol/L和1.5 mol/L。这2株单抗的获得为建立口蹄疫病毒检测方法提供了强有力的工具。

关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体

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马流感病毒NP单克隆抗体的制备及特性鉴定

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中国兽医科学 2011年第6期41卷 610-613页

作者：姬媛媛郭巍王征赵立平李红梅相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,经腹腔接种4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经4次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得了3株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11、3E10和4A1,并对它们进行了亚类... 详细信息

利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,经腹腔接种4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经4次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得了3株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11、3E10和4A1,并对它们进行了亚类鉴定、间接ELISA检测和特性鉴定。结果显示,单抗2G11为IgG1亚型,3E10为IgG2a亚型,4A1为IgM亚型,轻链均为κ链。单抗2G11、3E10和4A1的细胞上清液及腹水效价分别为1∶640、1∶640、1∶320和1∶409 600、1∶204 800、0。这3株单抗均能特异性识别EIV NP重组蛋白,并且能够与天然EIV结合;获得的3株单抗与马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、马乙型脑炎病毒均不发生交叉反应。亲和力试验结果显示,单抗2G11和3E10与EIV的亲和力常数分别为4.39×106 M-1和2.20×106 M-1。

关键词：马流感病毒核蛋白单克隆抗体特性鉴定

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2017年我国4个省份屠宰场猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

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中国预防兽医学报 2019年第12期41卷 1210-1214页

作者：王长珍刘文宇祝瑶栾天于淼杨亲刘思国张万江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨市产品质量监督检验院黑龙江哈尔滨150036

为研究我国不同地区屠宰场猪链球菌的流行情况,本研究于2017年分别从河南、黑龙江、广东、宁夏4个地区大型屠宰场采集健康猪肺脏样品578份,进行猪链球菌的分离鉴定、血清型分型;通过微量肉汤稀释法测定分离株的最小抑菌浓度(MIC);PCR方... 详细信息

为研究我国不同地区屠宰场猪链球菌的流行情况,本研究于2017年分别从河南、黑龙江、广东、宁夏4个地区大型屠宰场采集健康猪肺脏样品578份,进行猪链球菌的分离鉴定、血清型分型;通过微量肉汤稀释法测定分离株的最小抑菌浓度(MIC);PCR方法检测分离菌的耐药基因和毒力基因;通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分析不同来源分离株间的亲缘关系。结果显示,从4省市共分离到猪链球菌46株,包括12种血清型和3种荚膜新型血清型,其中猪链球菌血清7型分离率最高,为30.4%,但不同地区血清型交叉密度较低。分离菌株表现出广泛耐药性,其中对红霉素、阿奇霉素、多西环素的耐药率较高,分别为91.30%、86.96%、86.96%,但分离株均对万古霉素敏感。红霉素类耐药基因erm和四环素类耐药基因tet的检出率均较高,其中erm(B)为97.83%,tet(O)为89.13%。PFGE结果显示不同地区分离菌株PFGE谱型差异明显,而同一地区分离菌株PFGE谱型相似或相同,提示同一地区猪链球菌存在克隆传播现象。本研究揭示了我国不同地区猪链球菌流行情况,为猪链球菌病的防控提供参考依据。

关键词：猪链球菌流行病学耐药 PFGE

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14匹马经典MHC-Ⅰ类分子多态性分析

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 852-854页

作者：刘建东孙留克林跃智那雷王雪峰杜承周建华曲娟娟东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室、大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为分析马经典MHC-I类分子的多态性，本研究从马外周血单个核细胞提取总RNA，并采用RT—PCR方法对14匹马经典MHC-I类分子（包括编码肽结合区的大部分区域、α3区、穿膜区以及胞浆区）进行扩增和序列分析。结果显示，14匹实验马各自具有2... 详细信息

为分析马经典MHC-I类分子的多态性，本研究从马外周血单个核细胞提取总RNA，并采用RT—PCR方法对14匹马经典MHC-I类分子（包括编码肽结合区的大部分区域、α3区、穿膜区以及胞浆区）进行扩增和序列分析。结果显示，14匹实验马各自具有2个～4个MHC-I等位基因，其在不同马匹之间的表达呈现明显的差异性，主要分布在2个分支。尽管如此，各马匹间均表达具有1个或1个以上相同或高度同源的对应经典MHC-I类分子的mRNA。该研究结果为正在开展的针对马传染性贫血病毒减毒疫苗核心蛋白（p26）以及其他免疫原的CTL表位的筛选提供基础数据。

关键词：马主要组织相容性复合物多态性 RT-PCR

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猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体结合抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 738-741页

