检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 709-711页

作者：李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛... 详细信息

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛鼻拭子中扩增出目的片段,而且结果与病原分离结果一致。特异性试验结果表明,该方法与其它支原体无交叉反应,是一种特异性强、敏感性高的牛支原体检测方法。

关键词：牛支原体无乳支原体牛传染性胸膜肺炎套式PCR

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牛霉形体PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2009年第5期39卷 416-420页

作者：李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体... 详细信息

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(***)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性。利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法。

关键词：牛霉形体牛传染性胸膜肺炎聚合酶链式反应

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hilA基因两端51bp序列对示踪标记性绿色荧光蛋白在禽肠炎沙门氏菌中倍增表达效率的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 409-413页

作者：王高玲李涛史冰田司微王斌刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 福建农林大学动物科技学院福建福州350000

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插... 详细信息

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插入p MD18-T载体中构建p MD-e GFP原核表达重组质粒,将其转化于***。结果显示e GFP能够在***中持续表达。进一步将*** hil A基因两端的51 bp序列分别添加到p MD-e GFP中e GFP表达盒的两端,构建p MD-He GFP重组质粒。荧光显微镜观察和流式细胞仪分析与p MD-e GFP相比,p MD-He GFP转化***后,其e GFP的荧光强度提高约30倍。通过在无抗生素选择压力下连续传20代次,重组***中e GFP仍然能够稳定表达。本研究结果为进一步研究***在动物体内的分布和定植规律等提供了一种具有荧光示踪标记的目标菌,并为其他细菌的同类研究提供了借鉴。

关键词：肠炎沙门氏菌绿色荧光蛋白荧光标记 hilA基因

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牛结核病DNA疫苗研究现状

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中国人兽共患病学报 2009年第2期25卷 191-193页

作者：宫强刘思国河南科技大学食品与生物工程学院洛阳471003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

牛结核病是一种严重的人畜共患病,其流行严重地影响畜牧业的发展,不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病,造成奶牛产乳率和乳质下降,还严重威胁着人类的健康。据统计,人结核病有10%以上是由牛分枝杆菌引起,因此控制牛结核病具有重大... 详细信息

牛结核病是一种严重的人畜共患病,其流行严重地影响畜牧业的发展,不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病,造成奶牛产乳率和乳质下降,还严重威胁着人类的健康。据统计,人结核病有10%以上是由牛分枝杆菌引起,因此控制牛结核病具有重大的公共卫生学意义。自疫苗问世以来,其在传染病的预防控制中发挥了重要的作用,但迄今还没有一种疫苗可用于牛结核病的预防。[第一段]

关键词： DNA疫苗牛结核病奶牛乳房炎结核性胸膜炎预防控制人畜共患病牛分枝杆菌卫生学意义

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基因免疫制备牛分枝杆菌MPB64抗原单克隆抗体

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中国预防兽医学报 2007年第11期29卷 870-873页

作者：刘建东刘思国王春来宫强王勇迟磊赵昆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家兽医生物技术重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150001

为了建立针对牛分枝杆菌分泌抗原MPB64的检测手段,制备该抗原的单克隆抗体,构建真核表达载体pcDNA-mpb64,以原核表达并纯化的融合蛋白H-MPB64包被ELISA板,建立单克隆抗体检测方法。利用基因免疫方法免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选... 详细信息

为了建立针对牛分枝杆菌分泌抗原MPB64的检测手段,制备该抗原的单克隆抗体,构建真核表达载体pcDNA-mpb64,以原核表达并纯化的融合蛋白H-MPB64包被ELISA板,建立单克隆抗体检测方法。利用基因免疫方法免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选出针对牛分枝杆菌分泌蛋白MPB64的单克隆抗体一株,并制备了腹水,经鉴定腹水效价达到1∶10240,采用硫酸铵沉淀法纯化腹水,纯化抗体效价为1∶8000,为今后研制分枝杆菌鉴定技术奠定基础。

关键词：牛分枝杆菌MPB64蛋白基因免疫单克隆抗体

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牛分枝杆菌三价组合及融合DNA疫苗免疫效果的研究

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畜牧兽医学报 2008年第4期39卷 466-471页

作者：宫强刘思国王春来王勇刘建东刘慧芳施远祥阿曼古丽李发斌孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 新疆动物防疫监督总站乌鲁木齐830063 黑龙江省结核病防治所哈尔滨150500

