检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2017年第1期47卷 109-113页

作者：朱蕴暖张鑫朱向东陈建飞时洪艳石达王鑫季朝阳冯力黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪消化道团队黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学生命科技学院黑龙江哈尔滨150030

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)直观、特异和快速的检测方法,将TGEV接种PK-15细胞后,以抗TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,荧光素FITC标记的山羊抗小鼠Ig G为二抗,建立了TGEV的间接免疫荧光(IFA)检测方法。结果显示,TGEV的最佳接种效价为... 详细信息

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)直观、特异和快速的检测方法,将TGEV接种PK-15细胞后,以抗TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,荧光素FITC标记的山羊抗小鼠Ig G为二抗,建立了TGEV的间接免疫荧光(IFA)检测方法。结果显示,TGEV的最佳接种效价为1×102TCID50,培养时间为24 h,细胞最佳固定液为40 m L/L多聚甲醛,最佳封闭条件为10 g/L BSA 37℃封闭30 min,一抗的最佳使用浓度为1 ng/L,二抗的最佳稀释度为1∶100。对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性。结果表明,建立的检测方法对TGEV具有良好的特异性。本研究建立的方法为TGEV的实验室诊断及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供了有效的检测手段。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒间接免疫荧光方法抗TGEVN蛋白单克隆抗体

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抗原处理相关转运体基因多态性与疾病相关性的研究进展

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 252-256页

作者：王兴童陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

抗原处理相关转运体(TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白,具有高度多态性,主要功能是将胞质中加工产生的抗原肽转运到内质网腔,与主要组织相容复合体(MHC)Ⅰ类分子组装形成抗原肽-MHCI复合物后转运至细胞表面,被CD8^+T淋巴细胞识别,诱导机... 详细信息

抗原处理相关转运体(TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白,具有高度多态性,主要功能是将胞质中加工产生的抗原肽转运到内质网腔,与主要组织相容复合体(MHC)Ⅰ类分子组装形成抗原肽-MHCI复合物后转运至细胞表面,被CD8^+T淋巴细胞识别,诱导机体产生细胞免疫应答。某些特定的人类疾病同TAP的多态性相关,包括多种肿瘤疾病、自身免疫疾病和传染性疾病等。本文就实验动物的TAP基因在与疾病相关性方面的比较医学研究进展做一综述。

关键词：抗原处理相关转运体(TAP) 多态性疾病相关性

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鹅细小病毒VP3蛋白抗血清的制备及在鸭胚和鸭胚成纤维细胞中的增殖研究

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 240-243页

作者：牛银杰刘柏含赵丽丽孙畅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

目的制备鹅细小病毒(GPV)VP3衣壳蛋白的兔抗血清,在绍兴麻鸭鸭胚及其成纤维细胞中成功增殖GPV。方法根据GPVH分离株的VP3基因序列构建原核表达载体pET3a-VP3,诱导纯化VP3蛋白,皮下注射免疫新西兰白兔,收集和纯化VP3抗血清,经Western blo... 详细信息

目的制备鹅细小病毒(GPV)VP3衣壳蛋白的兔抗血清,在绍兴麻鸭鸭胚及其成纤维细胞中成功增殖GPV。方法根据GPVH分离株的VP3基因序列构建原核表达载体pET3a-VP3,诱导纯化VP3蛋白,皮下注射免疫新西兰白兔,收集和纯化VP3抗血清,经Western blotting检测VP3抗血清与VP3蛋白的反应性。GPVH株鹅胚尿囊液接种SPF绍兴麻鸭胚和其成纤维细胞,通过PCR反应和间接免疫荧光方法,检测GPV在鸭胚及其成纤维细胞中的增殖。结果成功制备了VP3的兔抗血清,同时GPV在鸭胚及其成纤维细胞中进行良好增殖。结论 VP3抗血清的制备及GPV在绍兴麻鸭鸭胚及成纤维细胞中的增殖实验为GPV分子生物学特性及致病机制的研究奠定基础。

关键词：鹅细小病毒(GPV) VP3基因 VP3抗血清增殖

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Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法的建立

Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法的建立

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：赵丽丽刘海燕徐丽晶王怡平陆涛峰陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

目的为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法。方法根据NCBI公布的来自我国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化。结果该方法敏... 详细信息

