检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2019年第5期52卷 930-938页

作者：贾云慧许程志隋金钰吴运谱许榜丰陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

【目的】表达欧亚类禽型(eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白,并对其免疫原性进行测定。【方法】利用RT-PCR技术扩增病毒A/swine/Zhejiang/245/2013(H1N1)(ZJ245)的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),将其转染293T细胞,采用间接免疫荧光(IFA)检测和Western blot检测HA蛋白在体外的表达;将重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)经肌肉注射途径、以100μg/只剂量免疫16只6周龄BALB/c小鼠(I组和II组),间隔3周后进行加强免疫(二免);同等数量的小鼠以相同方式注射100μL无菌PBS作为非免疫对照组(III组和IV组)。首免和二免每周采血,分别采用血凝抑制(HI)试验和病毒中和(VN)试验两种方法测定不同类型的血清抗体效价;二免2周后,其中两组小鼠(I组和III组)用50μL(106.0EID50)的ZJ245病毒经滴鼻感染途径进行攻毒,另外两组(II组和IV组)用A/swine/Heilongjiang/44/2009(H1N1)(HLJ44)病毒进行攻毒。攻毒后14 d内每天观察小鼠的临床症状、统计发病与死亡情况,且每天称量小鼠体重,在体重下降比率超过25%时判定为小鼠死亡。攻毒后第3天,每组随机剖杀3只小鼠,分别采集脑、鼻甲、肺、脾和肾等脏器,匀浆处理后通过接种10日龄的非免疫鸡胚测定脏器的病毒含量。通过小鼠体重变化以及脏器滴定的病毒含量评估重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫保护效果。【结果】经酶切鉴定和测序验证表明ZJ245的HA基因的已正确克隆至真核表达质粒p CAGGS中获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),经体外转染293T细胞后,IFA和Western blot证实了病毒的HA蛋白能够正确表达,并具有良好的生物学活性;小鼠的免疫与攻毒试验结果表明,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)首免后一周可检测到针对同源病毒ZJ245的低水平HI和VN抗体,加强免疫后抗体水平明显升高,HI抗体达到76.88、VN抗体达到152.5;同时针对异源病毒HLJ44也产生了较低水平的HI和VN抗体。106.0 EID50的同源病毒ZJ245攻毒时,与非免疫组小鼠相对比,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫完全阻止了因病毒攻击而导致的小鼠体重下降以及肺脏和鼻甲内病毒的复制;106.0 EID50的异源病毒HLJ44攻毒时,相比非免疫组小鼠,质粒免疫组小鼠体重的下降比率、以及肺脏和鼻甲内的病毒滴度均显著降低(P<0.0001、P <0.001、P <0.05)。【结论】重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)能够有效表达病毒HA蛋白,免疫后可使小鼠获得完全抵抗ZJ245感染及部分抵御HLJ44感染的免疫保护力,表明重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)具有良好的免疫原性。

关键词：欧亚类禽型H1N1猪流感病毒 HA蛋白重组质粒免疫原性 DNA疫苗

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人工感染禽腺病毒血清4型对鹅天然免疫反应的影响

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中国兽医科学 2020年第2期50卷 222-232页

作者：李雪峰姜磊孙金艳李慧昕马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院畜牧研究所黑龙江哈尔滨150086

将50只30日龄的健康鹅随机分为攻毒组、观察组和对照组,观察并采集样品,检测抗体水平、病毒血症、病毒载量,应用real-time PCR(RT-PCR)方法检测肝、心脏组织中β-防御素(Av BDs)、Toll样受体(TLRs)、细胞因子(cytokines)等基因表达量。... 详细信息

将50只30日龄的健康鹅随机分为攻毒组、观察组和对照组,观察并采集样品,检测抗体水平、病毒血症、病毒载量,应用real-time PCR(RT-PCR)方法检测肝、心脏组织中β-防御素(Av BDs)、Toll样受体(TLRs)、细胞因子(cytokines)等基因表达量。初探人工感染鸡源禽腺病毒血清4型(FAdV-4)对鹅的致病性及机体对该病毒形成的天然免疫反应机制。结果显示,感染该FAdV-4毒株后,鹅均没有明显病症和死亡发生。宿主产生特异性抗体,并且肝、心脏组织出现病理学变化,宿主排毒率和病毒载量呈上升趋势。感染早期(36 h和72 h),Av BD1、2、5、9、16,TLR2、3、7、15,IL-1β、2、6、8、18以及髓样分化因子(My D88)在肝中的基因表达量显著上调(P<0.05)或有上调趋势。证实,鸡源FAdV-4对鹅的致病性较弱,可能与实验动物品种、日龄差异或感染途径等条件有关。宿主可通过TLRs-My D88途径引起机体产生大量的免疫因子,参与机体抗病毒免疫反应。本试验结果为深入研究FAdV-4与宿主早期天然免疫间的相互作用提供了新的参考。

