检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：尹录杜艳芬赫明雷司微刘慧芳王春来彭玮王聃李继昌邵美丽刘思国东北农业大学哈尔滨中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室延边大学东北农业大学

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种人畜共患病原菌,主要能引起人与动物的脑炎、菌血症、流产、无败血症性单核细胞增多症等,尤其是免疫力低下者、婴幼儿、老年人、孕妇等易受感染而发病,是引起食物中毒的重要病... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种人畜共患病原菌,主要能引起人与动物的脑炎、菌血症、流产、无败血症性单核细胞增多症等,尤其是免疫力低下者、婴幼儿、老年人、孕妇等易受感染而发病,是引起食物中毒的重要病原菌。为了解哈尔滨市单核细胞增生性李斯特菌的污染状况及耐药状况,在哈尔滨市市场随机采集158份鲜肉,采用显色培养基分离,API试剂条和PCR鉴定等方法对样品中的单核细胞增生性李斯特菌进行分离鉴定,并通过Kirby-Barer法测定分离菌株对24种抗生素的耐药性。结果从鲜肉中共分离到单核细胞增生性李斯特菌23株,检出率为14.56%,其中鲜猪肉检出率最高,这20.00%(14/70):23株分离菌株中耐药菌株为22株,耐药率高达95.65%.这表明哈尔滨市鲜肉中存在一定程度的单核细胞增生性李斯特菌污染,并且分离菌株存在较严重的耐药现象.应加强控制动物饲料亚治疗抗生素的使用并严格遵守休药期,防止耐药菌株产生进而控制食源性疾病的发生.

关键词：哈尔滨鲜肉单核细胞增生性李斯特菌分离鉴定耐药性

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我国传染性法氏囊病病毒新型变异株分析研究

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中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1164-1169页

作者：范林进王雨龙吴甜甜李凯姜楠高玉龙高立刘长军崔红玉潘青张艳萍刘玉凤孙先本刘俊启王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150069 法国诗华动物保健公司北京100102 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7... 详细信息

近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7个省的32个IBDV代表株的VP2基因高变区进行了遗传演化分析,结果显示,IBDV新型变异株虽然属于变异株分支,但却不同于美国早期变异株,其形成了一个独立的亚群。动物回归试验结果显示,IBDV新型变异株不致死鸡,但造成其中枢免疫器官法氏囊严重萎缩,B淋巴细胞崩解坏死,复制出了非典型IBD的症状。本研究测定了IBDV新型变异株的最低致病剂量,并依据病毒自身特殊性状,首次提出用法氏囊半数萎缩量(BAD50)作为IBDV新型变异株的病毒效价单位。本研究为IBDV新型变异株的流行规律监测和综合防控提供了数据支撑。

关键词：非典型传染性法氏囊病传染性法氏囊病病毒新型变异株法氏囊半数萎缩量

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口蹄疫病毒vp3-间接免疫荧光诊断方法的建立

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黑龙江八一农垦大学学报 2008年第2期20卷 55-58页

作者：王冰周国辉涂亚斌朴范泽于力黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室哈尔滨150001

口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP3为保守区,各血清型间差异不大,因此以其为抗原建立一种快速、有效、操作简便的FMDV自然感染动物与疫苗免疫动物鉴别诊断方法。PCR扩增口蹄疫病毒结构蛋白VP3基因,克隆到杆状病毒表达系统转移载体pFastBacHT-... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP3为保守区,各血清型间差异不大,因此以其为抗原建立一种快速、有效、操作简便的FMDV自然感染动物与疫苗免疫动物鉴别诊断方法。PCR扩增口蹄疫病毒结构蛋白VP3基因,克隆到杆状病毒表达系统转移载体pFastBacHT-A中,转座DH10感受态细胞,获得阳性克隆。提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,获得含口蹄疫病毒结构蛋白基因VP3基因的重组杆状病毒。以被检测血清为一抗,以FITC标记的兔抗牛IGg为二抗,通过反应条件的优化,建立间接免疫荧光检测方法,并检测血清44份,与ELISA方法符合率为90.9%。

关键词：口蹄疫病毒 VP3 鉴别诊断间接免疫荧光

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结核分枝杆菌CsdA的原核表达及免疫性分析

结核分枝杆菌CsdA的原核表达及免疫性分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：王华南亓英芳杜艳芬刘慧芳司微于申业倪洪波王春来刘思国王加明杨盛李素兰冯拥军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室新疆生产建设兵团农十师畜牧兽医站

为表达和纯化结核杆菌(MTB)冷休克蛋白CsdA,本研究根据GenBank登录的CsdA基因序列设计合成一对特异性引物,通过PCR扩增了H37Rv的CsdA基因,并将其克隆至pET-28a载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得大小约为64 ku的重组蛋白。W... 详细信息

为表达和纯化结核杆菌(MTB)冷休克蛋白CsdA,本研究根据GenBank登录的CsdA基因序列设计合成一对特异性引物,通过PCR扩增了H37Rv的CsdA基因,并将其克隆至pET-28a载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得大小约为64 ku的重组蛋白。Western blot分析表明,表达产物能够被鼠抗CsdA血清所识别,具有良好的免疫原性。本研究为进一步研究结核分枝杆菌(MTB)CsdA的结构和功能奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 CsdA 原核表达

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抗猪戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

