检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒学 2006年第6期21卷 581-584页

作者：卲昱昊王静王懂帅韩宗玺刘胜旺冉多良孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 甘肃省商业科技研究院甘肃兰州730020 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

以鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3’端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-... 详细信息

以鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3’端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-30a,阳性重组质粒经确证性序列测定,证明外源片断插入到pET-30a的预期位置。将其转入大肠杆菌BL21,经终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE表明外源基因获得表达,融合蛋白分子量约为34kDa。将诱导后的工程菌用6mol/L盐酸胍裂解,经超声处理后离心,利用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。用纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗该融合蛋白的抗血清。Westernblotting结果表明制备的兔抗血清与该融合蛋白及亲本病毒的结构蛋白都具有反应性。结合前期工作进展对GPVVP蛋白的B细胞线性抗原表位进行定位。

关键词：鹅细小病毒 vp基因片断原核表达抗血清

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不同亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的生长特性

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中国兽医杂志 2006年第10期42卷 18-20页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰田国彬孙凯魏萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

禽流感(avian influenza,AI)是由正粘病毒科A型流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的禽类传染病。高致病力禽流感(HPAI)可引起禽类100%死亡,在世界范围内多次暴发,2004年年初HPAI再次在包括我国在内的一些亚洲国家暴发流行,但得... 详细信息

禽流感(avian influenza,AI)是由正粘病毒科A型流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的禽类传染病。高致病力禽流感(HPAI)可引起禽类100%死亡,在世界范围内多次暴发,2004年年初HPAI再次在包括我国在内的一些亚洲国家暴发流行,但得到了很好的控制,7月份在泰国和我国的安徽省HPAI又有发生;低致病力禽流感(LPAI)一般不致鸡只死亡,但可以导致鸡产蛋量下降,同样制约着养禽业的发展,所以研究快速有效的诊断方法已刻不容缓。而且许多学者对MDCK细胞用于制作人流感疫苗作了大量研究。[第一段]

关键词： MDCK细胞禽流感病毒生长特性高致病力禽流感亚型 A型流感病毒暴发流行 HPAI

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SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法检测H5亚型禽流感病毒

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黑龙江畜牧兽医 2006年第11期 13-15页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰孙凯魏萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

用2株不同致病力的H5亚型禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6,12,24,48,72 h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene RG3 000实时定量PCR仪对H5亚型AIV的HA基因进行检测,试图建立快速检测H5亚型AIV的real-time RT-PCR方法,并用所建立的方法对来自全国各地的疑似H5亚型AIV的病料和咽喉拭子、泄殖腔拭子346份进行检测。结果表明：农业部动物流感重点开放实验室建立的HA基因的teal-time RT-PCR方法可以检测到细胞培养物中和临床样品中是否含有H5亚型AIV,与常规RT-PCR比较,该方法更加特异、准确、快速。

关键词： real—time RT—PCR H5亚型禽流感病毒 HA基因

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鹅细小病毒vp1基因片段的原核表达及抗血清的制备

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农业生物技术学报 2006年第5期14卷 788-792页

作者：王静王懂帅韩宗玺卲昱昊冉多良刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室新疆农业大学动物医学学院甘肃省商业科技研究院

利用PCR技术扩增了鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株vp1基因5’端长662bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple载体后,转化入大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α细胞。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核... 详细信息

利用PCR技术扩增了鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株vp1基因5’端长662bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple载体后,转化入大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α细胞。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pPROEXTMHTb,所得的阳性重组质粒经序列测定,证明外源片段正确插入到pPROEXTMHTb的预期位置。将转入外源基因的工程菌经0.6mmol/LIPTG诱导,SDS-PAGE电泳表明,外源基因表达,融合蛋白分子量约为32kD。通过薄层扫描分析显示,融合蛋白表达量占工程菌菌体总蛋白的22.8%。经诱导后的工程菌用6mol/L盐酸胍裂解,再经超声处理后离心,用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。纯化所得的融合蛋白免疫白兔,制备了兔抗鹅细小病毒结构蛋白的抗血清。Westernblot结果表明,抗血清与表达的融合蛋白及亲本病毒的VP1和VP2都具有反应性。

关键词：鹅细小病毒 vp1基因片段原核表达抗血清

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牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究

牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究

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中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会

根据GenBank中发表的已知序列设计多对特异性引物,以牛分枝干菌ValleeⅢ菌株基因组DNA为模板扩增Ag85B、esat-6、hsp65、mpb64、mpb70和mpb83基因片断,并通过SOE-PCR技术扩增Ag85B-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6和mpb70-mpb83融... 详细信息

关键词：牛分枝杆菌疫苗免疫重组质粒 DNA

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牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究

牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究

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中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议

根据Gen Bank中发表的已知序列设计多对特异性引物,以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ菌株基因组DNA为模板扩增Ag85B、esat-6、hsp65、mpb64、mpb70和mpb83基因片断,并通过SOE-PCR技术扩增Ag85B-esat-6、 hsp65-esat-6、mpb64-esat-6和mpb70-mpb83... 详细信息