关键词：禽腺病毒血清4型禽β-防御素 Toll样受体细胞因子天然免疫反应

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小反刍兽疫病毒芯片式数字PCR检测方法的建立及应用

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中国动物检疫 2021年第12期38卷 91-98页

作者：杨鸣发马云云于志亚刘家森康洪涛姜骞曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/自然疫源性人畜共患病团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)检测方法,建立了一种芯片式数字PCR(cdPCR)检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 b... 详细信息

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)检测方法,建立了一种芯片式数字PCR(cdPCR)检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 bp片段,构建pMD^(TM)18-N标准质粒并优化反应条件,建立了PPRV N基因cdPCR检测方法,并与实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果显示:当质粒标准品浓度在1.22×(10^(5)~10^(2))copies/μL范围时,cdPCR检测方法比普通RT-PCR灵敏度高1000倍,且稳定性好,特异性强;当标准品浓度在1.22×(10^(5)~10^(-3))copies/μL范围时,cdPCR与RT-qPCR相比具有相同的特异性,但灵敏性比RT-qPCR高100倍;与RT-qPCR测定结果(13.29±6.74)copies/μL相比,cdPCR的最低检测限更低,约为(0.44±0.14)copies/μL;cdPCR对47份临床样本的PPRV核酸阳性检出率(25.5%)高于RT-qPCR(17.0%)。结果表明,建立的cdPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为预防PPR早期流行提供了一种快速有效的诊断和定量检测方法。

关键词：小反刍兽疫病毒(PPRV) 芯片式数字PCR(cdPCR) 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)

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三株美洲驼源狂犬病病毒N基因遗传进化分析

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野生动物学报 2021年第1期42卷 120-123页

作者：王金玲郑秉武曹霞杨龙峰葛金英卢爱桃内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010010 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010010 呼和浩特市园林管理局动物园管理处呼和浩特010050 北京市延庆区动物疫病预防控制中心北京102100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 内蒙古自治区综合疾病预防控制中心呼和浩特010031

为阐明2015年在内蒙古呼和浩特地区3株美洲驼源狂犬病病毒(RABV)流行株的遗传进化情况,经基因扩增和测序获得3株美洲驼源RABV N基因序列,并进行遗传进化分析。结果显示3株RABV之间N基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为100%,且都与201... 详细信息

为阐明2015年在内蒙古呼和浩特地区3株美洲驼源狂犬病病毒(RABV)流行株的遗传进化情况,经基因扩增和测序获得3株美洲驼源RABV N基因序列,并进行遗传进化分析。结果显示3株RABV之间N基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为100%,且都与2011年呼和浩特奶牛源和犬源毒株、2013年内蒙古牛源毒株、2007年湖北犬源毒株、2016和2018年北京犬源毒株、2006年天津犬源毒株和2009年福建犬源毒株的亲缘性最高,同源率为100%。这些毒株位于同一个遗传进化群内,均属于CTN-1(Asian谱系)。研究结果说明3株美洲驼源RABV的N基因与参考的内蒙古、湖北、北京、福建和天津毒株起源于共同的祖先。

关键词：美洲驼狂犬病病毒 N基因遗传进化

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雪山草鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定

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中国动物检疫 2021年第5期38卷 119-125页

作者：姜楠王雨龙张文英牛鑫鑫刘长军高玉龙高立崔红玉李凯潘青张艳萍刘爱晶王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150069 扬州大学江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进行了基因测序及序列分析。结果显示,引起该鸡群发病的病原是IBDV新型变异株,属于A2dB1基因型;这3个毒株的VP2高变区编码蛋白上含有IBDV变异株的特征性氨基酸,也具有IBDV新型变异株的独特氨基酸。结果提示,我国地方品种鸡群中也有IBDV新型变异株的流行,现有的部分商品化IBDV疫苗已不能有效预防IBDV新型变异株的流行。

