检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2000年第3期20卷 216-218页

作者：刘思国江国托康丽娟刘忠贵卢景良刘明春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 沈阳农业大学动物医学系辽宁沈阳110161

为了给鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)核蛋白基因的遗传变异以及主要功能区的定位研究奠定基础 ,应用特异性引物扩增了 1 0株 IBV中国分离株的核蛋白基因 ,PCR产物全长为 1 .5kb。用 Eco RV和 Kpn 限制性内切酶进行酶切修饰后 ,连接到经... 详细信息

为了给鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)核蛋白基因的遗传变异以及主要功能区的定位研究奠定基础 ,应用特异性引物扩增了 1 0株 IBV中国分离株的核蛋白基因 ,PCR产物全长为 1 .5kb。用 Eco RV和 Kpn 限制性内切酶进行酶切修饰后 ,连接到经过同样处理的载体 p UC1 1 9上。经 PCR、酶切、斑点杂交及 Southernblotting杂交鉴定 ,证实获得了含有

关键词： IBV 核蛋白基因分子克隆鸡免疫预防

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马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗gag基因的序列测定及分析

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病毒学报 2000年第4期16卷 361-364页

作者：杨威张宝山刘永刚刘胜旺孔宪刚曹殿军刘相冬卢景良刘宝全刘建华东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学公共卫生学院黑龙江哈尔滨150001

以马传染性贫血病毒 (EIAV)驴白细胞弱毒疫苗株 (DLA)病毒基因组RNA为材料 ,用RT PCR方法扩增出EIAVgag基因 ,经平端连接将其克隆到质粒载体 pUC19中。由于疫苗不是克隆株 ,因此通过 5次单独克隆与测序 ,推导出EIAV DLA gag基因的优势... 详细信息

以马传染性贫血病毒 (EIAV)驴白细胞弱毒疫苗株 (DLA)病毒基因组RNA为材料 ,用RT PCR方法扩增出EIAVgag基因 ,经平端连接将其克隆到质粒载体 pUC19中。由于疫苗不是克隆株 ,因此通过 5次单独克隆与测序 ,推导出EIAV DLA gag基因的优势序列。gag基因全长 145 8个碱基 ,编码一 486个氨基酸残基的前体蛋白。与美国EIAVWyoming 136 9株比较 ,核苷酸同源性为 80 % ,氨基酸同源性为 84 47%。其中 ,衣壳蛋白P2 6的主要同源区 (MHR)、核衣壳蛋白P11的两个CCHC型锌指结构及酸性蛋白P9的YXXL基元为高度保守的结构。为进一步研究马传染性贫血病毒弱毒疫苗的致弱机理提供了理论依据。

关键词：马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒核苷酸序列

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表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：贾永清乔传玲张建林于康震刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学动物医学院

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分... 详细信息

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分析和PCR鉴定后,利用脂质体转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒疫苗株进行共转染。经重组病毒筛选与纯化,获得遗传性状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。

关键词：禽流感 HA基因重组禽痘病毒

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我国禽流感防制研究进展

我国禽流感防制研究进展

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：于康震付朝阳崔尚金步志高唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心

动物流感研究中心的成立有力地推动了我国禽流感的防制研究工作。本文将就我国在禽流感疫情调查、诊断和监测、病毒分离鉴定、疫苗免疫、病毒分子生物学等诸多方面的研究现状作一简要综述。

关键词：禽流感防制进展

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表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十次学术研讨会

作者：贾永清乔传玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心(哈尔滨) 东北农业大中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR I 位点，将LacZ报告基因插入Sma I位点，然后切取含外源基因和报告基因的Not I片段克隆于pSY681的Not I位点，构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体，经酶切... 详细信息

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR I 位点，将LacZ报告基因插入Sma I位点，然后切取含外源基因和报告基因的Not I片段克隆于pSY681的Not I位点，构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体，经酶切分析和PCR鉴定后，利用脂质转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒苗株进行共转染。经重组病毒筛选与纯化，获得遗传性状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。

关键词：基因重组血凝素禽痘病毒

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H3N8亚型禽流感病毒分离株与变异株的生物学特性

H3N8亚型禽流感病毒分离株与变异株的生物学特性

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：崔尚金于康震唐秀英刘明田国彬刘尚高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业大学动物医学院

