检索结果-内蒙古大学图书馆

北京林业大学学报 2006年第S2期28卷 101-104页

作者：张立娜刘培欣曹殿军闫丽辉贾竞波危艳武东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN... 详细信息

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性.试验结果表明,转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异,说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用.

关键词：猪γ干扰素真核表达活性测定

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东北地区野生鸟类J亚群禽白血病分子流行病学调查及部分基因组序列分析

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畜牧兽医学报 2013年第3期44卷 488-494页

作者：李德龙高玉龙曾祥伟杨波刘婉思高奇秦立廷高宏雷王笑梅刘思当山东农业大学动物科技学院泰安271000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨150040

为了解野生鸟类感染禽白血病(AL)的情况,于2010—2011年采集300份野生鸟类样品进行试验。用PCR方法先后检测到7株ALV-J阳性样品。分别扩增了env基因和3′UTR区段,并对其进行了序列测定和比较分析。结果显示,7株ALV-J阳性样品的env基因... 详细信息

为了解野生鸟类感染禽白血病(AL)的情况,于2010—2011年采集300份野生鸟类样品进行试验。用PCR方法先后检测到7株ALV-J阳性样品。分别扩增了env基因和3′UTR区段,并对其进行了序列测定和比较分析。结果显示,7株ALV-J阳性样品的env基因遗传进化与原型毒株HPRS-103和代表株不在同一个分支上,在3′UTR区段没有太大差异,与原型毒株HPRS-103相比,E元件部分位点存在变异。以上结果表明,目前中国野生鸟类已存在禽白血病的感染,虽然检出率较低,但是由于野生鸟类活动范围比较大,给AL的防控增加了难度。通过对J亚群阳性样品进行序列分析和比对,发现env基因和3′UTR区段部分位点发生变异。这些都提醒注意防控白血病在野生鸟类中进一步传播。

关键词：野生鸟类禽白血病流行病学调查序列分析

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SARS-CoV S蛋白抗原表位富集区的表达与初步应用

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中国预防兽医学报 2007年第10期29卷 756-760页

作者：华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

扩增并克隆编码SARS-CoV S蛋白中包含多个抗原表位的第539～630氨基酸残基区域的基因片段。基因片段经酶切处理后插入表达载体pGEX-6p-1的BamHⅠ和XhoⅠ位点之间,构建成融合表达质粒,转化宿主菌BL21经IPTG诱导后融合基因得到了表达,表... 详细信息

扩增并克隆编码SARS-CoV S蛋白中包含多个抗原表位的第539～630氨基酸残基区域的基因片段。基因片段经酶切处理后插入表达载体pGEX-6p-1的BamHⅠ和XhoⅠ位点之间,构建成融合表达质粒,转化宿主菌BL21经IPTG诱导后融合基因得到了表达,表达产物可用谷胱甘肽sepharose 4B RediPack亲和层析柱纯化。用5份SARS患者康复期血清对表达融合蛋白进行ELISA和免疫印迹试验,分析融合蛋白的免疫反应性,结果表明重组融合抗原在ELISA和免疫印迹试验中与5份SARS患者康复期血清均具有良好的免疫反应性。试验结果提示该SARS-CoV S蛋白第539～630氨基酸残基区域可作为SARS的诊断抗原。

关键词： SARS冠状病毒 S蛋白抗原表位表达

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猪鼻支原体抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2014年第11期44卷 1140-1144页

作者：陈冬杰危艳武张志慧黄立平吴洪丽王一平孙建慧刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了检测猪血清中猪鼻支原体(Mhr)的抗体水平,采用脱氧胆酸钠提取Mhr膜蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA,并采用该方法检测了60份SPF阴性猪血清和45份Mhr阳性猪血清样品。结果显示,该方法的特异性为90.5%,敏感性为98.0%。除猪肺炎支原... 详细信息