关键词：传染性法氏囊病病毒新型变异株 A2dB1基因型雪山草鸡

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基于ASFV转录报告系统的高通量筛选将臭椿酮鉴定为一种广谱抗病毒化合物

基于ASFV转录报告系统的高通量筛选将臭椿酮鉴定为一种广谱抗病毒...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：张宇航张振江张帆张继文焦俊侯敏钱年超赵东明郑晓峰谭旭湖南农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室清华大学医学院传染病研究中心清华大学药学院北京市结构生物学高精尖创新中心清华大学-北京大学生命科学联合中心合肥综合性国家科学中心大健康研究院

非洲猪瘟(ASF)是一种急性、高度传染性和致命的猪病毒性疾病,正在严重危害全球养猪业。但是,目前为止没有可用于ASF防控的权威疫苗和抗病毒药物。非洲猪瘟病毒(ASFV)是ASF的病原体,在ASFV蛋白中,p72是病毒体中最丰富的成分,不仅占病毒...

非洲猪瘟(ASF)是一种急性、高度传染性和致命的猪病毒性疾病,正在严重危害全球养猪业。但是,目前为止没有可用于ASF防控的权威疫苗和抗病毒药物。非洲猪瘟病毒(ASFV)是ASF的病原体,在ASFV蛋白中,p72是病毒体中最丰富的成分,不仅占病毒颗粒总质量的32%,还是病毒组装过程中的关键衣壳蛋白,因此是抗ASFV药物设计的潜在靶标。本研究中,我们构建了一个由p72启动子驱动的荧光素酶报告系统(p72-Fluc),该系统由共转染的ASFV RNA聚合酶复合物驱动转录。使用该系统,我们筛选了3000多种化合物并获得了三种有效的抗ASFV化合物。我们进一步评估了三种化合物抗ASFV的效果,并证明在三个候选物中,臭椿酮(AIL)在纳摩尔浓度下能有效抑制p72-Fluc系统的荧光强度和ASFV的复制(IC50=15 nmol/L)。此外,采用中国流行毒株ASFV-HLJ-2018毒株进一步评估AIL对野生毒株ASFV的抗病毒作用,血细胞吸附试验和蛋白质印迹试验结果表明,AIL可以剂量依赖性方式有效抑制该野生型ASFV毒株的复制。据报道,AIL会抑制HSP90与其辅助伴侣蛋白p23之间的相互作用,并导致HSP90的客户蛋白错误折叠或降解。我们在体外实验中,通过过表达和敲低HSP90的辅助伴侣蛋白p23,发现过表达p23能显著上调p72-Fluc系统的荧光强度和ASFV的感染比例,而敲低p23会下调p72-Fluc系统的荧光强度和ASFV的复制,表明AIL的抗病毒作用与其抑制HSP90-p23辅助伴侣蛋白有关,p23促进ASFV的复制并缓解AIL的抑制作用。近百种病毒蛋白已被报道为HSP90伴侣循环的客户蛋白,由于p23既是HSP90伴侣循环的重要元件也是AIL的靶标,我们推测AIL有可能成为一种广谱抗病毒药物,并评估了其对寨卡病毒(Zika)和乙型肝炎病毒(HBV)的抗病毒能力。结果表明,AIL对寨卡病毒和乙型肝炎病毒具有显著的抗病毒活性,进一步证明AIL是一种潜在的广谱抗病毒剂。据我们所知,这是第一份关于AIL广谱抗病毒作用的报告。未来的研究可能探索AIL作为抗病毒药物的精确分子机制和临床效果。

关键词：

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表达山羊SLAM受体的重组腺病毒的构建及在增强PPRV感染羊源原代细胞中的应用

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中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1207-1213页

作者：陈合凤张帅王喜军王金良温志远葛金英陈伟业步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

由于目前用于小反刍兽疫病毒(PPRV)相关研究的羊源细胞均为原代细胞,其对PPRV的敏感性较差,而信号淋巴细胞激活分子(SLAM)作为PPRV的重要受体可以促进病毒的感染与复制。因此,为构建表达山羊SLAM(gSLAM)的重组腺病毒,为羊源原代细胞提供... 详细信息

