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鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的表达

广西农业生物科学 2006年第B9期25卷 213-214页

作者：木古丽王云峰侯绍华石星明王玫冉多良童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

根据传染性喉气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus，ILTV）SA2株ICP4基因序列设计并合成3对引物，以ILTV中国王岗株（WG）株DNA为模板扩增ICP4基因，并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别... 详细信息

根据传染性喉气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus，ILTV）SA2株ICP4基因序列设计并合成3对引物，以ILTV中国王岗株（WG）株DNA为模板扩增ICP4基因，并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别与ILTVSA-2株、BHV-1、EHV-1、EHV-4、MDV-1、MDV-2、HVT、PRV、VZV、HSV-1和HSV-2的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现，ILTV毒株之间ICP4基因相对保守，核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99．7％和99．19／5，但与其他α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低，低于3．0％。对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示，在人工感染ILTVWG株后第10460d内均能检测到低水平的ICP4特异RNA，而gB、gC、TK则未能检出。鉴于目前国内外对α-疱疹病毒潜伏感染相关基因以及ICP4基因序列和结构功能的研究，ILTVWG株ICP4基因的克隆和序列测定，以及病毒基因在潜伏感染鸡三叉神经节中的差异表达，为进一步研究ICP4基因的功能及确定潜伏感染相关基因奠定了基础。

关键词：传染性喉气管炎病毒 WG株 ICP4基因序列分析潜伏感染

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猪流感抗体间接ELISA检测方法的建立

猪流感抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：陈艳辛晓光杨焕良李婷李海燕乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

猪流感病毒(SIV)感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯SIV,纯化的SIV经NP-40处理并反复冻融,作为SI间接ELISA抗原,建立了间接ELISA检测方法.对29份HI检测SI为阴性血清的检测结果,经统计学分析,确定间接ELISA判定标... 详细信息

猪流感病毒(SIV)感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯SIV,纯化的SIV经NP-40处理并反复冻融,作为SI间接ELISA抗原,建立了间接ELISA检测方法.对29份HI检测SI为阴性血清的检测结果,经统计学分析,确定间接ELISA判定标准被检血清OD490值≥0.20判定为阳性,OD490值≤0.15判定为阴性.与HI的符合率达到92.8％.该实验方法敏感性高,为猪流感抗体提供快速、准确、简便的检测方法.

关键词：猪流感猪流感病毒间接ELISA HI检测

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H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护持续期研究

H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护持续期研究

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：姜永萍张平静左青山夏俊刘丽玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨黑龙江150001

本文对H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5免疫SPF鸡、商品蛋鸡的免疫保护持续期进行了测定.pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡,在免疫后4周、8周、28周以及50周的攻毒试验中,pCAGGoptiHA5免疫鸡均可100％的抵抗高致病性禽流感病... 详细信息

本文对H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5免疫SPF鸡、商品蛋鸡的免疫保护持续期进行了测定.pCAGGoptiHA5以10μg剂量加强免疫3周龄SPF鸡,在免疫后4周、8周、28周以及50周的攻毒试验中,pCAGGoptiHA5免疫鸡均可100％的抵抗高致病性禽流感病毒Gs/GD/1/96(H5N1)的致死性攻击,但在免疫后50周用DK/SHNH/16/04(H5N1)攻击时,其死亡保护率为7/***疫苗质粒pCAGGoptiHA5 50μg首次免疫5周龄商品蛋鸡,首次免疫后3周以同样剂量和途径两次免疫,在开产前(免疫后16周)进行第三次免疫,在免疫后4周、8周、18周、28周以及50周的攻毒试验中,pCAGGoptiHA5免疫蛋鸡均可100％的抵抗高致病性禽流感病毒的致死性攻击.结果表明,禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5可以诱导长达一年的免疫保护,具有极高的现地应用价值和开发前景.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA 疫苗免疫保护持续期

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表达鸡IFN-γ基因重组鸡痘病毒与鸡传染性法氏囊疫苗联合接种对鸡免疫应答的影响

表达鸡IFN-γ基因重组鸡痘病毒与鸡传染性法氏囊疫苗联合接种对鸡...