关键词：牛分枝杆菌疫苗免疫重组质粒 DNA

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基于牛分枝杆菌新型重组蛋白的间接ELISA方法及其应用

基于牛分枝杆菌新型重组蛋白的间接ELISA方法及其应用

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2006中国科协年会

作者：郭设平刘思国王春来邵美丽宫强张秀华郭洋中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室

牛结核病是一种严重危害奶牛业和人类健康的人兽共患传染病,控制和消灭牛结核病是消灭人结核病的前提和基础,而快速有效的诊断是控制牛结核病的关键。PPD皮试诊断方法作为OIE法定的方法具有无可比拟的优越性。但该方法不能有效区分其他... 详细信息

牛结核病是一种严重危害奶牛业和人类健康的人兽共患传染病,控制和消灭牛结核病是消灭人结核病的前提和基础,而快速有效的诊断是控制牛结核病的关键。PPD皮试诊断方法作为OIE法定的方法具有无可比拟的优越性。但该方法不能有效区分其他分枝杆菌致敏、卡介苗(BCG)免疫和牛分枝杆菌感染;在机体因结核病情严重或混合感染免疫抑制疾病时,PPD皮试则容易出现假阳性的结果;另外,它还必须在活体上试验,不便于大规模的流行病学调查,也不能应用于回顾性的流行病学分析。因此,它需要一种高特异性和高敏感性的血清学诊断方法来弥补这些不足。ELISA方法因其快速、简

关键词：牛结核病融合蛋白间接ELISA

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磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备及特性鉴定

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中国预防兽医学报 2006年第6期28卷 701-704页

作者：丁良君李继昌周艳君付锐霍贵成张东玲东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 伊春市金山电区林业医院黑龙江伊春1500263

采用重氮化法合成磺胺二甲嘧啶(SM_2)-人血清白蛋白(HSA)免疫抗原和SM_2^-卵清白蛋白(OVA)包被抗原。经紫外光谱扫描法确认SM_2与载体蛋白偶联成功；经计算SM_2与HSA、OVA的结合比分别为9：1和15：1。利用杂交瘤技术和有限稀释法经过5... 详细信息

采用重氮化法合成磺胺二甲嘧啶(SM_2)-人血清白蛋白(HSA)免疫抗原和SM_2^-卵清白蛋白(OVA)包被抗原。经紫外光谱扫描法确认SM_2与载体蛋白偶联成功；经计算SM_2与HSA、OVA的结合比分别为9：1和15：1。利用杂交瘤技术和有限稀释法经过5次亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM_2抗体的杂交瘤细胞,经鉴定该单克隆抗体免疫球蛋白亚类为IgG_1,为入链,分子量为162Ku,染色体数目90条左右,亲和常数为6．1×10^(12)M^(-1)。与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应。

关键词：磺胺二甲嘧啶单克隆抗体酶联免疫吸附实验

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土耳其东毕吸虫原肌球蛋白基因的克隆

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 518-521页

作者：王春仁何国声石星明仇建华邢继兰许腊梅于万才黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海200232 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨15001 黑龙江省兽医科学研究所黑龙江富裕161200

根据日本血吸虫原肌球蛋白cDNA序列和曼氏血吸虫的原肌球蛋白cDNA序列M27512的保守区设计引物,采用RT-PCR方法,成功克隆了土耳其东毕吸虫的原肌球蛋白全长cDNA序列。测序结果表明,TM序列全长1125bp,5'非翻译区为1bp～124bp,3'... 详细信息

根据日本血吸虫原肌球蛋白cDNA序列和曼氏血吸虫的原肌球蛋白cDNA序列M27512的保守区设计引物,采用RT-PCR方法,成功克隆了土耳其东毕吸虫的原肌球蛋白全长cDNA序列。测序结果表明,TM序列全长1125bp,5'非翻译区为1bp～124bp,3'非翻译区为980bp～1125bp,开放阅读框为125bp～979bp,编码284个氨基酸。将该序列与其他血吸虫的序列进行同源性比较,结果与埃及血吸虫的TM同源性为90%,与曼氏血吸虫、日本血吸虫的TM同源性均为88%,该基因已经提交GenBank,序列号为AY560898。

关键词：土耳其斯坦东毕吸虫 cDNA文库原肌球蛋白基因克隆

来源：评论

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利用噬菌体随机肽库筛选传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位

利用噬菌体随机肽库筛选传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位

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2006中国科协年会

作者：邓小芸高玉龙高宏雷祁小乐程宇王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

传染性法氏囊病(Infectous bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的以侵害雏鸡中枢免疫器官——法氏囊为主要特征的传染病。IBDV属双RNA 病毒科,基因组包括大(A)小(B)两个节段,编码5... 详细信息

传染性法氏囊病(Infectous bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的以侵害雏鸡中枢免疫器官——法氏囊为主要特征的传染病。IBDV属双RNA 病毒科,基因组包括大(A)小(B)两个节段,编码5种病毒蛋白:VP1、VP2、VP3、VP4和VP5。VP1由B节段编码,具有依赖RNA的RNA聚合酶活性。其他4种病毒蛋白由A节段编码,VP4为病毒自身蛋白酶,VP5的功能尚不明确,VP2和VP3是病毒的主要结构蛋白,构成病毒衣壳。虽然VP2是IBDV主要的毒力基因,也是构象表位的集中区,但越来越多的证据佐证了VP3也是IBDV重要的毒力

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP3 抗原表位噬菌体随机15肽库

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