作者：李亮林跃智那雷汤艳东吕晓玲周建华曲娟娟东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定抗猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27单克隆抗体(MAb)p27-A5、p27-C7和p27-D2所识别的抗原表位,本研究通过间接ELISA法相加试验对这3株MAbs结合抗原表位进行初步分析,并利用部分重叠的短肽对MAbs的结合抗原表位进行鉴定。结果表明p2... 详细信息

为鉴定抗猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27单克隆抗体(MAb)p27-A5、p27-C7和p27-D2所识别的抗原表位,本研究通过间接ELISA法相加试验对这3株MAbs结合抗原表位进行初步分析,并利用部分重叠的短肽对MAbs的结合抗原表位进行鉴定。结果表明p27-C7和p27-A5的结合抗原表位位于p27蛋白的aa61～aa76(氨基酸序列为61SEGCTPYDINQMLNCV76);p27-D2的结合抗原表位则位于aa191～aa206(氨基酸序列为191EQTDAAVKNWMTQTLL206)。该结果为进一步深入了解p27的抗原特性和建立该蛋白的检测方法奠定了基础。

关键词：猴免疫缺陷病毒 p27蛋白单克隆抗体表位鉴定

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猪链球菌的分离鉴定及其致病性分子基础研究

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中国预防兽医学报 2018年第2期40卷 96-100页

作者：董志民杨春蕾田向学燕小翠李秀丽张万江刘思国鄢明华天津市畜牧兽医研究所天津西青300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津西青300381 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069

为调查猪源链球菌(***)血清型的流行特点、主要毒力基因的分布及致病力情况,本研究针对来自我国部分地区800份疑似***发病猪的病料样品进行***的分离鉴定、血清型分型、致病力试验及主要毒力基因型检测。研究结果显示,在800份样品中分离... 详细信息

为调查猪源链球菌(***)血清型的流行特点、主要毒力基因的分布及致病力情况,本研究针对来自我国部分地区800份疑似***发病猪的病料样品进行***的分离鉴定、血清型分型、致病力试验及主要毒力基因型检测。研究结果显示,在800份样品中分离到41株***(5.13%);其中,血清型2型或1/2型*** 10株(24.4%),3型6株(14.6%),8型3株(7.3%),9型7株(17.1%),21型1株(2.4%),未定型14株(34.1%);致病力试验结果显示,以1×108 cfu/mL ***菌液接种昆明小鼠,41个分离株中具有致死性的菌株19株,其中6株致死性较强,13株致死性较弱;毒力基因检测结果显示gdh、fbps、orf2、gapdh、sly、ef和mrp基因的检出率分别为100%、82.9%、75.6%、41.5%、39.0%、19.5%和12.2%,以gdh+orf2+fbps+gapdh型(9株)、gdh+orf2+fbps型(8株)和sly+gdh+orf2+fbps+gapdh型(6株)为主要的毒力基因型。本研究结果揭示了我国***各血清型的流行情况,初步探明***致病力的强弱,为深入开展***防控技术研究及其致病机理奠定了基础。

关键词：猪链球菌分离鉴定致病性血清型毒力基因

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马腺苷酸脱氨酶1在马胎儿皮肤细胞中促进马传染性贫血病毒LTR的启动活性

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 11-14页

作者：付丽华汤艳东那雷王雪峰林跃智杜承周建华曲娟娟东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

腺苷酸脱氨酶(ADAR)1可催化双链RNA的腺嘌呤核苷酸(A)脱氨转化为次黄嘌呤核苷酸(I),该基因参与了很多病毒的复制与进化。在前期研究中对马传染性贫血病毒(EIAV)疫苗株基因组在体外培养细胞传代致弱过程中的变异规律进行了分析,表明与致... 详细信息

腺苷酸脱氨酶(ADAR)1可催化双链RNA的腺嘌呤核苷酸(A)脱氨转化为次黄嘌呤核苷酸(I),该基因参与了很多病毒的复制与进化。在前期研究中对马传染性贫血病毒(EIAV)疫苗株基因组在体外培养细胞传代致弱过程中的变异规律进行了分析,表明与致弱前强毒株相比,EIAV弱毒疫苗株基因组出现高频率的A-I超突变,推测主要由腺苷酸脱氨酶1(ADAR1)催化导致,使基因组突变累积后的EIAV体内复制能力降低而弱化。为初步研究ADAR1在EIAV致弱中的作用,本研究应用PCR技术首次克隆了马ADAR1(eADAR1)的cDNA。经确认该重组蛋白在293T细胞中的正确表达后,将表达eADAR1的质粒与EIAV长末端重复区(LTR)控制的报告基因质粒共同转染马胎皮肤(FED)细胞,检测eADAR1对LTR启动活性的影响。实验数据表明,该ADAR1可以在体外培养的EIAV靶细胞中显著促进LTR启动的荧光素酶表达,显示eADAR1可以通过调控LTR促进EIAV的复制。以上结果提示eADAR1可以明显影响EIAV复制,但其机制较复杂,尚待深入研究。