分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)... 详细信息

分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)DNA疫苗和三价(pcDNA-Ag85B+pcDNA-MPB64+pcDNA-ESAT-6)DNA疫苗,评价各种DNA疫苗诱导的体液免疫、细胞免疫及以BCG攻毒后的免疫保护水平。试验结果表明,多基因融合DNA疫苗免疫后的小鼠血清抗体水平、淋巴细胞增殖(SI值)、gamma interferon(IFN-γ)和interleukin-2(IL-2)水平明显高于其他各组(P<0.05),攻毒保护效果也优于多价DNA疫苗,达到了BCG疫苗的免疫保护水平,表明本研究制备的融合DNA疫苗具有良好的应用前景。

关键词：牛分枝杆菌融合DNA疫苗多价DNA疫苗

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禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素

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中国预防兽医学报 2010年第9期32卷 672-676页

作者：欧阳凤菊李兆利赫明雷刘慧芳司微刘思国王春来倪洪波王宇曲娟娟东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(***)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性... 详细信息

为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(***)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性***其宿主体外BF最适形成条件是培养时间为48h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8h时开始起始粘附、24h形成若干微菌落、36h微菌落粘连、48h形成完整的BF、72h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究表明禽致病性***的形成周期,并为抑制其形成提供了实验依据。

关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜细菌粘附性

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胸膜肺炎放线杆菌血清1型与5型基因组DNA差异基因的筛选与鉴定

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中国预防兽医学报 2010年第10期32卷 757-761页

作者：谢芳韩文瑜杜崇涛周靓杨舒心雷连成吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型间的差异基因,本研究采用代表性差异分析(RDA)方法,筛选APP血清1型CVCC259株和血清5型CVCC263株的差异基因。经BLAST分析和Southern blot验证,分别获得CVCC259株的8个和CVCC263株的12个特异基因... 详细信息

为了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型间的差异基因,本研究采用代表性差异分析(RDA)方法,筛选APP血清1型CVCC259株和血清5型CVCC263株的差异基因。经BLAST分析和Southern blot验证,分别获得CVCC259株的8个和CVCC263株的12个特异基因片段。本实验为APP感染和致病机制的研究奠定基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌代表性差异分析差异基因鉴定

来源：评论

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结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2013年第8期35卷 684-686页

作者：曹俊陈利苹刘银冰鄢秋龙刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

为制备结核分枝杆菌(Mtb)rv3036c基因的多克隆抗体,本研究以Mtb强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3036c基因,克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-rv3036c,并转化大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白... 详细信息

为制备结核分枝杆菌(Mtb)rv3036c基因的多克隆抗体,本研究以Mtb强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3036c基因,克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-rv3036c,并转化大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白Rv3036c,采用Ni-NTA His-Bind Resin纯化目的蛋白,经western blot验证纯化蛋白。将Rv3036c蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。SDS-PAGE和westernblot分析结果表明,Rv3036c以可溶形式表达,蛋白分子量大小为28 ku,并且具有良好的免疫原性。以上结果为进一步研究rv3036c基因在Mtb的致病性作用奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 rv3036c基因原核表达多克隆抗体

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马属动物cyclinT1基因的扩增与真核表达载体的构建

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黑龙江畜牧兽医 2009年第12期 1-3页

作者：史楠赵立平吕晓玲马建周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

在慢病毒复制过程中cyclinT1(CycT1)是重要的辅助因子。为了揭示慢病毒的复制机理,试验使用RT-PCR方法扩增马和驴的cyclinT1基因,并进行克隆和序列分析,然后用DNASTAR(MegAlign)软件将测得的序列和国外发表的马属动物CycT1序列(GenBank... 详细信息

在慢病毒复制过程中cyclinT1(CycT1)是重要的辅助因子。为了揭示慢病毒的复制机理,试验使用RT-PCR方法扩增马和驴的cyclinT1基因,并进行克隆和序列分析,然后用DNASTAR(MegAlign)软件将测得的序列和国外发表的马属动物CycT1序列(GenBank中登录号为AF137509和AF190905)进行同源性比较。结果表明:马属动物CycT1大小为2184bp,编码727个氨基酸;4种CycT1基因氨基酸同源性在98%以上;将扩增出的马CycT1基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切及测序鉴定证实成功构建了pcDNA3.1(+)/eCycT1重组质粒。

关键词： CyclinT1 克隆序列分析真核表达载体

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