目的为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法。方法根据NCBI公布的来自我国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化。结果该方法敏感性高,最低能检出5.3pg Ⅰ型鸭肝炎病毒和2.7pg鸭瘟病毒的RNA或DNA模板。其特异性强,对番鸭细小病毒(MDPV),鹅细小病毒(GPV),新城疫病毒(NDV)和流感病毒(AIV),鸭减蛋综合征病毒(EDSV),禽网状内皮组织增生症病毒(REV),鸭坦布苏病毒(DTMUV),禽呼肠弧病毒(ARV)8种病毒的检测均为阴性,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒检测结果为阳性。用建立的方法检测了江苏徐州采集的100份样品,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的阳性率分别为1.2%和26%。结论建立了Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒鸭瘟病毒一步法PCR 应用

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鸭瘟病毒在鸭胚脐带间充质干细胞上生物学特性的研究

鸭瘟病毒在鸭胚脐带间充质干细胞上生物学特性的研究

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：徐丽晶陆涛峰王怡平陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况.本实验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代致第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等方法分析其生物学特性,并测定了连续10代的病... 详细信息

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况.本实验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代致第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等方法分析其生物学特性,并测定了连续10代的病毒滴度(TCID50).第一代DPV即在鸭胚脐带间充质干细胞上产生了明显的CPE,并且在连续传代的过程中CPE能够稳定出现.电镜观察显示,初步提纯的病毒悬浮液在电镜下可见到结构清晰的子代病毒.PCR检测结果显示,F1～F10代DPV均能扩增出大小为416bp的UL6基因片段.间接免疫荧光又进一步证实DPV的阳性血清能够对染毒病灶产生特异性荧光染色.而且连续测定10代的病毒滴度(TCID50)均不低于10-6.43.说明DPV能在鸭胚脐带间充质干细胞上稳定增殖.本研究有望为获得高纯度鸭瘟病毒及细胞源疫苗研究提供理论基础.

关键词：鸭瘟病毒鸭胚脐带间充质干细胞适应性病毒增殖

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上海市一起蛋鸡心包积水-肝炎综合征的紧急流行病学调查

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中国动物检疫 2017年第9期34卷 7-10页

作者：杨德全朱九超齐新永鞠厚斌周锦萍刘春国王靖飞上海市动物疫病预防控制中心上海201103 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

2016年7月1日,上海市某蛋鸡场62日龄蛋鸡出现发病和死亡现象,多次用抗生素治疗无效。为详细了解鸡场发病情况,分析导致疫病发生的风险因素,以便及时提出行之有效的防控建议,通过询问、现场调查和实验室诊断等方式开展了紧急流行病学调查... 详细信息

2016年7月1日,上海市某蛋鸡场62日龄蛋鸡出现发病和死亡现象,多次用抗生素治疗无效。为详细了解鸡场发病情况,分析导致疫病发生的风险因素,以便及时提出行之有效的防控建议,通过询问、现场调查和实验室诊断等方式开展了紧急流行病学调查;采用描述性流行病学方法,对疫情特点、发病风险因素进行了分析。实验室诊断结果显示,Ⅰ群血清4型腺病毒核酸阳性。调查发现:发病的前一周,该地气温波动剧烈,造成鸡只应激;鸡场生物安全体系不健全,无针对车辆和人员的消毒措施。结合临床症状、病理剖检和实验室诊断结果,确诊该鸡场暴发了心包积水-肝炎综合征,是由Ⅰ群血清4型腺病毒引起的。通过注射特异性卵黄抗体及对症治疗,对可能引起此次暴发的风险因素进行控制,疫情得到了有效控制。

关键词：蛋鸡心包积水-肝炎综合征 .群血清4型腺病毒暴发调查风险因素

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SPF大白猪和长白猪群体生理生化特性分析

SPF大白猪和长白猪群体生理生化特性分析

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：权金强高彩霞江新杰李昌文路小野赵生国陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070

目的：研究分析SPF大白猪、长白猪生殖生理和血液生理生化特性。方法：常规方法测定SPF大白猪、长白猪群体10项生殖生理指标、19项血液生理和18项血液生化指标，统计分析各指标在不同群体、不同年龄、不同性别间的差异。结果：... 详细信息