为了检测猪血清中猪鼻支原体(Mhr)的抗体水平,采用脱氧胆酸钠提取Mhr膜蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA,并采用该方法检测了60份SPF阴性猪血清和45份Mhr阳性猪血清样品。结果显示,该方法的特异性为90.5%,敏感性为98.0%。除猪肺炎支原体(Mhp)外,该方法与几种猪病毒阳性血清及副猪嗜血杆菌Ⅳ型阳性参考血清均无交叉反应。对Mhr DL菌株感染的巴马猪血清抗体的检测结果显示,Mhr感染后第3天血清抗体阳转,第35天抗体水平达到高峰,抗体效价为1∶6 400。用该方法与IDEXX猪肺炎支原体抗体检测试剂盒平行检测138份现地血清样品,Mhr和Mhp的阳性检出率分别为71.0%和44.9%。用该方法对黑龙江、吉林、山东等地临床送检的457份血清的检测结果显示,Mhr阳性率为70.3%,表明我国猪群Mhr感染十分普遍。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA具有良好的特异性和敏感性,为Mhr抗体检测提供了技术手段。

关键词：猪鼻支原体间接ELISA 抗体检测

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猪瘟病毒中和抗体竞争抑制ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2008年第11期38卷 957-961页

作者：梁冰冰孙元彭伍平夏照和仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经筛选确定,CI-ELISA的抗原最佳包被浓... 详细信息

利用杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经筛选确定,CI-ELISA的抗原最佳包被浓度为3μg/mL,酶标竞争抗体的最佳稀释度为1∶4 000,阴性血清临界值为33%,阳性血清临界值为40%。CI-ELISA的检出下限为1∶44(中和抗体效价),与进口阻断ELISA试剂盒的符合率为85.00%,高于间接ELISA与进口阻断ELISA试剂盒的符合率(81.25%),CI-ELISA与其他主要病毒的阳性血清均无交叉反应。对采自我国4个省份的290份现地血清进行CI-ELISA检测,结果273份(94.1%)为CSFV抗体阳性。

关键词：猪瘟病毒竞争抑制ELISA 中和抗体

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PRV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

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中国预防兽医学报 2008年第6期30卷 445-449页

作者：张超范刘长明危艳武田志军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA),用于猪伪狂犬病病毒(PRV)血清抗体检测。通过对IPMA反应条件的优化,组装成PRV-IPMA诊断试剂盒,并对该试剂盒检测的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验。结果表明,IPMA检... 详细信息

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验法(IPMA),用于猪伪狂犬病病毒(PRV)血清抗体检测。通过对IPMA反应条件的优化,组装成PRV-IPMA诊断试剂盒,并对该试剂盒检测的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验。结果表明,IPMA检测相对于SN的敏感性为96.2%,特异性为97.7%,两者的总符合率为96.9%;该试剂盒检测的重复性好,与其它病毒参考血清无交叉反应;试剂盒可在-20℃保存12个月,用该试剂盒检测PRV人工感染猪血清,于感染后2周抗体全部阳转,健康对照组猪血清抗体检测均为阴性结果。对来自黑龙江、吉林、上海、内蒙古、河北等地采集的5个猪场后备母猪150份血清样本进行检测,PRV血清抗体阳性检出率为16.7%～50%。检测结果表明这些猪场后备猪群仍需加强疫苗免疫。该试剂盒的研制为我国PRV流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

关键词：猪伪狂犬痛病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒

来源：评论

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果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株全基因组序列测定与分析

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中国预防兽医学报 2010年第8期32卷 627-631页

作者：邵昱昊韩宗玺李慧昕孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为获得果子狸源呼肠孤病毒(MRV)Masked Palm Civet/China/Liu/2004(MPC/04)株的全基因序列,本研究根据GenBank中登录的哺乳动物MRV基因序列设计了22对引物,运用RT-PCR技术对该毒株的各个基因片段进行了扩增和同源性分析,并绘制系统发育... 详细信息

