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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：张万江董志民王秋东华欣刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队吉林农业大学动物科学技术学院

【目的】获得携带lsa(E)基因肠球菌新型接合转移质粒pY13的全核酸序列,并分析lsa(E)基因在其他肠球菌中的遗传背景和传播方式。【方法】2013年从猪场分离到7猪lsa(E)阳性肠球菌菌(粪肠球菌n=5,屎肠球菌n=1,鸡肠球菌n=1),通过S1-PFGE、So... 详细信息

【目的】获得携带lsa(E)基因肠球菌新型接合转移质粒pY13的全核酸序列,并分析lsa(E)基因在其他肠球菌中的遗传背景和传播方式。【方法】2013年从猪场分离到7猪lsa(E)阳性肠球菌菌(粪肠球菌n=5,屎肠球菌n=1,鸡肠球菌n=1),通过S1-PFGE、Southem杂交、电击转化和重叠PCR等方法对lsa(E)基因的定位和基因环境进行分析;同时采用454 GS-FLX测序仪对pY13质粒进行序列全测定。【结果】最终获得了一个来自屎肠球菌全长为28489bp的pY13质粒。序列分析显示,pY13质粒携带一个新型的耐药簇,该耐药簇包含lnu(B)、lsa(E)、spw、aadE、aphA3和两个拷贝的erm(B)基因。含有该耐药基因簇的质粒可介导林克酰胺类、大环内酯类、截断侧耳素、链阳菌素、壮观霉素和卡那霉素/新霉素等药物耐药。序列分析结果显示,在耐药基因簇的形成过程中插入元件ISEfa8和IS1256可能发挥了作用。另外,以pY13质粒为模板设计了9对重叠引物,对其他6株lsa(E)基因阳性菌进行PCR扩增,结果证实这6株菌携带的lsa(E)基因均位于pY13类似质粒上。【结论】首次获得了携带lsa(E)的肠球菌质粒pY13,虽然为非接合转移性质粒,但该类型的质粒仍然在多重耐药基因簇的传播中发挥了重要作用。

关键词：耐药基因肠球菌接合转移 lsa

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胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1390bp)和SapA-C(1403bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱

关键词：胎儿弯杆菌免疫原性分析分段表达

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以胎儿弯杆菌重组表面蛋白(SapA)为抗原的间接ELISA方法及初步应用

以胎儿弯杆菌重组表面蛋白(SapA)为抗原的间接ELISA方法及初步应用

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第六届全国免疫学学术大会

作者：赵海玲刘思国杜艳芬刘慧芳王春来王勇司微杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室内蒙古农业大学动物科学与医学学院吉林农业大学广西大学

胎儿弯杆菌对于人和动物是危害较大的病原微生物,开展胎儿弯杆菌研究具有重要的公共卫生学意义。本研究应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),将2个基因片段分别连于表达载体pET3... 详细信息

胎儿弯杆菌对于人和动物是危害较大的病原微生物,开展胎儿弯杆菌研究具有重要的公共卫生学意义。本研究应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),将2个基因片段分别连于表达载体pET32a(+),

关键词：胎儿弯杆菌 ELISA 初步应用

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马流感病毒多重RT-PCR检测方法的建立

马流感病毒多重RT-PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：郭巍戴伶俐李雪峰闫妍王英原周建华相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室/慢病毒及马病课题组

根据马流感病毒的M基因和HA基因的保守序列,设计了两对引物,MF和MR为通用引物,可以检测出H3N8和H7N7亚型EIV,目的片段227bp,HF和HR为H3N8亚型特异性引物,目的片段595bp。利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测... 详细信息

根据马流感病毒的M基因和HA基因的保守序列,设计了两对引物,MF和MR为通用引物,可以检测出H3N8和H7N7亚型EIV,目的片段227bp,HF和HR为H3N8亚型特异性引物,目的片段595bp。利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测鉴别H3N8亚型EIV的多重RT-PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明,该技术可以用于EIV的快速诊断和亚型鉴定。

关键词：马流感病毒 RT-PCR

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结核分枝杆菌Rv1400c多抗制备及反应原性分析

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经济动物学报 2015年第1期19卷 16-19+24页

作者：陶荣珊胡太超李金伟刘思国王全凯吉林农业大学动物科学技术学院北海绿瑞贸易有限责任公司东丰药业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室吉林省中韩动物科学研究院