本研究对分离到的H3N8禽流感病毒分离株A/Chick/Jilin/98(J1株)和其传代过程中发生变异的变异株(J2株)进行了生物学和病理学特性的初步研究,发现在相同的时间内,J1株病毒致死鸡胚数量明显高于J2株病毒,病毒HA的滴度也明显高于J2株;J1株... 详细信息

本研究对分离到的H3N8禽流感病毒分离株A/Chick/Jilin/98(J1株)和其传代过程中发生变异的变异株(J2株)进行了生物学和病理学特性的初步研究,发现在相同的时间内,J1株病毒致死鸡胚数量明显高于J2株病毒,病毒HA的滴度也明显高于J2株;J1株的IPVI为1.44,而J2为0.64;毒株的致病性试验与SPF感染鸡的器官变化表明J1组的病理学变化较J2组明显,且嗜器官为肺、肝、法氏囊、胸腺、脾等主要的免疫器官;本研究还对SPF感染鸡的病变器官进行了病原学检测、病理组织检测和电镜观察。结果表明两者存在较明显的差异。

关键词：禽流感病毒 H3N8 生物学特性

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表达H5N1亚型高致病性禽流感病毒HA基因的DNA疫苗可保护SPF鸡抵抗同型病毒的致死性攻击

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 173-页

作者：姜永萍姜永萍陈化兰陈化兰于康震于康震张建林张建林步志高唐秀英田国彬中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

将高致病力禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（ＨＳＮ１）（ＧＤ／１／９６）的ＨＡ基因ｃＤＮＡ片段克隆于强启动子ＣＭＶ下游，构建了ＤＮＡ疫苗质粒ｐＣＩＨ５，对其免疫保护性进行了三批不同层次的... 详细信息

将高致病力禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（ＨＳＮ１）（ＧＤ／１／９６）的ＨＡ基因ｃＤＮＡ片段克隆于强启动子ＣＭＶ下游，构建了ＤＮＡ疫苗质粒ｐＣＩＨ５，对其免疫保护性进行了三批不同层次的动物保护试验。试验Ｉ分为两部分，第一部分为ｐＣＩＨ５一次免疫组（１０μｇ、４０μｇ、７０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ）、油苗组及空白对照组，第二部分为ｐＣＩＨ５两次免疫组（５μｇ、２０μｇ、３５μｇ、５０μｇ）及其对照组，ｐＣＩＨ５以２００μｌ腿肌两点注射，一次免疫组于免疫后３周以１０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６攻毒，两次免疫组首免后３周加强免疫一次，二免后２周以５０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６攻毒，免疫及攻毒前后均采血检测ＨＩ抗体和ＡＧＰ抗体，攻毒后７天采集泻殖腔棉拭子分离病毒。试验Ⅱ分为５０μｇ和１００μｇ（１００μｌ）两次免疫组及对照组，攻毒剂量为１０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６。试验Ⅲ为试验Ⅱ的重复试验，但免疫注射体积为２００μｌ。结果，三批试验的所有对照鸡在攻毒后２－８天全部死亡；试验Ⅰ中１０μｇ、４０μｇ、７０μｇ、１００μｇ和１５０μｇｐＣＩＨ５一次免疫，但免疫保护率分别为１２．５％（１／８?

关键词：禽流感病毒血凝索基因 DNA疫苗免疫保护

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禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 179-页

作者：马文军马文军陈化兰陈化兰于康震于康震张建林张建林田国彬唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

以脂质体转染技术构建了表达禽流感病毒（ＡＩＶ）血凝素（ＨＡ）基因的重组鸡痘病毒ｒＦＰＶ－ＨＡ，该病毒在鸡胚成纤维细胞内能稳定产生子代病毒，经翅皮下５Ｘ１０５ＰＦＵ／羽免疫８周龄ＳＰＦ鸡，免疫后第３周用１００ＥＬ... 详细信息