目的：研究分析SPF大白猪、长白猪生殖生理和血液生理生化特性。方法：常规方法测定SPF大白猪、长白猪群体10项生殖生理指标、19项血液生理和18项血液生化指标，统计分析各指标在不同群体、不同年龄、不同性别间的差异。结果：SPF大白猪、长白猪生殖生理指标和血液大部分生理生化指标差异不显著（P＞0.05)，个别指标如血液生理指标GRAN、HGB、RDW、PLT、PCT,血液生化指标ALKP、CHOL、TBIL、BUN在品种间、不同年龄以及不同性别之间差异显著（P＜0.05)，但其偏离正常值范围较小。结论：SPF大白猪、长白猪在生殖生理和血液生理生化等方面基本稳定，与其它实验用小型猪相比差异不大，本研究为其标准化饲养、动物模型的构建以及封闭群猪群遗传质量的评价提供了重要的基础数据。

关键词：实验用猪大白猪长白猪生殖生理指标血液生化指标

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中国预防兽医学报 2017年第2期39卷 111-114页

作者：陈莹汪洋于颖李媛王琪邵家日王显兵周长平李继昌辛九庆东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 湖北工业大学生物工程与食品学院湖北武汉430065 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病团队黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

Toll样受体2(TLR2)在鸡毒支原体(MG)诱导天然免疫反应机制中的作用尚未明确。为鉴定TLR2在MG脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导细胞表达IL-1β中的作用,本研究通过RT-PCR和ELISA方法检测LAMPs刺激后DF-1细胞中IL-1β的m RNA和蛋白水平,结果显示... 详细信息

Toll样受体2(TLR2)在鸡毒支原体(MG)诱导天然免疫反应机制中的作用尚未明确。为鉴定TLR2在MG脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导细胞表达IL-1β中的作用,本研究通过RT-PCR和ELISA方法检测LAMPs刺激后DF-1细胞中IL-1β的m RNA和蛋白水平,结果显示LAMPs可以诱导DF-1细胞分泌IL-1β,并确定最佳刺激时间为6 h,最佳刺激剂量为1μg/m L。此外,通过构建TLR2重组表达质粒p CMV-HA-TLR2,并将该质粒转染DF-1细胞进行过表达及通过抗体封闭TLR2的两种处理方式,处理后采用LAMPs刺激细胞。经检测显示:TLR2过表达处理组的IL-1βm RNA和蛋白水平显著升高,而抗体处理组的IL-1βm RNA和蛋白水平下调。结果表明,LAMPs能够与DF-1细胞膜上的TLR2受体结合,有效的诱导DF-1细胞表达并分泌IL-1β,而且IL-1β的释放可能与天然免疫系统的经典通路即NF-κB信号通路调控有关。本研究为阐述MG的致病机制提供相关实验依据。

关键词：鸡毒支原体脂质相关膜蛋白（LAMPs） TLR2

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层析技术制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒F(ab’)_2

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中国生物制品学杂志 2017年第4期30卷 417-423,428页

作者：邱泊宁王翀赵永坤胡星星王化磊曹增国盖微微崔健男闫飞虎杨松涛夏咸柱吉林大学动物医学学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

目的采用层析技术制备高纯度的马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrom coronavirus,MERS-CoV)F(ab’)_2。方法以MERS-CoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,采用亲和层析技术提取血清IgG,经胃蛋白酶酶切后,通过阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析分别对F(ab’)_2进行纯化;以MERS假病毒检测所制备的IgG与F(ab’)_2中和活性。结果凝胶过滤层析实现了F(ab’)_2的高纯度分离,最终制备的F(ab’)_2收率约70%,纯度为93%以上,具有良好的中和活性,其半数抑制浓度(IC_(50))为5.13μg/ml。结论制备了高纯度马抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2,为人用抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2生产工艺的建立奠定了基础。

关键词：中东呼吸综合征冠状病毒病毒样颗粒层析免疫球蛋白

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基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α的结合能分析

基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α...

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：张圆圆周妍刁晨曦陆涛峰赵丽丽韩凌霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/实验动物与比较医学团队

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结... 详细信息

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结合能。结果 E2和ZEN与ERα的结合能分别为-11.5 kcal·mol和-8.6 kcal·mol;两者都位于疏水性较强的活性口袋中,苯环都与Phe-404和Arg-394形成了CH-π和阳离子-π的相互作用;E2的羟基分别5个氨基酸形成氢键,其中一个羟基与水分子形成了保守的氢键。结论分子对接提供了E2和ZEN分别与ERα结合的相互作用力的可视化分析结果,证明了ZEN与ERα具有亲和力,但低于E2。

关键词：玉米赤霉烯酮雌激素受体α 分子对接结合能

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