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：都兴洋石星明王云峰杨春富王玫童光志尹训南王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究将表达鸡IFN-γ的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN-γ)与鸡传染性法氏囊病MB43活疫苗联合接种SPF鸡,研究重组鸡IFN-γ对传染性法氏囊疫苗免疫效果的影响.结果,rFPV-IFN-γ(103PFU)和MB43活苗联合免疫组(MB43r+FPV-IFN-γ)以及重组干扰素(rI... 详细信息

本研究将表达鸡IFN-γ的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN-γ)与鸡传染性法氏囊病MB43活疫苗联合接种SPF鸡,研究重组鸡IFN-γ对传染性法氏囊疫苗免疫效果的影响.结果,rFPV-IFN-γ(103PFU)和MB43活苗联合免疫组(MB43r+FPV-IFN-γ)以及重组干扰素(rIFN-γ,200U)和MB43活苗联合免疫组(MB43+rIFN-γ)在免疫后2周即可检出ELISA抗体,比MB43单独免疫组早1周左右.在受到鸡传染性法氏囊病病毒Gx株攻击之后,MB43+rFPV-IFN-γ免疫鸡和MB43+rIFN-γ免疫鸡的脾脏只有个别淋巴细胞核浓缩、核崩解,少数滤泡萎缩变性坏死;胸腺结构清晰,仅有个别胸腺小体变性坏死,损伤程度轻于MB43单独免疫组和非免疫对照组.疫苗免疫后1周,与非免疫对照相比3个免疫组外周血CD8+T淋巴细胞含量均有显著上升,但CD4+T淋巴细胞含量变化却不明显;IBDV Gx株强毒攻击之后2周,3个疫苗免疫组CD4+、CD8+T淋巴细胞百分含量均显著升高,各组之间CD4+、CD8+T淋巴细胞百分含量无明显差异.结果表明,rFPV-IFN-γ和rIFN-γ可较全面地加强疫苗引起的免疫应答,加快疫苗诱导的体液免疫应答.

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒活疫苗 IFN-γ基因免疫应答联合接种痘病毒

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胶体金试纸条检测H5亚型禽流感病毒的研究

胶体金试纸条检测H5亚型禽流感病毒的研究

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会

作者：邓国华曲站红林涛黎玉梅熊蕊施建忠赖清金李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室漳州格林沃生物公司

用一株H5亚型特异性的流感病毒单抗标记胶体金,另一株单抗包被于硝酸纤维素膜上,建立起H5亚型特异性的胶体金层析法检测试纸条,用该试纸条可以特异性的检测出H5亚型特异性流感病毒,而其他亚型流感病毒和其他禽类病毒均不能检测到。同时... 详细信息

用一株H5亚型特异性的流感病毒单抗标记胶体金,另一株单抗包被于硝酸纤维素膜上,建立起H5亚型特异性的胶体金层析法检测试纸条,用该试纸条可以特异性的检测出H5亚型特异性流感病毒,而其他亚型流感病毒和其他禽类病毒均不能检测到。同时用HA试验进行比较,试纸条检测法的敏感性比HA试验高4倍左右,试纸条检测阳性的样品均呈现H5亚型流感病毒阳性。该试纸条可以检测临床试验感染死亡鸡的脏器匀浆液中H5亚型流感病毒的存在。

关键词：胶体金试纸条 H5亚型禽流感病毒

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H5N1禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

H5N1禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：张晓霁刘明张云刘春国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究经RT-PCR扩增了1株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA),将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体,将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒载体,... 详细信息

本研究经RT-PCR扩增了1株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA),将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体,将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒载体,经PCR鉴定得到单一的HA条带.重组杆状病毒载体在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞.通过蛋白质电泳、免疫印迹法、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:在sf9昆虫细胞中高效表达了分子量约66Kd的血凝素蛋白,用此蛋白免疫SPF鸡可产生较高效价的抗体,说明该蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性.