为获得果子狸源呼肠孤病毒(MRV)Masked Palm Civet/China/Liu/2004(MPC/04)株的全基因序列,本研究根据GenBank中登录的哺乳动物MRV基因序列设计了22对引物,运用RT-PCR技术对该毒株的各个基因片段进行了扩增和同源性分析,并绘制系统发育进化树。结果显示该毒株L1、L2、M1和S3基因核苷酸序列与SARS病人体内分离到的SARS病毒T2/BYD1/human/Song/2006(T2S)株同源性较高,该病毒株L3、M2、M3、S1、S2和S4基因核苷酸序列与病猪体内分离到的MRV株SC-A/pig/Zeng/2006(SC-A)同源性较高,系统发育进化树同样表明各个病毒株的不同基因节段均具有不同的进化过程,推测MRV不同病毒株之间存在重配现象。通过MPC/04株S1基因同源性分析和核苷酸系统发育进化树分析,表明该病毒株S1基因与MRV血清3型的S1基因同源性较高,而与其它血清型的同源性较低,因此初步判断该病毒株血清型为血清3型。

关键词：呼肠孤病毒基因组序列分析

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伪狂犬病病毒BarthaK61株Us区缺失片段的鉴定

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中国兽医科学 2008年第8期38卷 646-649页

作者：彭金美陈瑾田志军王瑜周艳君安同庆童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为利用PCR技术对伪狂犬病病毒（PRV）BarthaK61株us区的具体缺失情况进行分析，根据已发表的PRV全基因组序列设计了4对引物，以PRV双城株基因组作为对照，对us区进行扩增。对扩增片段的序列分析表明，BarthaK61株基因组的Us区缺失了348... 详细信息

为利用PCR技术对伪狂犬病病毒（PRV）BarthaK61株us区的具体缺失情况进行分析，根据已发表的PRV全基因组序列设计了4对引物，以PRV双城株基因组作为对照，对us区进行扩增。对扩增片段的序列分析表明，BarthaK61株基因组的Us区缺失了3489bp，为第122560～126049位核苷酸，其间包括部分gI基因、全部的gE和Us9基因以及部分Us2基因。

关键词：伪狂犬病病毒 Bartha K61株缺失

来源：评论

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猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白全长的原核表达及其反应原性分析

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中国兽医科学 2011年第1期41卷 31-35页

作者：张志榜陈建飞时洪艳陈小金冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)CH/S株M蛋白的基因组序列,设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出M基因,将其克隆至原核表达载体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M,经测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3),并进行了IPTG诱导表达。结果显示,重组菌... 详细信息

根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)CH/S株M蛋白的基因组序列,设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出M基因,将其克隆至原核表达载体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M,经测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3),并进行了IPTG诱导表达。结果显示,重组菌pMXB-M表达的融合蛋白MBP-M-CBD(rM)的分子质量约为95ku,在IPTG浓度为0.8mmol/L、诱导时间为6h时,重组菌的表达效果最好,重组蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。Western-blot结果显示,rM能与兔抗PEDV多克隆抗血清及PEDV M蛋白单克隆抗体发生特异的免疫印迹反应,表明原核表达的rM蛋白具有良好的反应原性,这为进一步开展PEDV M蛋白的研究奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 M蛋白原核表达免疫印迹

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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白与BCCIP蛋白相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 341-345页

作者：尹曼曼郭东伟刘琴芳张枫张利杰李江南翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白在病毒粒子组装和释放过程中发挥重要的作用。为筛选N蛋白与宿主细胞相互作用的蛋白,本研究分离健康猪肺泡巨噬细胞(PAM),构建了PAM的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交方法筛选其中与PRRSV N蛋... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白在病毒粒子组装和释放过程中发挥重要的作用。为筛选N蛋白与宿主细胞相互作用的蛋白,本研究分离健康猪肺泡巨噬细胞(PAM),构建了PAM的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交方法筛选其中与PRRSV N蛋白相互作用的蛋白,结果获得3个阳性克隆。经测序并利用Blast方法比对GenBank数据库,筛选得到克隆插入的cDNA均与BCCIP(BRCA2 and CDKN1A interactingprotein)基因的1 bp～396 bp核酸序列一致。经酵母回返验证试验、GST-pulldown和免疫共沉淀试验验证了N蛋白与BCCIP之间的特异性相互作用,共定位试验显示N蛋白与BCCIP共定位于细胞核和细胞浆中。本研究鉴定了新的与PRRSV N蛋白相互作用的宿主蛋白BCCIP,BCCIP是否通过与N蛋白的相互作用参与PRRSV复制还有待深入研究。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 BCCIP 相互作用

来源：评论

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