关键词：马腺苷酸脱氨酶1 马传染性贫血病毒长末端重复区

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肠炎沙门菌mreB基因缺失株的构建及其体外生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2019年第4期41卷 356-360页

作者：王曼宇王忠星曹俊许秋刘思国于申业吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069

MreB蛋白广泛存在于原核生物中,主要生物功能是聚合形成类似于肌动蛋白微丝的纤维,参与细胞形状的维持。为研究肠炎沙门菌的mreB基因缺失对环境压力的应激变化,本研究利用Red重组方法构建肠炎沙门菌SM6株的mreB基因缺失株,同时构建其回... 详细信息

MreB蛋白广泛存在于原核生物中,主要生物功能是聚合形成类似于肌动蛋白微丝的纤维,参与细胞形状的维持。为研究肠炎沙门菌的mreB基因缺失对环境压力的应激变化,本研究利用Red重组方法构建肠炎沙门菌SM6株的mreB基因缺失株,同时构建其回补菌株,观察缺失株SM6ΔmreB的形态学变化,分析其对温度缺氧应力、渗透应力以及耐酸性的变化。结果显示,缺失株SM6ΔmreB的菌体变为球状,生长受到抑制;SM6ΔmreB对升温缺氧压力的耐受能力显著低于亲本株和回补株(p<0.05);在渗透压条件为100mmol/L和200mmol/LNaCl时缺失株的生存能力明显弱于亲本株和回补株(p<0.05);缺失株在强酸环境中的生存能力显著低于亲本株和回补株(p<0.05),而对中性和弱酸性环境的适应能力与亲本株相似。本研究为进一步探究MreB蛋白在沙门菌的致病机制以及菌蜕形成过程中的作用奠定了基础。

关键词： MreB蛋白沙门菌生物学特性环境压力

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H3N8亚型马流感病毒间接ELISA抗体检测方法建立及应用

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中国预防兽医学报 2010年第3期32卷 190-193页

作者：郭巍王英原王宇张馨心赵立平王立群相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立马流感血清学ELISA诊断方法,本研究以马流感病毒中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)通过SPF鸡胚培养和增殖,收取含病毒尿囊液经蔗糖密度梯度离心纯化后作为ELISA包被抗原,首次在我国建立了检测H3N8亚型马流感抗体的间接ELISA诊断方法... 详细信息

为建立马流感血清学ELISA诊断方法,本研究以马流感病毒中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)通过SPF鸡胚培养和增殖,收取含病毒尿囊液经蔗糖密度梯度离心纯化后作为ELISA包被抗原,首次在我国建立了检测H3N8亚型马流感抗体的间接ELISA诊断方法。试验的最佳反应条件为:最佳抗原稀释度7μg/mL,封闭液5%脱脂乳,血清稀释度1∶100,二抗稀释度1∶10000,稀释液PBS(pH7.4),血清反应时间1.5h,二抗反应时间1h。通过本方法对555份临床样品进行检测并与血凝抑制(HI)试验检测结果比较,证明本方法特异、敏感,具有良好的稳定性和可重复性,适于马流感的流行病学调查和监测工作。

关键词：马流感间接ELISA 抗体检测

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多重耐药基因cfr在广东地区猪源肠球菌中的流行特点

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 859-862页

作者：牟迪王秀梅初胜波刘琪张万江刘思国东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学吉林长春130118

为调查多重耐药基因cfr在广东地区猪源肠球菌中的流行特点及分离株对临床常用药物的耐药情况,本研究通过对临床分离的8株携带cfr基因的肠球菌进行最小抑菌浓度(MIC)测定,脉冲凝胶电泳(PFGE)分型和southern杂交定位,确定分离株的耐药表型... 详细信息

为调查多重耐药基因cfr在广东地区猪源肠球菌中的流行特点及分离株对临床常用药物的耐药情况,本研究通过对临床分离的8株携带cfr基因的肠球菌进行最小抑菌浓度(MIC)测定,脉冲凝胶电泳(PFGE)分型和southern杂交定位,确定分离株的耐药表型和cfr基因在肠球菌中的传播方式。研究表明,8株菌对氟苯尼考、庆大霉素和红霉素耐药率均为100%;对四环素、环丙沙星和利福平的耐药率高达75.0%以上。PFGE结果显示在同一猪场分离的28株cfr阳性肠球菌共有8种不同的PFGE谱型,表明cfr基因在同一猪场中存在克隆传播的现象。Southern杂交结果显示,cfr基因在6株菌中定位于20 kb^50 kb的质粒。本研究为临床制定合理措施控制cfr快速传播提供实验依据。

关键词： cfr基因脉冲凝胶电泳最小抑菌浓度 Southern杂交肠球菌

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