关键词：禽流感病毒 H5N1 血凝素杆状病毒表达 HA基因昆虫细胞生物活性

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MDCK细胞分离猪流感病毒方法的建立

MDCK细胞分离猪流感病毒方法的建立

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：陈艳乔传玲杨焕良许传田辛晓光中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

从来自全国4个省的432份样品中在犬肾传代细胞系(MDCK)成功分离并培养4株猪流感病毒.经HI试验检测为H1亚型猪流感病毒,传至4代血凝效价增高可达8log2.本试验首次在国内建立用MDCK细胞系分离猪流感病毒,为猪流感的分离建立了一个便捷,经... 详细信息

从来自全国4个省的432份样品中在犬肾传代细胞系(MDCK)成功分离并培养4株猪流感病毒.经HI试验检测为H1亚型猪流感病毒,传至4代血凝效价增高可达8log2.本试验首次在国内建立用MDCK细胞系分离猪流感病毒,为猪流感的分离建立了一个便捷,经济的新方法,同时为猪流感病毒的基础研究、诊断及分子生物学等研究奠定了基础.

关键词：猪流感病毒犬肾传代细胞系病毒分离分子生物学

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H5亚型禽流感DNA疫苗的最小免疫剂量测定

H5亚型禽流感DNA疫苗的最小免疫剂量测定

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静左青山夏俊陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨黑龙江150001

本研究将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡的最小免疫剂量进行了测定.分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5一次免疫,50μg和10μg剂量一次免疫可对免疫鸡形成100％的保护(不发病、不致死),5μg和1μg pCAGGopti... 详细信息

本研究将H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对SPF鸡的最小免疫剂量进行了测定.分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5一次免疫,50μg和10μg剂量一次免疫可对免疫鸡形成100％的保护(不发病、不致死),5μg和1μg pCAGGoptiHA5一次免疫可对免疫鸡形成62.5％(5/8)和87.5(7/8)的死亡保护;分别以50μg、10μg、5μg和1μg不同剂量pCAGGoptiHA5两次免疫后,50μg和10μg剂量两次免疫后可对免疫鸡形成100％完全保护(不发病、不致死、不排毒),5μg和1μg pCAGGoptiHA5两次免疫可对免疫鸡形成100％的保护(不发病、不致死).结果表明,DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5能使免疫鸡获得保护的最小免疫剂量为1μg,具有很高的开发应用前景.

关键词：禽流感 H5亚型 DNA疫苗最小免疫剂量

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H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对金定鸭的免疫保护效力

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对金定鸭的免疫保护效力

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：姜永萍张洪波张平静赵有淑乔传玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨黑龙江150001

亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对SPF鸡具有良好的免疫保护效果,为探讨其对鸭的免疫保护效果,本研究将pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄金定鸭,同时设油苗免疫对照组和空白对照组,加强免疫2周后用100LD50的HPAIV A/Duck/Shang... 详细信息

亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对SPF鸡具有良好的免疫保护效果,为探讨其对鸭的免疫保护效果,本研究将pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄金定鸭,同时设油苗免疫对照组和空白对照组,加强免疫2周后用100LD50的HPAIV A/Duck/ShanghaiNanhui/16/2004(H5N1)[DK/SHNH/1604(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3、5、7、14、21、28天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化.结果表明,pCAGGoptiHA5免疫鸭后可以诱导较高水平的HI抗体,并可以保护免疫鸭不发生高致病性病毒攻击后的死亡.

关键词：禽流感 pCAGGoptiHA5 鸭 DNA疫苗免疫保护

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重组核蛋白检测鸭血清禽流感抗体间接ELISA方法的建立

重组核蛋白检测鸭血清禽流感抗体间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：邓国华曲站红熊蕊黎玉梅田国彬陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本实验利用禽流感重组核蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭血清禽流感抗体的间接ELISA方法,通过对各个工作组份反应条件的优化,确定的最佳工作条件为:包被抗原1∶300稀释(蛋白含量为8μg/mL);待检血清1∶200稀释;酶标抗体1∶7000稀释;封闭... 详细信息

本实验利用禽流感重组核蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭血清禽流感抗体的间接ELISA方法,通过对各个工作组份反应条件的优化,确定的最佳工作条件为:包被抗原1∶300稀释(蛋白含量为8μg/mL);待检血清1∶200稀释;酶标抗体1∶7000稀释;封闭时间、待检血清和酶标二抗最佳作用时间均为1.5h.通过对907份鸭血清样本(包括141份免疫血清和766份现地血清)进行检测,经符合实验(AGP和HI)验证,同接ELISA方法与AGP的符合率为74.4％,与HI的符合率为95.0％,说明该检测方法具有很高的灵敏性和特异性.

关键词：禽流感重组核蛋白间接ELISA 抗体检测鸭血清

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