以脂质体转染技术构建了表达禽流感病毒（ＡＩＶ）血凝素（ＨＡ）基因的重组鸡痘病毒ｒＦＰＶ－ＨＡ，该病毒在鸡胚成纤维细胞内能稳定产生子代病毒，经翅皮下５Ｘ１０５ＰＦＵ／羽免疫８周龄ＳＰＦ鸡，免疫后第３周用１００ＥＬＤ５０的ＨＡ基因同源ＡＩＶＡ／ＡｒｆｉＳｔａｒ／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９（Ｈ７Ｎ１）进行人工感染。１周后用棉拭子于泄殖腔取样，进行病毒分离。免疫后第３周及攻毒后第１、２周对所有动物进行翅静脉采血，检测血凝抑制（ＨＩ）抗体和免疫沉淀（ＡＧＰ）抗体。结果，攻毒前重组病毒免疫组可检测到很低的ＨＩ抗体，检测不到ＡＧＰ抗体，野生型病毒（Ｆ０１７）接种组和空白对照组ＨＩ抗体和ＡＧＰ抗体均为阴性。攻毒后重组病毒免疫组的ＨＩ抗体上升速度明显高于野生型病毒接种组和空白对照组。重组病毒免疫组有６／８的鸡为流感病毒分离阴性，野生型病毒接种组和空白对照组的试验鸡病毒分离全部为阳性。这些结果表明我们所构建的表达Ｈ７亚型ＡＩＶ　ＨＡ基因的重组鸡痘病毒可诱导鸡产生有效的免疫保护反应，肠道排毒显著减少。同时也表明，重组禽痘病毒可作为一种预防禽流感候选标记疫苗，藉此可望较好地解决全病毒灭活疫苗成本高和疫苗免疫鸡与自然感染鸡?

关键词：禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒

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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 178-页

作者：乔传玲乔传玲于康震于康震贾永清刘明刘明孟庆文孟庆文田国彬唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ... 详细信息

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ鸡胚尿囊毒ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ扩增完整的ＮＡｃＤＮＡ基因，将其克隆到载体ｐＳＹ５３８中的禽痘病毒早晚期启动子ＬＰ２ＥＰ２的下游，然后再将含有启动子的ＮＡ基因片段亚克隆到已有的ＡＩＶＨＡ基因重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＬａｃＺ）中，构建了ＨＡ、ＮＡ双重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＮＡ＋ＬａｃＺ），将它与禽痘病毒疫苗株Ｓ－ＦＰＶ－０１７共转染鸡胚成纤维细胞，在Ｘ－ｇａｌ存在的条件下，经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、ＰＣＲ鉴定等，结果表明已获得一株能同时稳定表达ＨＡ和ＮＡ蛋白的重组禽痘病毒，为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：禽流感病毒血凝素基因神经氨酸酶基因重组禽痘病毒

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鸡白细胞介素-2 cDNA克隆

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南京农业大学学报 1999年第2期22卷 80-84页

作者：李祥瑞金红卢景良南京农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

用哺乳动物细胞表达克隆系统克隆了鸡ＩＬ－２ｃＤＮＡ。以ＣｏｎＡ（２０μｇ／ｍＬ）诱导ＳＰＦ鸡脾脏淋巴细胞，第２０小时收集细胞，提取ｍＲＮＡ，以ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＰｌａｓｍｉｄＳｙｓｔｅｍｆｏｒｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅ... 详细信息

用哺乳动物细胞表达克隆系统克隆了鸡ＩＬ－２ｃＤＮＡ。以ＣｏｎＡ（２０μｇ／ｍＬ）诱导ＳＰＦ鸡脾脏淋巴细胞，第２０小时收集细胞，提取ｍＲＮＡ，以ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＰｌａｓｍｉｄＳｙｓｔｅｍｆｏｒｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒合成ｃＤＮＡ，定向连结于穿梭质粒ｐＳＶ·ＳｐｏｒｔⅠ，构建ｃＤＮＡ文库。将文库分组提取重组质粒，转染ＣＯＳ－７细胞，表达ｃＤＮＡｓ。以淋巴细胞增殖试验检测表达产物ＩＬ－２活性。经过３轮筛选，获得１４个具有ＩＬ－２活性的克隆。选择其中４个进行酶切分析，结果显示这４个ｃＤＮＡ大小分别为１．５，１．０，０．８和０．８ｋｂ。

关键词：鸡白细胞介素-2 cDNA 克隆

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