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动物医学进展 2008年第5期29卷 27-31页

作者：李丹丹张馨心赵立平相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

利用纯化的猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2-M1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,获得了2株稳定分泌抗HEV ORF2-M1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为BC4和2A10。经ELISA测定,2株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1∶1.60×... 详细信息

利用纯化的猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2-M1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,获得了2株稳定分泌抗HEV ORF2-M1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为BC4和2A10。经ELISA测定,2株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1∶1.60×103和1∶0.80×103,接种小鼠的腹水效价分别为1∶2.56×106和1∶1.28×106。2株单抗均能特异性识别重组ORF2-M1蛋白,但它们识别ORF2-M1蛋白的不同表位。间接免疫荧光试验证实,2株单抗具有良好的特异性,均能够识别HEV。

关键词：戊型肝炎病毒 ORF2-M1蛋白单克隆抗体猪

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应用HEV ORF2蛋白McAb间接免疫荧光法检测HEV的研究

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动物医学进展 2008年第7期29卷 24-26页

应用抗猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白单克隆抗体和猪戊型肝炎病毒多克隆抗血清对感染猪戊型肝炎病毒的A549细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究。单克隆抗体(McAb)进行的间接免疫荧光染色后,HEV感染细胞培养物中多数细胞在... 详细信息

应用抗猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白单克隆抗体和猪戊型肝炎病毒多克隆抗血清对感染猪戊型肝炎病毒的A549细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究。单克隆抗体(McAb)进行的间接免疫荧光染色后,HEV感染细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光,未接种病毒的细胞培养物被伊文思蓝染成红色,未见有黄绿色荧光染色的细胞存在;多克隆抗血清对接种病毒的细胞培养物染色后,荧光强度高,呈现亮绿色,但未接种HEV的细胞培养物亦有一定的非特异性荧光反应。结果表明,利用所研制的抗HEVORF2蛋白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异性。

关键词：戊型肝炎病毒单克隆抗体间接免疫荧光试验

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禽分枝杆菌副结核亚种map0862和map2154c基因的串联重组表达及其活性

禽分枝杆菌副结核亚种map0862和map2154c基因的串联重组表达及其...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：迟磊刘思国王春来宫强赵昆刘建东王勇云孟克刘慧芳赵福广中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室吉林农业大学生命科学学院

以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18基因组DNA为模版,PCR扩增出map0862和map2154c两个目的基因,采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得融合基因map0862-2154c,与原核表达载体pET32a(+)构建重组质粒pET0862-2154c,转化到

关键词：禽分枝杆菌副结核 map2154c map0862 重组表达

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肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：吕雪莲周薇刘松艳曹俊张童利王曼宇刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

目的 :沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一,经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此,构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株,并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内... 详细信息

目的 :沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一,经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此,构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株,并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内诱导免疫应答变化是非常重要的。方法 :本实验利用改进的Red同源重组系统成功构建SPI-1、SPI-2、SPI-3三种主要毒力岛的单缺失、双缺失及三缺失菌株。结果 :敲除SPI-1后的单缺失、双缺失和三缺失菌株的侵袭力均下降,而其他缺失菌株和野生菌株相比侵袭能力差别不大;所有缺失株对细胞的粘附力均显著低于野生菌株(P<0.001)。将上述毒力岛缺失株分别接种7日龄SPF鸡,评价缺失株的致病力、定殖能力以及对鸡只的免疫效力。结果表明,毒力岛缺失菌株可以在肝脏、脾脏和盲肠中定殖,但不会引起鸡只发病,且SM6ΔSPI-1-3在脾脏和肝脏中的定殖效率低于SM6,接种第8天即被机体迅速清除;毒力岛缺失菌株产生的抗体均处于较高水平;毒力岛缺失菌株免疫后机体CD4+T和CD8+T亚群的均有明显变化。免疫后检测血清中IL-4和IFN-γ的细胞因子水平也有上升趋势,并且病理学结果表明鸡只无明显的病理改变。结论 :毒力岛缺失菌株中SM6ΔSPI-1-3有较好的免疫效果及保护效率。三种主要毒力岛缺失菌株的成功构建为阐明肠炎沙门氏菌致病机制和研发安全有效的减毒活疫苗载体奠定了良好的基础。

关键词：肠炎沙门氏菌毒力岛免疫效力活疫苗载体

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基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建

基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：田秋丰于申业衣菲吕雪莲倪宏波刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET28a和pUC19载体中,构建pET-p... 详细信息

单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET28a和pUC19载体中,构建pET-prfA-EGFP和pUC-prfA-DsRed重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在37℃条件下培养,利用激光共聚焦显微镜观测细菌中荧光蛋白的表达情况.结果表明,构建的两种重组质粒的荧光蛋白基因于37℃条件下,在受体茵中均获得有效表达,而30℃时则仅有微弱的本底荧光蛋白表达.本研究成功构建了以最适生理温度为单一诱导条件的温控表达的新型表达载体,为蛋白的表达与功能研究提供了新的平台.

关键词：单核细胞增生李斯特茵调控基因温控表达荧光蛋白载体构建

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胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398 bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapa-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。W... 详细信息

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398 bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapa-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。Western blot分析了重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验探讨了2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66Ku,与预计大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。

关键词：胎儿弯杆菌表面蛋白基因SapA 原核表达纯化 ELISA

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