将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白... 详细信息

将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;Western-blot分析鹿结核阳性血清的反应情况。SDS-PAGE和Western-blot结果显示:Rv1400c以包涵体形式表达,蛋白分子质量为39 ku;目的蛋白免疫新西兰兔后,ELISA检测血清效价达到1∶51 200。纯化的Rv1400c重组抗原蛋白能与鹿的阳性血清发生体外结合反应。

关键词：结核分枝杆菌 Rv1400c 包涵体复性反应原性

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牛支原体的α烯醇化酶的功能研究

牛支原体的α烯醇化酶的功能研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：李媛宋志强刘洋孙文静邹晓辉辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室／国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室，黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨 150000

牛支原体是牛支原体相关疾病的病原。最近的研究表明很多细菌表面存在的可结合纤溶酶原的结构能够加强细菌在宿主体内的侵袭力与传播。烯醇化酶是一种普遍存在与生物体内的糖酵解酶并存在在不同的原核以及真核生物的细胞表面作为一种重... 详细信息

牛支原体是牛支原体相关疾病的病原。最近的研究表明很多细菌表面存在的可结合纤溶酶原的结构能够加强细菌在宿主体内的侵袭力与传播。烯醇化酶是一种普遍存在与生物体内的糖酵解酶并存在在不同的原核以及真核生物的细胞表面作为一种重要的纤溶酶原结合蛋白从而与细菌粘附宿主细胞的能力相关。我们第一次证明了牛支原体细胞表面具有结合纤溶酶原的能力。并且我们在大肠杆菌中以可溶性形式表达出重组的牛支原体烯醇化酶。通过抗牛支原体烯醇化酶抗血清应用western blot与EusA方法牛支原体中烯醇化酶被证明同时存在于细胞的胞浆部分与胞膜部分。同时，牛支原体烯醇化酶被证明是牛支原体膜蛋白组分中的最主要的一种纤溶酶原结合蛋白。所有的实验数据表明与表面相关的牛支原体烯醇化酶能够加强牛支原体粘附宿主细胞的能力。

关键词：牛支原体 α烯醇化酶功能分析细菌粘附宿主细胞

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雪山草鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定

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中国动物检疫 2021年第5期38卷 119-125页

作者：姜楠王雨龙张文英牛鑫鑫刘长军高玉龙高立崔红玉李凯潘青张艳萍刘爱晶王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150069 扬州大学江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进行了基因测序及序列分析。结果显示,引起该鸡群发病的病原是IBDV新型变异株,属于A2dB1基因型;这3个毒株的VP2高变区编码蛋白上含有IBDV变异株的特征性氨基酸,也具有IBDV新型变异株的独特氨基酸。结果提示,我国地方品种鸡群中也有IBDV新型变异株的流行,现有的部分商品化IBDV疫苗已不能有效预防IBDV新型变异株的流行。

关键词：传染性法氏囊病病毒新型变异株 A2dB1基因型雪山草鸡

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新疆地区一株马流感病毒的分离及鉴定

新疆地区一株马流感病毒的分离及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：郭巍闫妍王英原刘霓虹戴伶俐李雪峰赵立平张春生贺磊周建华相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室慢病毒及马病课题组新疆动物卫生监督所

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马... 详细信息

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马流行性感冒病毒北美洲流行株的同源性较高,命名为:A/equine/XinjiangFuyun/3/2007(H3N8)。

关键词：马流行性感冒流感病毒 H3N8

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马流感病毒多重RT-PCR检测方法的建立

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动物医学进展 2008年第11期29卷 28-31页

作者：郭巍戴伶俐李雪峰周建华相文华沈荣显刘娣黑龙江省农业科学院东北林业大学博士后工作站黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室．黑龙江哈尔滨150001

关键词：马流感病毒多重RT—PCR 建立

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猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：华秋东吴志军姜成刚沈楠陈维多相文华周建华东北农业大学哈药集团中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室/慢病毒及马病课题组

利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量... 详细信息

利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果显示,gag基因的p27相应片段为763bp,其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达90%以上。利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株,分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1:12800、1:25600、1:819200、1:51200和1:409600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为λ链。Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性。该研究为进一步开发SIV早期诊断试剂盒奠定了基础。

关键词：猴免疫缺陷病毒 p27蛋白单克隆抗体

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