由于目前用于小反刍兽疫病毒(PPRV)相关研究的羊源细胞均为原代细胞,其对PPRV的敏感性较差,而信号淋巴细胞激活分子(SLAM)作为PPRV的重要受体可以促进病毒的感染与复制。因此,为构建表达山羊SLAM(gSLAM)的重组腺病毒,为羊源原代细胞提供SLAM受体,本研究将gSLAM基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,转化至含有5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞中,获得重组腺病毒载体pAd-gSLAM,转染293A细胞,经PCR鉴定表明获得了重组腺病毒rAd-gSLAM。以MOI 3 rAd-gSLAM感染Vero细胞后,采用western blot检测SLAM的表达。结果显示,rAd-gSLAM能够感染Vero细胞并表达SLAM蛋白。将PPRV疫苗株rPPRV/GFP和中国流行株PPRV/CN/HLJ/13分别以MOI 0.1感染rAd-gSLAM预先感染后的Vero(Vero/rAd-gSLAM)细胞,24 h经荧光显微镜观察,并采用荧光定量PCR检测两株病毒在感染后不同时间点的拷贝数,绘制病毒的生长曲线。荧光显微镜观察可见,rPPRV/GFP感染的Vero/rAd-gSLAM细胞出现较大量绿色荧光且形成明显的细胞融合;PPRV/CN/HLJ/13感染的Vero/rAd-gSLAM细胞形成明显的细胞融合且出现红色荧光。病毒的生长曲线结果显示,rPPRV/GFP在Vero/rAdgSLAM细胞中的拷贝数与其在Vero和Vero/Ad对照细胞中的拷贝数在感染后各时间点差异却均不显著;PPRV/CN/HLJ/13的拷贝数在感染Vero/rAd-gSLAM细胞后24 h即达到峰值,且其在感染该细胞后72 h的拷贝数约为其感染Vero及Vero/Ad细胞在该时间点的48倍。将rAd-gSLAM(MOI 3)感染原代羊源睾丸(LT)细胞后,再以MOI 0.1分别感染rPPRV/GFP和PPRV/CN/HLJ/13,72 h后经荧光显微镜观察可见,前者感染的LT细胞出现绿色荧光,且有明显的细胞融合;后者感染的LT细胞出现明显的细胞融合和CPE。上述结果表明,本研究构建了表达gSLAM的重组腺病毒rAd-gSLAM,其感染Vero细胞系和原代LT细胞后均能够表达gSLAM,增强了PPRV对Vero细胞系和原代LT细胞的感染与复制。本研究为PPRV在羊源细胞中的生长、复制研究提供了重要的工具,同时为其感染与免疫机制的研究奠定了基础。

关键词：小反刍兽疫 SLAM 重组腺病毒 Vero 羊源细胞

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抗菌肽Sublancin对蛋鸡免疫功能的影响研究

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中国预防兽医学报 2020年第3期42卷 268-273页

作者：田丽娜王秀荣李广兴东北农业大学动物医学学院/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为研究抗菌肽Sublancin对蛋鸡免疫功能的调节作用,本研究将216只海兰褐壳蛋鸡随机分为对照组(饲喂基础饲粮,C组)、低剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+100 mg/kg Sublancin,L组)、中剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+200 mg/kg Sublancin,M组)和高... 详细信息

为研究抗菌肽Sublancin对蛋鸡免疫功能的调节作用,本研究将216只海兰褐壳蛋鸡随机分为对照组(饲喂基础饲粮,C组)、低剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+100 mg/kg Sublancin,L组)、中剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+200 mg/kg Sublancin,M组)和高剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+300 mg/kg Sublancin,H组)进行抗菌肽调控蛋鸡免疫的实验。实验持续30 d,分别在饲喂Sublancin后第1 d、15 d和30 d用ELISA试剂盒检测每组鸡血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量;检测肝脏和脾脏指数;利用免疫印迹法检测每组鸡脾脏中干扰素γ(IFN-γ)表达;利用ELISA试剂盒检测每组鸡血清中IL-2、IL-4和IL-6含量。结果显示:与C组比较,L组、M组和H组鸡血清中IgA、IgG和IgM含量、肝脏和脾脏指数、脾脏中IFN-γ的表达、血清中IL-2、IL-4和IL-6的含量在饲喂Sublancin后第1 d均无显著变化(p>0.05),在饲喂Sublancin后第15 d和第30 d均显著升高(p<0.05);与L组比较,M组和H组中上述检测指标在饲喂Sublancin后第15 d和第30 d均显著升高(p<0.05);与M组比较,H组中上述检测指标在饲喂Sublancin后第15 d和第30 d均无显著变化(p>0.05)。实验表明饲粮中添加抗菌肽Sublancin可以显著增强蛋鸡免疫力,其添加浓度在100 mg/kg^200 mg/kg时,作用效果有剂量依赖性;但添加浓度在200 mg/kg^300 mg/kg时,作用效果与浓度无关。本研究为家禽养殖业中功能性饲料添加剂的开发及抗菌肽Sublancin在养殖业中的应用提供了新的参考依据。

关键词：抗菌肽 Sublancin 蛋鸡免疫功能

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犬瘟热病毒N和H蛋白拮抗IFN-β信号通路的研究

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特产研究 2021年第2期43卷 1-7页

作者：龚成燕李连峰陈杰胡博赵建军中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 西北农林科技大学陕西杨凌712100 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 ... 详细信息

为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 h、12 h和24 h后通过双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定IFN-β启动子的活性。将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3 N和H基因克隆到pCI真核表达载体。重组表达质粒分别转染HEK293T细胞,应用Western blot检测蛋白能否正确表达。将N和H蛋白重组表达质粒连同pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒共转染至HEK293T细胞后,经Poly(I:C)刺激细胞,利用双荧光素酶报告系统检测系统测定IFN-β启动子活性。结果显示3种不同毒力的CDV在感染MDCK细胞后,只有CDV 3疫苗株感染后能观察到IFN-β启动子短暂激活。Western blot实验证实,3种毒株N和H蛋白在HEK293T细胞中均能正确表达。双荧光素酶报告系统对IFN-β启动子检测活性结果显示,Poly(I:C)成功激活了IFN-β信号通路,而这种激活作用在表达CDV不同毒株的N或H蛋白时均受到显著抑制(P <0.01),但不同毒株N或H蛋白对IFN-β信号通路的调控与CDV毒力无关。本研究证实了CDV野毒株和疫苗株N、H蛋白可抑制宿主IFN-β信号通路,为进一步研究CDV与宿主分子互作奠定基础。

关键词：犬瘟热病毒 N蛋白 H蛋白 IFN-β 双荧光素酶报告系统

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中国预防兽医学报 2020年第5期42卷 500-505页

作者：赵雅芝潘巧王显兵郝文君刘桐王秀梅辛九庆吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为探究宿主TRIM9基因通过调控牛支原体(Mycoplasma bovis,***)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞释放致炎细胞因子IL-1β的相关机制,本研究通过*** LAMPs刺激EBL细胞后,利用荧光定量PCR(qPCR)方法检测细胞中TRIM9和IL-1β基因... 详细信息

为探究宿主TRIM9基因通过调控牛支原体(Mycoplasma bovis,***)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞释放致炎细胞因子IL-1β的相关机制,本研究通过*** LAMPs刺激EBL细胞后,利用荧光定量PCR(qPCR)方法检测细胞中TRIM9和IL-1β基因的转录水平,结果显示TRIM9基因转录水平上调2.9倍,IL-1β基因转录水平上调2.5倍。构建pEGFP-C1-TRIM9荧光报告质粒并转染EBL细胞,利用共聚焦显微镜观察TRIM9在EBL细胞中的定位,结果显示TRIM9蛋白能够瞬时表达于EBL细胞浆。通过将构建的pCMV-C-HA-TRIM9重组质粒和si-TRIM9干扰质粒共转染EBL细胞,经2μg/mL *** LAMPs刺激12 h后,采用qPCR和ELISA检测IL-1β的转录水平和表达情况,结果显示,与*** LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,过表达TRIM9组中IL-1β在转录水平和蛋白表达水平均无明显变化,而敲低TRIM9组中IL-1β转录水平和蛋白表达水平均显著上调(分别上调33倍和30倍)。同时利用western blot检测p65蛋白磷酸化水平,分析NF-κB信号通路激活情况,结果显示,与*** LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,TRIM9蛋白过表达组NF-κB信号通路激活水平无明显变化,而敲低TRIM9组p65磷酸化水平提高,促进NF-κB信号通路激活。综上结果表明敲低TRIM9基因能够促进*** LAMPs通过NF-κB信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β。本研究为进一步明确宿主蛋白参与抗牛支原体天然免疫应答的机制奠定基础。

关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白 TRIM9 NF-κB信号通路 IL-1β

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